TZNZ 162-2023 葡萄中链霉素和双氢链霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICS 65.020.99CCS B90T/ZNZ浙 江 省 农 产 品 质 量 安 全 学 会 团 体 标 准T/ZNZ 1622023葡萄中链霉素和双氢链霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法Determination of streptomycin and dihydrostreptomycin residues in grape-method of liquid chromatography-tandem mass spectrometry2023-01-18 发布2023-02-18 实施浙江省农产品质量安全学会发 布全国团体标准信息平台T/ZNZ 1622023I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。本文件起草单位：浙江省农业科学院农产品质量安全与营养研究所。本文件主要起草人：刘真真、王新全、王强、齐沛沛、王娇、狄珊珊、赵慧宇、汪志威、徐浩。全国团体标准信息平台T/ZNZ 16220231葡萄中链霉素和双氢链霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法1范围本文件规定了葡萄中链霉素和双氢链霉素残留量检测的液相色谱-串联质谱方法。本文件适用于葡萄中链霉素和双氢链霉素残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理葡萄试样匀浆后采用磷酸水溶液提取，经高速离心，固相萃取柱净化后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。4试剂和材料除特别注明外，分析时使用试剂均为色谱纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的一级水。4.1 甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）。4.2 甲酸（HCOOH，CAS号：64-18-6）。4.3 磷酸（H3PO4，CAS号：7664-38-2）。4.4 1-己烷磺酸钠（C6H13NaO3S，CAS号：2832-45-3）：分析纯。4.5 标准品硫酸链霉素（C42H84N14O36S3，CAS号：3810-74-0）和硫酸双氢链霉素（C42H88N14O36S3，CAS号：5490-27-7）：纯度98.0%。4.6 甲醇-水溶液（40+60，V/V）：准确量取40.0 mL甲醇（4.1），用水定容至100 mL。4.7 硫酸链霉素和硫酸双氢链霉素标准储备液（1000 mg/L，分别以链霉素和双氢链霉素）：准确称取硫酸链霉素和硫酸双氢链霉素标准品均约12.5 mg，精确到0.0001 g，置于10 mL容量瓶中，用甲醇-水溶液（4.6）溶解并定容至刻度，配制成质量浓度为1000 mg/L的标准储备溶液。在-18 避光保存，有效期为6个月。4.8 硫酸链霉素和硫酸双氢链霉素标准工作溶液（100 mg/L和10 mg/L）：分别移取1.0 mL和0.1 mL的链霉素和双氢链霉素标准储备溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇-水溶液（4.6）分别定容，配制成浓度为100 mg/L和10 mg/L的标准工作溶液，0 4下避光保存，有效期为1个月。4.9 磷酸水溶液（pH=2.0）：量取适量水，用磷酸（4.3）调节至pH=2.0。4.10 1-己烷磺酸钠溶液（0.5 mol/L）：称取9.41 g 1-己烷磺酸钠（4.4），用水溶解，转移至100 mL容量瓶后，加水定容，摇匀。4.11 甲酸-甲醇溶液（10+90，V/V）：准确量取100.0 mL甲酸（4.2），用甲醇（4.1）定容至1000 mL。4.12 甲酸-水溶液（1+999，V/V）：准确量取1.00 mL甲酸（4.2），用水定容至1000 mL。4.13 甲酸水-甲醇溶液（60+40，V/V）：准确量取60.0 mL甲酸-水溶液（4.12），用甲醇（4.1）定容至100 mL。全国团体标准信息平台T/ZNZ 162202324.14 固相萃取柱：苯乙烯二乙烯苯-N-乙烯基吡咯烷酮聚合物柱（6 mL，500 mg）或相当者。4.15 微孔滤膜：0.22 m，有机相，或相当者。5 仪器设备5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2 分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。5.3 离心机：转速不低于8000 r/min。5.4 涡旋混合仪。5.5 固相萃取装置。5.6 氮吹仪。5.7 组织捣碎机。5.8 超声波清洗仪（频率：40 KHz）。6 试验步骤6.1 试样制备和保存葡萄样品全果（去柄），用组织捣碎机匀浆后，装入洁净容器，密封，置于-18冷冻保存。6.2 提取称取试样约5 g（精确到0.01 g），置于 50 mL 离心管中，准确加入 10 mL 磷酸水溶液（4.9），置于超声清洗仪中超声萃取 15 min，涡旋混合 1 min，在 8000 r/min下离心 3 min，取全部上清液；随后向上清液中加入 2 mL 1-己烷磺酸钠（4.10），涡旋混匀，静置 10 min，待净化。6.3 净化固相萃取柱（5.5）固定在固相萃取装置上，依次用 5 mL甲醇（4.1）、5 mL水对固相萃取柱进行预活化，然后将上述待净化液（6.2）以小于1.5 mL/min流速通过固相萃取柱，待样液全部通过，固相萃取柱近干后，依次用 5 mL 磷酸水溶液（4.9）、10 mL水淋洗固相萃取柱，弃去全部流出液。