动物医学进展,２０２３,４４(８):２８Ｇ３３ProgressinVeterinaryMedicine非洲猪瘟病毒p７２蛋白可溶性表达及鉴定收稿日期:２０２２Ｇ０８Ｇ１６基金项目:江苏省重点研发计划(现代农业)重点项目(BE２０２０３９８,BE２０２１３３１);江苏省农业自主创新资金项目(CX(２１)２０３５);扬州大学科技创新团队项目(２０１６)作者简介:黄霞(１９９６－),女,江苏常州人,博士研究生,主要从事非洲猪瘟免疫逃逸机制及疫苗研究.∗通讯作者黄霞,康喜龙,韩顺子,孟闯,潘志明∗,焦新安(扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室/扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心/扬州大学农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室/扬州大学农业与农产品安全国际合作联合实验室,江苏扬州２２５００９)摘要:为获得可溶性的非洲猪瘟病毒(ASFV)p７２蛋白,将重组质粒pColdⅠＧp７２分别与５种分子伴侣质粒进行融合表达,SDSＧPAGE鉴定表达产物;以重组蛋白HisＧp７２免疫小鼠制备多克隆抗体,通过Westernblot和间接免疫荧光方法鉴定多克隆抗体与真核表达蛋白的免疫反应性.结果显示,重组蛋白HisＧp７２与伴侣蛋白pGＧTf２或pTf１６共表达后,实现了可溶性表达.以可溶性HisＧp７２蛋白免疫小鼠后,获得HisＧp７２多克隆抗体,抗体效价达到１∶５１２０００;Westernblot和间接免疫荧光的试验结果显示多抗血清可特异性识别真核表达的p７２蛋白.说明利用分子伴侣融合表达的ASFVp７２可溶性蛋白具有较好的免疫反应性,为抗ASFV药物的研发提供了候选蛋白.关键词:非洲猪瘟病毒;p７２蛋白;分子伴侣;可溶性表达;多克隆抗体中图分类号:S８５２．６５９．１;S８５８．２８文献标识码:A文章编号:１００７Ｇ５０３８(２０２３)０８Ｇ００２８Ｇ０６非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)引起的猪高致死性出血性疾病,在我国被列为一类动物疫病.自２０１８年８月传入我国以来,迅速蔓延全国,对我国的养猪业造成了严重的经济损失[１].现今在尚无安全有效疫苗的情况下,许多学者将目光投向了抗病毒药物,以期为ASFV的防控提供新思路,小分子抑制剂就是其中一类具有潜力的靶向药物[２].ASFV属于非洲猪瘟病毒科,是非洲猪瘟病毒属的唯一成员,系目前已知唯一由虫媒介导的大型双链DNA囊膜病毒[３].根据不同毒株,ASFV基因组的长度约为１７０~１９４kb,有１５０~１６７个开放阅读框(openreadingframe,ORF),可编码１５０~２００种蛋白质[...
