细菌感染的检查方法与法治原则.ppt

支支 原原 体、衣体、衣 原原 体、立体、立 克克 次次 体体 主讲老师：江振友主讲老师：江振友 支原体属和脲原体属支原体属和脲原体属 支原体（支原体（Mycoplasma）1.1.能在人工培养基中生长能在人工培养基中生长 2.2.能独立生活能独立生活 3.3.最小原核细胞型最小原核细胞型微生物微生物 4.4.无细胞壁无细胞壁 5.5.二分裂繁殖二分裂繁殖 6.6.多形态性多形态性,“油煎蛋样油煎蛋样”菌落菌落 分分 类类 柔膜体纲柔膜体纲(Mollicutes)(Mollicutes)支原体目支原体目(MycoPlasmatales)(MycoPlasmatales)下分下分3 3个科：个科：支原体科（支原体科（MycoPlasmataceaeMycoPlasmataceae）；）；2 2个属个属:支原体（支原体（MycoplasmaMycoplasma）脲原体（脲原体（UreaplasmaUreaplasma）无胆甾原体科（无胆甾原体科（AcholeplasmaAcholeplasma-taceaetaceae），），生长时不需要外源性胆固醇；生长时不需要外源性胆固醇；螺原体科（螺原体科（SpiroplasmataceaeSpiroplasmataceae），），生长至一定阶段呈螺形。生长至一定阶段呈螺形。人体分离人体分离:20:20种，种，其中其中8 8种是致病或条件致病菌种是致病或条件致病菌:肺炎支原体肺炎支原体(M.pneumoniae,Mpn)(M.pneumoniae,Mpn)生殖支原体生殖支原体(M.geuitalium,Mg)(M.geuitalium,Mg)人型支原体人型支原体(M.hominis,Mh)(M.hominis,Mh)发酵支原体发酵支原体(M.fermentants,Mf)(M.fermentants,Mf)穿透支原体穿透支原体(M.penetrans,Mpe)(M.penetrans,Mpe)梨支原体梨支原体(M.pirum,Mpi)(M.pirum,Mpi)关节炎支原体关节炎支原体(M.arthritidis,Mart)(M.arthritidis,Mart)解脲脲原体解脲脲原体(U.urealyticum,Uu)(U.urealyticum,Uu)支原体与细菌支原体与细菌L L型比较型比较 性状 支原体 细菌L型 滤过性 有 有 细胞壁 无 无 油煎蛋状菌落 形成 形成 对青霉素 抵抗 抵抗 对胆固醇需要 生长需要 不一定需要 来源 自然界、人与动物 由细菌在环境条件下诱导形成 回复变成细菌 不能 能 遗传性 与细菌无关 与原细菌相同 肺肺炎支原体炎支原体 形态与结构形态与结构 大大 小小:可通过滤器可通过滤器,光镜下可观察光镜下可观察 细胞壁细胞壁:无无 形形 态态:球形、球杆形、分枝丝状或念珠状等球形、球杆形、分枝丝状或念珠状等 细胞膜细胞膜:三层三层:1.:1.蛋白质蛋白质 2.2.脂质脂质(胆固醇较多胆固醇较多)3.3.蛋白质蛋白质 染染 色色:姬姆萨染色法姬姆萨染色法:淡紫色或蓝色淡紫色或蓝色 核核 酸酸:二种二种(DNA(DNA和和 RNA)RNA)生长繁殖生长繁殖 繁殖方式繁殖方式:二分裂方式二分裂方式 球体延伸球体延伸、分节断裂分节断裂、出芽出芽、分枝分枝 繁殖周期繁殖周期:3 3小时小时 营养要求营养要求:较高较高,含动物血清含动物血清、酵母浸液酵母浸液 酸酸 碱碱 度度:pHpH7 7.8 88 80 0 气体环境气体环境:5 5COCO2 2或或5 5COCO2 2与与9595N N2 2 温度与时间温度与时间:3737,3 3d d1010d d 菌落特征菌落特征:“油煎蛋油煎蛋”状菌落状菌落 表表252 支原体与脲原体的某些生物学特性支原体与脲原体的某些生物学特性 抗原构造抗原构造 主要抗原成分主要抗原成分:1 1.蛋白质蛋白质 P P1 1蛋白抗原蛋白抗原:表面抗原表面抗原 致病致病:粘附粘附 2 2.脂质中的糖脂脂质中的糖脂 抗体抗体:产生补体结合抗体产生补体结合抗体 生长抑制抗体生长抑制抗体 代谢抑制抗体代谢抑制抗体 抵抗力抵抗力 理化因素理化因素:比细菌敏感比细菌敏感(因无细胞壁因无细胞壁)热热:弱弱,50,50经经30min30min死亡死亡 2020可长期保存可长期保存 耐碱耐碱 酸和有机溶剂酸和有机溶剂:较敏感较敏感(消毒剂、清洁剂消毒剂、清洁剂)四环素族、红霉素、卡那霉素、氯霉素四环素族、红霉素、卡那霉素、氯霉素:敏感敏感 青霉素青霉素:不敏感不敏感 致病性致病性 外源性感染外源性感染 上呼吸道感染上呼吸道感染:感冒感冒、咽炎咽炎、气管炎气管炎 支原体性肺炎支原体性肺炎 （MycoplasmalMycoplasmal pneumoniapneumonia）(原发性非典型肺炎原发性非典型肺炎)（primaryprimary atypicalatypical pneumoniapneumonia）临床表现和胸部临床表现和胸部X X线线:肺炎链球菌引起的典型肺炎不同肺炎链球菌引起的典型肺炎不同 类似病毒性肺炎类似病毒性肺炎 世界各地世界各地,密集人群密集人群,儿童及青少年多见儿童及青少年多见 秋冬季发病率高秋冬季发病率高,每隔每隔3 35 5年出现一次流年出现一次流行行 飞沫传播飞沫传播 潜伏期潜伏期2 2W W3 3W,W,感染起病缓慢感染起病缓慢 临床主要症状临床主要症状:发热发热（约约3939）、头痛头痛、持续性顽固咳嗽持续性顽固咳嗽、胸痛等胸痛等。