负压抽干固相萃取柱，用 6 mL 甲酸-甲醇溶液（4.11）进行洗脱，收集全部洗脱液。将洗脱液置于氮吹仪上，35下氮气吹干后，残留物用 1 mL甲酸水-甲醇溶液（4.13）溶解，涡旋混匀后，经 0.22 m滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱仪分析。7 测定7.1 液相色谱-串联质谱测定7.1.1 液相色谱参考条件液相色谱条件如下：a）色谱柱：T3 色谱柱，100 mm2.1 mm（内径）,1.8 m粒径，或相当者。b）柱温：35。c）进样量：2 L。d）流动相及洗脱条件：流动相A为0.1%甲酸水（4.12），流动相B为甲醇（4.1），A:B（V/V）=60:40（V/V）等度洗脱。e）流速：0.3 mL/min。7.1.2 质谱参考条件质谱条件如下：全国团体标准信息平台T/ZNZ 16220233a）离子源：电喷雾离子源（ESI）。b）扫描方式：正离子扫描。c）检测方式：多反应监测（MRM）。d）电喷雾电压：3500 V。e）离子源温度：400。f）接口温度：300。g）雾化气流量：3.0 L/min。h）干燥气流量：10.0 L/min。i）加热气流量：10.0 L/min。j）质谱参数见表1。表1 链霉素和双氢链霉素质谱参数条件化合物名称保留时间（min）定量离子对（m/z）定性离子对（m/z）碰撞能量（eV）链霉素（Streptomycin）0.68582.3/263.1582.3/263.1;582.3/246.031;39双氢链霉素（Dihydrostreptomycin）0.68584.2/263.1584.2/263.1;584.2/246.133;41注：7.1.2的质谱条件仅供参考，当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳7.2 基质匹配标准工作溶液配制称取空白葡萄样品，按照 6.2 和 6.3 部分进行前处理，获得空白基质提取液。精准吸取一定体积的链霉素和双氢链霉素标准溶液分别加到空白基质提取液中，配制质量浓度为 0.002 mg/L、0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.025 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.25 mg/L 和 0.40 mg/L 的系列标准工作溶液，或根据仪器响应与实际情况配制适当浓度范围的标准曲线。经液相色谱-串联质谱仪分析后，以链霉素和双氢链霉素的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准溶液曲线。基质标准工作液应现用现配。7.3 定性测定依据上述条件进行样品测定分析，样品中检出的色谱峰保留时间与基质标准溶液中目标物的保留时间相一致（2.5%）；所选择的两对离子对均出现，且定性离子对的离子丰度比偏差不超过表2规定的范围，可判定样品中存在对应的待测物残留。表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差离子丰度比（%）502050102010允许最大偏差（%）202530507.4 定量测定外标法定量：链霉素和双氢链霉素的多反应监测（MRM）色谱图见附录A。7.5 平行试验按照上述6.2、6.3和7.1的步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.6 空白试验除不称取试样外，均按上述6.2、6.3和7.1的步骤进行。8 试验数据处理试样中链霉素或双氢链霉素残留量以质量分数计，单位为毫克每千克（mg/kg），按公式（1）或（2）计算：全国团体标准信息平台T/ZNZ 16220234式中：试样中链霉素和双氢链霉素含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；1基质匹配标准工作溶液中被测物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）;2从基质匹配标准工作曲线中获得的试样溶液中被测物的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；A试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积；As基质匹配标准工作溶液中被测物的质量色谱图峰面积；V试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m试样溶液的质量，单位为克（g）；1000 换算系数；计算结果应扣除空白值，测定结果以重复条件下获得 2 次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字。9 灵敏度和精密度9.1 灵敏度本方法链霉素和双氢链霉素的定量限（LOQ）为 0.0050 mg/kg。9.2 精密度在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的 15%。全国团体标准信息平台T/ZNZ 16220235附录A（资料性）链霉素和双氢链霉素多反应监测（MRM）色谱图链霉素和双氢链霉素的基质标准溶液、基质添加样品和空白基质样品的多反应监测（MRM）色谱图见图A.1。图 A.1 链霉素和双氢链霉素基质标准溶液（0.025 mg/kg）、基质添加样品（0.025 mg/kg）和空白基质样的多反应监测（MRM）色谱图全国团体标准信息平台