DB37T 575-2005 饲料中氯羟吡啶的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120 B20 DB37 山东省地方标准 DB 37/T 5752005 饲料中氯羟吡啶的测定 高效液相色谱法 Determination of clopidol in Feeds High-Performance Liquid Chromatography 2006-01-23 发布 2006-03-01 实施山东省质量技术监督局 发 布 山东省地方标准公开山东省地方标准公开DB37/T5752005 II 前 言 本标准由山东省畜牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提出。本标准负责起草单位：山东省饲料监察所。本标准主要起草人：李俊玲、强莉、宫玲玲、刘华阳、王琳、李会荣。山东省地方标准公开山东省地方标准公开DB37/T5752005 1 饲料中氯羟吡啶的测定-高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中氯羟吡啶的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中氯羟吡啶的测定，最低定量限为10mg/kg。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 试样中的氯羟吡啶用甲醇提取。提取液经净化，在HPLC反相柱上分离，紫外检测器270nm处测定。4 试剂和溶液 除非另有说明，本标准所用试剂为分析纯，色谱用超纯水符合GB/T6682一级水的规定。4.1 甲醇。4.2 甲醇：色谱纯，过 0.45m 有机系滤膜。4.3 乙腈：色谱纯，过 0.45m 有机系滤膜。4.4 磷酸氢二钠：优级纯。4.5 磷酸二氢钾：优级纯。4.6 HPLC 流动相 4.6.1 磷酸盐缓冲溶液 称取 2.09克磷酸氢二钠（4.4）和1.40克磷酸二氢钾（4.5）溶于超纯水中，调节pH=7，并定容至500mL。过0.45m水系滤膜。4.6.2 HPLC 流动相：磷酸盐缓冲溶液（4.6.1）乙腈（4.3）=8515。混合，脱气后备用。4.7 氯羟吡啶标准溶液 4.7.1 氯羟吡啶标准贮备液 称取氯羟吡啶纯品（含量不少于99.8%）10mg(准确至0.1mg)，用甲醇(4.2)溶解并定容至100mL。其浓度为100g/mL，贮存于0-8冰箱中。溶液有效期1个月。4.7.2 氯羟吡啶标准工作液 精密量取标准贮备液(4.7.1)1.00mL，用甲醇(4.2)定容至10mL。该溶液浓度为10g/mL。现用现配。4.7.3 标准系列 山东省地方标准公开山东省地方标准公开DB37/T5752005 2 精确吸取标准工作液(4.7.2)1.00 mL、5.00mL,以及标准储备液(4.7.1)1.00 mL、2.00 mL、5.00mL,分别用甲醇（4.2）稀释至10mL。该标准系列中氯羟吡啶的相应浓度分别为:1.00g/mL、5.00g/mL、10.00g/mL、20.00g/mL、50.00g/mL。现用现配。5 仪器设备 5.1 分析天平：感量 0.1mg。5.2 超声波清洗器。5.3 振荡器。5.4 高效液相色谱仪：具有C18柱和紫外检测器。5.5 针头过滤器：孔径为0.45m有机系滤膜。6 试样的制备 实验室样品用四分法缩减，分取200g左右，粉碎全部过0.45mm孔径筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。7 分析步骤 7.1 提取 称取适量试样(配合饲料5g，浓缩饲料、添加剂预混合饲料1 g2g)精确至0.1mg，置于100ml具塞三角瓶中，准确加入甲醇（4.1）50mL，振摇使试料全部润湿，放在振荡器上振荡提取20min，静置数分钟，取适量上清液，并用甲醇稀释至10 mL使获得的溶液中每毫升含氯羟吡啶1g50g，过0.45m有机系滤膜（5.6）,滤液待测。7.2 测定 7.2.1 高效液相色谱参考条件 色谱柱:C18柱 柱长250mm，内径4.6mm，粒度5m。柱温:室温。流动相:磷酸盐缓冲液乙腈=8515。流速:1.0mL/min。检测器:紫外检测器。检测波长:270nm。进样量:20L。7.2.2 定量测定 按高效液相色谱仪器说明书调整仪器操作参数。向色谱柱中分别注入标准溶液（4.7.3）和试样溶液（7.1），积分得到峰面积，用标准曲线定量。8 结果计算 8.1 计算公式 氯羟吡啶的含量（X），以毫克每千克表示，按公式(1)计算：DmmX=1 (1)式中:m1试样色谱峰面积对应的氯羟吡啶的质量为微克，g；m 试料质量为克，g；D稀释倍数。山东省地方标准公开山东省地方标准公开DB37/T5752005 3 8.2 以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。计算结果保留三位有效数字。9 精密度 9.1 重复性 同一实验室两次独立测定结果的相对偏差不大于10%。9.2 再现性 不同的实验室间两次独立测定结果的相对偏差不大于20%。_ _ 山东省地方标准公开山东省地方标准公开