TSSX 002-2022 谷物中硒代蛋氨酸、硒酸盐和亚硒酸盐的测定 液相色谱-电感耦合等离子体质谱联法.pdf

ICS 67.050A 019T/SSX 0022022谷物中硒代蛋氨酸、硒酸盐和亚硒酸盐的测定 液相色谱电感耦合等离子体质谱联法Determination of selenomethionine,selenate and selenitein cereals by liquid chromatography-inductively coupledplasma mass spectrometry2022-10-18 发布2022-11-18 实施陕西省食品科学技术学会发布团体标准全国团体标准信息平台T/SSX 0022022I目次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 方法原理.14 试剂和材料.15 仪器与设备.26 分析步骤.27 分析结果表述.38 精密度.4附 录 A.5全国团体标准信息平台T/SSX 0022022II前言本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则和 GB/T20001.4-2015标准编写规则 第 4 部分：试验方法标准给出的规则起草。本文件由陕西省食品科学技术学会提出。本文件由陕西省食品科学技术学会归口。本文件起草单位：安康市富硒产品研发中心、北京市疾病预防控制中心、陕西国硒谷富硒产品研发中心有限公司。本文件主要起草人：刘丽萍、唐德剑、陈绍占、孟莉、许亚丽、贺博、夏曾润、刘鑫、卜贤盼、张珂、黄波、杜小平、祁蒙。本文件系首次发布。全国团体标准信息平台T/SSX 00220221谷物中硒代蛋氨酸、硒酸盐和亚硒酸盐的测定液相色谱电感耦合等离子体质谱用法1范围本文件规定了液相色谱电感耦合等离子体质谱联用法测定谷物中硒代蛋氨酸、硒酸盐和亚硒酸盐含量的方法。本文件适用于大米和小麦中硒代蛋氨酸、亚硒酸盐和硒酸盐的测定；玉米中硒代蛋氨酸和硒酸盐的测定。当样品称样量为0.3 g，提取液体积为5 mL时，硒代蛋氨酸方法定量限为0.015 mg/kg、硒酸盐方法定量限为0.010 mg/kg、亚硒酸盐方法定量限为0.007 mg/kg。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3方法原理试样中硒代蛋氨酸、硒酸盐和亚硒酸盐通过蛋白酶酶解后，经离子交换色谱柱分离，电感耦合等离子体质谱仪测定，以色谱保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，本法所用试剂均为分析纯，试验用水为 GB/T6682 规定的一级水。4.1试剂4.1.1磷酸氢二铵（(NH4)2HPO4）。4.1.2蛋白酶XIV：生化试剂（酶活力3.5 U/mg 固体）。4.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.2试剂配制4.2.1甲酸溶液（10%，v/v）：准确量取 10 mL 甲酸，缓慢加水稀释至 100 mL，混匀。4.2.2流动相配制（40 mmol/L 磷酸氢二铵溶液，pH=6.0）：称取2.6412 g 磷酸氢二铵，用水稀释至500 mL，用甲酸溶液（4.2.1）调节pH 值至6.0，混匀，于超声水浴中超声脱气 10 min，备用，临用现配。4.3标准品4.3.1硒代蛋氨酸（C5H11NO2Se，CAS 号：9001-05-2），纯度98%。4.3.2硒酸钠（Na2O4Se，CAS 号：13410-01-0），纯度99%4.3.3亚硒酸钠（Na2O3Se，CAS 号：10102-18-8），纯度99%4.4标准溶液4.4.1硒代蛋氨酸标准溶液（1.0 mg/mL，以 Se 计）：准确称取 0.2480 g 硒代蛋氨酸标准品，用水溶解并定容至 100 mL，配制成 1.0 mg/mL 硒代蛋氨酸标准溶液，2 8 避光保存，保存期 6 个月。或购买国家有证硒代蛋氨酸溶液标准物质（C5H11NO2Se，GBW 10034）。全国团体标准信息平台T/SSX 002202224.4.2硒酸根标准溶液（1.0 mg/mL，以 Se 计）：准确称取 0.2393 g 硒酸钠标准品，用水溶解并定容至 100 mL，配制成 1.0 mg/mL 硒酸根标准溶液，2 8 避光保存，保存期 6 个月。或购买国家有证硒酸根溶液标准物质（SeO42-，GBW 10033）。4.4.3亚硒酸根标准溶液（1.0 mg/mL，以 Se 计）：准确称取 0.2190 g 亚硒酸钠标准品，用水溶解并定容至 100 mL，配制成 1.0 mg/mL 亚硒酸根标准溶液，2 8 避光保存，保存期 6 个月。或购买国家有证亚硒酸根溶液标准物质（SeO32-，GBW 10032）。4.4.4单标准储备溶液（10.0 g/mL，以 Se 计）：分别吸取一定量的硒代蛋氨酸标准溶液（4.4.1）、硒酸根标准溶液（4.4.2）、亚硒酸根标准溶液（4.4.3），用水逐级稀释配制成 10.0 g/mL 的单标准储备溶液，2 8 避光保存，保存期 6 个月。4.4.5混合标准系列溶液：分别准确吸取 1.0 mL 浓度为 10.0 g/mL 的硒代蛋氨酸、硒酸根、亚硒酸根（4.4.4）标准储备液于 10 mL 容量瓶中，用水稀释定容至刻度，配制成 1.0 g/mL 的硒形态混合标准溶液。