TSATA 060-2023 菜心中丙环唑的快速检测方法 胶体金免疫层析法.pdf

ICS 67.050 CCS X 04 团体标准 T/SATA 0602023 菜心中丙环唑的快速检测方法 胶体金免疫层析法 Rapid Detection of Propiconazole in Choy Sum Colloidal Gold Immunochromatographic Assay 2023-04-18 发布 2023-05-18 实施 深圳市分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台T/SATA 0602023 I 目次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 原理.1 5 试剂与材料.1 试剂.1 参考物质.1 标准溶液的配置.2 丙环唑免疫层析试剂盒.2 6 仪器和设备.2 7 环境条件.2 8 分析步骤.2 试样制备.2 试样提取.2 测定步骤.2 质控实验.2 9 结果判读.3 无效.3 阳性结果.3 阴性结果.3 质控实验要求.3 10 结论.3 11 方法性能指标.3 12 其他.3 附录A （规范性）快速检测方法性能指标计算表.5 全国团体标准信息平台T/SATA 0602023 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由深圳市分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：华南农业大学、深圳市计量质量检测研究院，深圳市易瑞生物技术股份有限公司。本文件主要起草人：雷红涛，冯荣虎，张世伟，徐振林，王珍妮，关甜，沈兴，莫秋华，王炳志，严义勇。全国团体标准信息平台T/SATA 0602023 1 菜心中丙环唑的快速检测方法 胶体金免疫层析法 1 范围 本方法规定了菜心中丙环唑胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于菜心中丙环唑的快速定性测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中丙环唑与胶体金标记的丙环唑特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上丙环唑抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对样品中目标丙环唑进行定性判定。5 试剂与材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T 6682 规定的二级水。试剂 5.1.1 甲醇（CH3OH）：分析纯。5.1.2 乙酸乙酯（C4H8O2）:分析纯。5.1.3 氯化钠（NaCl）：分析纯。5.1.4 氯化钾（KCl）：分析纯。5.1.5 磷酸氢二钠（Na2HPO4）：分析纯。5.1.6 磷酸二氢钾（KH2PO4）：分析纯。5.1.7 稀释液：准确称量 2.90 g 磷酸氢二钠，0.20 g 磷酸二氢钾，8.5 g 氯化钠，0.2 g 氯化钾与 1 L 容量瓶中，加水定容，混合均匀后备用，有效期一个月。参考物质 参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度99%。表1 丙环唑中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 丙环唑 Propiconazole 60207-90-1 C15H17Cl2N3O2 342.22 全国团体标准信息平台T/SATA 0602023 2 注：或等同可溯源物质。标准溶液的配置 5.3.1 丙环唑标准储备液（1 000 g/mL）：精密称量 10 mg 丙环唑标准品（4.2），置于 10 mL 容量瓶中，用甲醇（4.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为 1000 g/mL 的丙环唑标准储备液；或可直接购买丙环唑标准储备液。04避光保存备用，有效期 3 个月。5.3.2 丙环唑标准工作液（10 g/mL）：吸取丙环唑标准储备液（1000 g/mL）（4.3.1）1 mL 于 100 mL 容量瓶中，用甲醇（4.1.1）稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为 10 g/mL 的丙环唑标准工作液，临用现配。丙环唑免疫层析试剂盒 5.4.1 金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。5.4.2 丙环唑试纸条。6 仪器和设备 移液器：10 L、100 L、200 L、1 mL、5 mL。涡旋混合器。氮气吹干仪。离心机 电子天平：感量分别为 0.01 g 和 0.1 mg。7 环境条件 15 35，湿度80%。8 分析步骤 试样制备 称取约 100 g 菜心（去除根），充分剪碎混匀，分为两份分别装入洁净容器内作为试验和留样，密封，标记。留样置于-18 以下保存。试样提取 准确称量样品 5.00 g 于 50 mL 离心管中，加入 25 mL 乙酸乙酯（4.1.2），涡旋 5 min，随后5 000 rpm,离心 5 min，在 60 氮气下吹干，加入 2.5 mL 稀释液（4.1.7），混合均匀，即得到待测溶液。测定步骤 吸取 150 L200 L 样品待测液于金标微孔（4.4.1）中，抽吸 510 次至金标微孔底部的紫红色薄层沉淀物完全溶解，不要有气泡，反应 5 min，将检测试纸条（4.4.2）样品端垂直向下插入金标微孔中，测试 5 min，从微孔中取出试纸条，进行结果判定。注：试剂条（或检测卡）具体检测步骤可参考相应的说明书操作。质控实验 8.4.1 空白试验：准备空白样品，按照 7.2 和 7.3 步骤与样品同法操作。8.4.2 加标质控实验：准确称取空白试样 5 g（精确至 0.01 g）置于 50 mL 离心管中，加入 25 L 丙环唑工作溶液（10 g/mL）（4.3.2），使试样中丙环唑浓度为 50 g/kg，按照 7.2 和 7.3 步骤与样品同法操作。注：每批样品应同时进行空白试验和加标质控实验。全国团体标准信息平台T/SATA 0602023 3 9 结果判读 通过对比控制线和检测线的颜色深浅进行结果判定。由于长时间放置会引起检测线颜色的变化，需在规定时间内（反应结束后 5 min 内）进行结果判定。目视结果判读依据如图1所示。无效 控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条无效。阳性结果 控制线（C线）显色，检测线（T线）不显色或颜色浅于控制线（C线），表明样品中丙环唑含量高于方法检测限，判定为阳性（如图1试纸条目测判定示意图）。阴性结果 控制线（C线）显色，检测线（T线）颜色深于或等于控制线（C线），表明样品中丙环唑含量低于方法检测限，判定为阴性（如图1试纸条目测判定示意图）。图1 试纸条目测判定示意图 质控实验要求 空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。10 结论 当检测结果为阳性时，应对结果进行确证。11 方法性能指标 按附录 A 的规定计算快速检测方法性能指标。检出限：50 g/kg。灵敏度：95%。特异性：:85%。假阴性率：5%。假阳性率：15%。12 其他 全国团体标准信息平台T/SATA 0602023 4 本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定，可根据试剂盒说明书进行操作。方法使用者应使用经过验证的满足本方法规定的各项性能指标的试剂、试剂盒。本方法参比标准为水果和蔬菜中 450 种农药及相关化学残留的测定 液相色谱-串联质谱法（GB/T 20769-2008）。当结果判定为阳性时，应采用水果和蔬菜中 450 种农药及相关化学残留的测定 液相色谱-串联质谱法（GB/T 20769-2008）对结果进行验证。全国团体标准信息平台T/SATA 0602023 5 A A 附录A （规范性）快速检测方法性能指标计算表 表A.1 性能指标计算方法 样品情况 检测结果 总数 阳性 阴性 阳性 N11 N12 N1.=N11+N12 阴性 N21 N22 N2.=N21+N22 总数 N.1=N11+N21 N.2=N12+N22 N=N1.+N2.或N.1+N.2 显著性差异（X2）X2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21），自由度（df）=1 灵敏度（p+，%）p+=N11/N1.特异性（p-，%）p-=N22/N2.假阴性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-灵敏度 假阳性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特异性 相对准确度，%（N11+N22）/(N1.+N2.)由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。全国团体标准信息平台