从玻璃虾苗病致病菌的分离鉴...南美白对虾玻璃虾苗病的防控_曹海鹏.pdf

技术学堂TECHNOLOGY FORUM 20237当代水产075从玻璃虾苗病致病菌的分离鉴定谈南美白对虾玻璃虾苗病的防控 曹海鹏 杨月琪 郑绪瑞 滕晨皓（上海海洋大学国家水生动物病原库 上海 201306）表1 潜在致病菌株的鉴定结果近年来，玻璃虾苗病已经严重威胁着我国对虾的育苗和养殖产业。该病以白或花色的肝胰腺、空肠为典型病症，具有极强的传染性，感染率可达60%以上，给我国对虾种苗产业造成了巨大经济损失。目前，在生产实践中，通常使用抗菌药治疗玻璃虾苗病，但治疗效果往往差强人意，其主要原因是对该病的致病菌及其潜在敏感药物的认识不清。鉴此，笔者对福建漳州、山东日照等地虾苗场患病的南美白对虾虾苗进行致病菌的分离鉴定和药敏特性分析，同时提出了南美白对虾玻璃虾苗病防控的一点看法，以供养殖户参考。1 基本情况2023年3月，福建漳州、山东日照等地的南美白对虾苗场出现了玻璃虾苗病，发病率高达80%以上，对当地南美白对虾种苗业造成了巨大损失。鉴于苗场技术人员使用各种抗菌药均未奏效且对该病的致病菌不清楚，笔者对患病虾苗进行了致病菌的分离鉴定及药敏特性分析。2 临床症状及诊断分析肉眼检查：病虾食欲减退，空肠空胃（图1）。解剖检查：病虾肝胰腺呈苍白或花色，出现坏死症状。实验室检查：从病虾肝胰腺组织中通过弧菌选择性培养基（TCBS）平板分离出棕黄、深黄、黄绿、浅绿、深绿、墨绿等颜色菌落的菌株45株，经溶血活性和蛋白酶活性检测，证实14株分离株12、15、19、27、32、RZ21、RZ22、RZ23、RZ31、RZ34、RZ35、YJ1、YJ3、YJ5具有溶血活性或（和）蛋白酶活性。人工感染试验进一步表明，该14株图1 患病虾苗注：+，阳性；-，阴性分离株对虾苗具有致病性。经分子鉴定和生理生化鉴定，分离株12、15、19、27、32为铜绿假单胞菌，RZ21、RZ22、RZ23、RZ31、RZ34为海藻希瓦菌，RZ35副溶血弧菌，YJ1、YJ3、YJ5美人鱼发光杆菌（表1）。2.1 药敏特性分析技术学堂TECHNOLOGY FORUM076当代水产 20237 20237当代水产076广告通过药敏纸片法对分离的致病菌株进行抗菌药敏感性分析，证实14株分离菌株对氟苯尼考、硫酸新霉素、多西环素、复方新诺明等水产用兽药均呈现不同程度耐药，对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、哌拉西林、头孢氨苄、头孢唑林、头孢拉定、头孢呋辛、头孢他啶、头孢曲松、头孢哌酮、多粘菌素B等青霉素类、头孢类、多肽类抗生素也产生了不同程度的耐药。3 小结3.1 玻璃虾苗病的发生不单单是由一种致病菌导致，不同地区玻璃虾苗病也可能由不同致病菌造成或同一致病菌的不同菌株造成本实例中从福建漳州、山东日照等虾苗场中分离到铜绿假单胞菌、海藻希瓦氏菌、副溶血弧菌以及美人鱼发光杆菌等四种不同的致病菌，其中福建漳州虾苗场以铜绿假单胞菌为主，而山东日照虾苗场却并未分离得到铜绿假单胞菌，可能与虾苗场的饵料、水源不同有关。3.2 在TCBS平板上形成的菌落不一定是弧菌海藻希瓦菌隶属于希瓦菌科、希瓦菌属，已被证实对半滑舌鳎、东风螺、鲍鱼具有致病性；铜绿假单胞菌隶属于假单胞菌科、假单胞菌属，已被证实对草鱼具有致病性。3.3 不能凭菌落颜色判定菌株是否致病在分离的呈现不同颜色菌落的45株菌株中，仅铜绿假单胞菌、海藻希瓦菌、副溶血弧菌、美人鱼发光杆菌具有潜在致病性。然而，铜绿假单胞菌在TCBS平板上形成的菌落颜色不一致，呈现棕黄、黄绿2种颜色；海藻希瓦菌在TCBS平板上形成的菌落颜色不一致，呈现深绿、浅绿、墨绿等3种颜色；美人鱼发光杆菌在TCBS平板上形成的菌落颜色也不一致，呈现黄绿、浅绿等2种颜色；副溶血弧菌在TCBS平板上形成的菌落颜色为深黄色，与常见报道的绿色菌落不一致。因此，在生产上不能依靠TCBS平板进行致病菌检测，判定菌株是否具有潜在致病性，至少应进行菌株的毒素检测。3.4 致病菌的多样性表明，不能仅针对某一种病原如副溶血弧菌进行玻璃虾苗病的防控本案例共检出海藻希瓦氏菌、副溶血弧菌、美人鱼发光杆菌和铜绿假单胞菌，展现出致病菌具有明显的菌种和菌株多样性。因此，对于玻璃虾苗病的防控应使用广谱控菌的绿色环保产品进行防控。3.5 14株分离的致病菌株对氟苯尼考、硫酸新霉素、多西环素、复方新诺明等水产用兽药呈现不同程度耐药说明致病菌株的耐药性进化速度快，生产上应避免化学抗菌剂的重复过量使用，建议选用安全高效的广谱抑菌抗病微生物菌剂，通过调节虾体内外微生物菌群平衡达到理想效果。