TZNZ 136-2022 蔬菜中多菌灵残留的快速检测 胶体金免疫层析法.pdf

ICS 65.100.01 CCS B 90 T/ZNZ 浙 江 省 农 产 品 质 量 安 全 学 会 团 体 标 准 T/ZNZ 1362022 蔬菜中多菌灵残留的快速检测 胶体金免疫层析法 Rapid detection of carbendazim residue in vegetables Colloidal gold immunochromatography 2022-11-11 发布 2022-12-11 实施 浙江省农产品质量安全学会 发 布 全国团体标准信息平台T/ZNZ 1362022 I 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。本文件起草单位：绿城农科检测技术有限公司。本文件主要起草人：倪娟桢、沈雄雅、赵月钧、周敏、陆雯、巩佳第、董振华、周婷婷、刘芯成、徐子健。全国团体标准信息平台T/ZNZ 1362022 1 蔬菜中多菌灵残留的快速检测 胶体金免疫层析法 1 范围 本文件规定了蔬菜中多菌灵残留的胶体金免疫层析快速检测方法。本文件适用于胡萝卜、菜用大豆、莲子（鲜）和莲藕等蔬菜中多菌灵残留的快速检测。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 本法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的多菌灵经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体与试纸条检测线（T线）上人工抗原的结合，从而导致T线颜色深浅的变化。通过T线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中多菌灵残留量进行定性判定。4 试剂与材料 除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的二级水。4.1 试剂 4.1.1 甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1）。4.1.2 提取液：由胶体金免疫层析试纸条配套提供，或按照其说明书配制。4.2 标准物质 多菌灵标准物质（C9H9N3O2，CAS 号：10605-21-7），纯度99.0%。4.3 标准溶液配制 4.3.1 多菌灵标准储备液（100 g/mL）：取多菌灵（4.2）标准物质约 1 mg 于 10 mL 烧杯中，加入约5 mL 甲醇（4.1.1）溶解，转移至 10 mL 容量瓶中，用甲醇（4.1.1）定容至刻度，摇匀，避光-18及以下条件保存，有效期 6 个月。4.3.2 多菌灵标准工作液（10 g/mL）：精密移取多菌灵标准储备液（4.3.1）1 mL 至 10 mL 容量瓶中，用甲醇（4.1.1）定容至刻度，摇匀。现配现用。4.4 材料 多菌灵胶体金免疫层析试纸条，按产品要求保存。5 仪器设备 全国团体标准信息平台T/ZNZ 1362022 2 5.1 电子天平：感量 0.01 mg 和感量 0.01 g。5.2 组织捣碎机。5.3 移液器：10 L100 L，100 L1000 L，5 mL10 mL。5.4 计时器。5.5 便携式读数仪。测量波长：525 nm。6 试样制备 样品测定部位按照GB 2763中附录A的规定执行。采用对角线分割法，取对角部分，于清洁的无色聚乙烯塑料薄膜上，将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机捣碎成匀浆，制成待测样品。7 试验步骤 称取1 g试样（精确至0.01 g）于15 mL离心管中，加入8 mL提取液（4.1.2），剧烈振荡1 min，静置5 min，上清液为待测液。取出所需数目的试纸条（4.4），恢复至室温，吸取待测液100 L滴加于试纸条加样孔中，反应6 min后读取检测结果。注1：试验步骤建议按照试纸条说明书操作。8 质量保证和控制 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。空白试验样品测定结果应为阴性，加标质控试验样品测定结果应为阳性。8.1 空白试验 称取空白试样，其余按照步骤7操作。8.2 加标质控试验 在空白试样中加入相应残留限量浓度的多菌灵标准工作液（4.3.2），其余按照步骤7操作。9 结果判定 9.1 读数仪测定 9.1.1 如果使用读数仪进行结果判定，应于反应完成 5 min 内读取结果。9.1.2 读数仪的使用参照使用说明书。9.1.3 阴性结果 R1.0，阳性结果 R1.0。R 为检测线峰面积与控制线峰面积的比值。9.2 目视判定 通过对比C线和T线的颜色深浅进行结果判定。目视判定示意图见图1。9.2.1 空白 空白为未使用的全新试纸条。9.2.2 无效 C 线不显色，无论 T 线是否显色，表明操作不正确或试纸条已失效，检测结果无效。全国团体标准信息平台T/ZNZ 1362022 3 9.2.3 阴性（-）C 线显色，T 线颜色深于 C 线或与 C 线颜色基本一致，表明样品中多菌灵含量低于方法检出限，判为阴性。9.2.4 阳性（+）C 线显色，T 线不显色或颜色浅于 C 线，表明样品中多菌灵含量高于方法检出限，判为阳性。图 1 目视判定示意图 10 结果确认 当检测结果为阳性时，应按照GB 2763指定方法标准进行确证。11 性能指标 11.1 胡萝卜、菜用大豆、莲子（鲜）和莲藕检出限为 0.2 mg/kg。11.2 灵敏度：95%，计算方法参见附录 A。11.3 特异性：90%，计算方法参见附录 A。11.4 假阴性率：5%，计算方法参见附录 A。11.5 假阳性率：10%，计算方法参见附录 A。12 其他 本方法所述试剂、材料及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者应使用经过验证的满足本方法规定的各项性能指标的试剂和试纸条。全国团体标准信息平台T/ZNZ 1362022 4 附 录 A（规范性）快速检测方法性能指标计算方法 性能指标计算方法见表 A.1。表 A.1 性能指标计算表 样品情况a 检测结果b 总数 阳性 阴性 阳性 N11 N12 N1.=N11+N12 阴性 N21 N22 N2.=N21+N22 总数 N.1=N11+N21 N.2=N12+N22 N=N1.+N2.或 N.1+N.2 显著性差异（2）2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21），自由度（df）=1 灵敏度（p+，%）p+=N11/N1.特异性（p-，%）p-=N22/N2.假阴性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-灵敏度 假阳性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特异性 相对准确度，%c（N11+N22）/(N1.+N2.)a 由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b 由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。C 为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。_ _ _ 全国团体标准信息平台