再用水逐级稀释浓度为 1.0 g/mL 的硒形态混合标准溶液，配制成浓度为 0.0 g/L、2.0 g/L、5.0 g/L、10.0 g/L、50.0 g/L、100.0 g/L、200.0 g/L 的混合标准系列溶液，临用现配。注：可根据样品中硒代蛋氨酸、硒酸盐、亚硒酸盐的实际含量适当调整标准系列溶液中硒代蛋氨酸、硒酸根、亚硒酸根的质量浓度。5仪器与设备5.1液相色谱电感耦合等离子体质谱联用仪（LC-ICP-MS）。5.2天平：感量分别为 0.01 mg、0.1 mg 和 1 mg。5.3低温离心机：转速9000 r/min。5.4恒温超声波清洗器：可控温 0 80（温度精度2）5.5pH 计：精度为 0.01。5.6高速粉碎机：转速3000 r/min。5.7水系滤膜：0.22 m。6分析步骤6.1样品预处理大米、小麦、玉米等样品去杂物后粉碎，并过 60 目筛混合均匀，装入洁净聚乙烯瓶中，于干燥处密封保存备用。6.2试样提取称取 0.1 g0.5 g（精确到 0.001 g）样品，置于 15 mL 离心管中，加入 5 mL 水和 20 mg 蛋白酶 XIV，涡旋 30 s，37 水浴超声 3 h，期间振摇数次。静置 10 min，4 下以 9000 r/min 离心 10 min，取上清液过 0.22 m 滤膜，待测。同时做空白试验。注：样品提取后可于 4 存储，建议 5 h 之内完成测定（可根据样品中硒形态含量不同适当调整称样量、提取液体积及蛋白酶 XIV 的量）。6.3测定6.3.1液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：色谱柱：阴离子交换柱（250 mm4.1 mm，10 m）或等效色谱柱；阴离子交换预柱（20 mm2.1mm，10 m）或等效色谱预柱。全国团体标准信息平台T/SSX 00220223流动相：40 mmol/L(NH4)2HPO4，pH=6.0。流速：1.0 mL/min；进样量：100 L。6.3.2电感耦合等离子体质谱仪参考条件电感耦合等离子体质谱仪参考条件如下：射频功率：1200 W1550 W；采样深度：8 mm。雾化室温度：2；载气流量：0.65 L/min。补偿气流量：0.45 L/min；碰撞气流量（He 气）：4.5 mL/min。检测质量数：78；积分时间：0.5 s；蠕动泵转速：0.3 r/s。6.3.3标准曲线的制作设定仪器最佳条件，待基线稳定后，将硒代蛋氨酸、硒酸根和亚硒酸根混合标准系列溶液（4.4.5）按质量浓度由低到高分别注入液相色谱电感耦合等离子体质谱联用仪中进行测定，以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。6.3.4试样测定依次将空白溶液和试样溶液注入液相色谱电感耦合等离子体质谱联用仪中，得到色谱图，以色谱保留时间进行定性。根据标准曲线得到试样溶液中硒代蛋氨酸、硒酸根、亚硒酸根的浓度，平行测定次数不少于两次。硒形态混合标准溶液与不同谷物样品中的硒形态色谱图参见附录 A。7分析结果表述试样中硒代蛋氨酸含量按照公式（1）计算，硒酸盐含量按照公式（2）计算，亚硒酸盐含量按照公式（3）计算。10001000m1000V)cc(fX0111（1）10001000m1000V)cc(fX0222（2）10001000m1000V)cc(fX0333（3）式中：X1试样中硒代蛋氨酸的含量（以Se 计），单位为毫克每千克（mg/kg）；X2试样中硒酸盐的含量（以Se 计），单位为毫克每千克（mg/kg）；X3试样中亚硒酸的含量（以Se 计），单位为毫克每千克（mg/kg）；f稀释倍数；c01经标准曲线得到的空白溶液中硒代蛋氨酸的浓度，单位为微克每升（g/L）；c02经标准曲线得到的空白溶液中硒酸盐的浓度，单位为微克每升（g/L）；c03经标准曲线得到的空白溶液中亚硒酸盐的浓度，单位为微克每升（g/L）；c1经标准曲线得到的测定液中硒代蛋氨酸的浓度，单位为微克每升（g/L）c2经标准曲线得到的测定液中硒酸盐的浓度，单位为微克每升（g/L）；c3经标准曲线得到的测定液中亚硒酸盐的浓度，单位为微克每升（g/L）；V加入提取试剂的体积，单位为毫升（mL）；1000 换算系数；全国团体标准信息平台T/SSX 00220224m试样称样量，单位为克（g）。当硒代蛋氨酸、硒酸盐、亚硒酸盐含量1.00 mg/kg 时，计算结果保留三位有效数字，当硒代蛋氨酸、硒酸盐、亚硒酸盐含量1.00 mg/kg 时，计算结果保留两位有效数字。8精密度相同条件下，平行独立测定结果的相对相差值应符合表 1 规定。表 1 平行样测定的相对相差值硒形态的含量（mg/kg）0.10.11.01.0平行样的相对相差（%）251510全国团体标准信息平台T/SSX 00220225附录A（资料性）硒形态混合标准溶液与不同谷物样品中的硒形态色谱图A.1硒形态混合标准溶液色谱图见图A.1。注：1硒代胱氨酸；2亚硒酸根；3硒代蛋氨酸；4硒酸根。图A.1硒形态混合标准溶液色谱图（50 g/L）A.2玉米中硒形态色谱图见图A.2。注：1硒代胱氨酸；2亚硒酸根；3硒代蛋氨酸；4硒酸根。图A.2 玉米中硒形态色谱图全国团体标准信息平台T/SSX 00220226A.3大米中硒形态色谱图见图A.3。注：1硒代胱氨酸；2亚硒酸根；3硒代蛋氨酸；4硒酸根。图A.3 大米中硒形态色谱图A.4小麦中硒形态色谱图见图A.4。注：1硒代胱氨酸；2亚硒酸根；3硒代蛋氨酸；4硒酸根。图 A.4 小麦中硒形态色谱图全国团体标准信息平台