病人带菌病人带菌、排菌状态可持续排菌状态可持续6 6W W8 8W W 肺外合并症肺外合并症（神经系统神经系统、消化系统及心脏消化系统及心脏等等）发病率高发病率高，严重者可致死严重者可致死 致病性致病性:粘附是先决条件粘附是先决条件 也和超敏反应有关也和超敏反应有关(共同抗原共同抗原)免疫性免疫性 抗体：多种抗体：多种(CF(CF抗体、生长抑制抗体、抗体、生长抑制抗体、杀支原体抗体等杀支原体抗体等)呼吸道呼吸道sIgA:sIgA:有一定作用有一定作用 非特异冷凝集素非特异冷凝集素:1.1.和自身免疫有关和自身免疫有关 2.2.患者阳性率为患者阳性率为5050，常用于辅助诊断。常用于辅助诊断。微生物学检查法 病原分离病原分离 特异核酸的检测特异核酸的检测 血清学诊断血清学诊断 抗原检测抗原检测 冷凝集试验冷凝集试验 病原分离病原分离 标标 本：咽拭子或痰液本：咽拭子或痰液 培养基：双相培养基（含马血清、酵母浸液）培养基：双相培养基（含马血清、酵母浸液）SP-4培养基（提高分离率培养基（提高分离率3040）气体环境：气体环境：510CO2 温度与时间：温度与时间：37，l2W 可疑菌落：可疑菌落：1.1.糖发酵糖发酵 2.2.溶血性溶血性 3.3.血细胞吸附血细胞吸附 4.4.特异抗血清生长抑制试验等特异抗血清生长抑制试验等 特异核酸的检测特异核酸的检测 （1 1）聚合酶链反应聚合酶链反应(PCR)(PCR)：优点：特异性好优点：特异性好 敏感性高敏感性高 快速快速、简便简便 靶基因：靶基因：1616S S RNARNA基因基因 P P1 1蛋白基因蛋白基因 方法：套式方法：套式PCR(nPCR)PCR(nPCR)复合复合PCRPCR 限制性片段长度多态性分析限制性片段长度多态性分析(RFLP)(RFLP)随机引物随机引物PCR(RAPD)PCR(RAPD)（2 2）基因探针）基因探针 根据碱基严格互补配对的特性根据碱基严格互补配对的特性 特异性强，敏感性不如特异性强，敏感性不如PCRPCR技术技术 血清学诊断血清学诊断 （1 1）补体结合试验补体结合试验（CFTCFT）：双份抗体效价升高双份抗体效价升高4 4倍以上倍以上诊断诊断 （2 2）间接血凝试验间接血凝试验（IHAIHA）：测抗体测抗体,2 23 3周高峰周高峰 （3 3）酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA)(ELISA)：测测IgMIgM、IgGIgG和和IgAIgA 敏感性高敏感性高 （4 4）间接免疫荧光试验：间接免疫荧光试验：检测检测IgMIgM、IgGIgG 特异性较强特异性较强 抗原检测抗原检测 方法方法1:1:间接法或直接法间接法或直接法 抗体抗体:荧光标记多克隆抗体或单克隆抗体荧光标记多克隆抗体或单克隆抗体 检测标本检测标本:呼吸道分泌物中抗原呼吸道分泌物中抗原 86%86%可阳性可阳性 方法方法2:2:双抗体夹心酶联免疫吸附试验双抗体夹心酶联免疫吸附试验 检测标本检测标本:呼吸道分泌物中抗原呼吸道分泌物中抗原 可检出可检出10105 5 CFU/mlCFU/ml 方法方法3:3:酶联免疫吸附试验捕获法酶联免疫吸附试验捕获法 抗体抗体:抗抗P1P1单克隆抗体单克隆抗体 检测标本检测标本:P1:P1蛋白蛋白 可检出可检出10104 4CFU/mlCFU/ml 特异性强特异性强,3,3小时即可小时即可 冷凝集试验冷凝集试验 辅助诊断非典型肺炎辅助诊断非典型肺炎 针对红细胞膜针对红细胞膜抗原抗原 冷凝集素属冷凝集素属IgM IgM 5d5d10d10d出现，出现，2W2W3W3W高峰高峰 辅助诊断效价辅助诊断效价:64:64128128倍以上倍以上 双份效价升高双份效价升高4 4倍以上倍以上 特异性和敏感性较低特异性和敏感性较低 防防 冶冶 药物药物:四环素类四环素类(近年来耐药性增加近年来耐药性增加)大环内酯类大环内酯类:首选首选 (红霉素、克拉霉素、阿奇霉素红霉素、克拉霉素、阿奇霉素)喹诺酮类喹诺酮类 疫苗疫苗:减毒活疫苗减毒活疫苗 基因工程疫苗基因工程疫苗 其它支原体其它支原体 寄生部位寄生部位:鼻咽腔及泌尿生殖道粘膜鼻咽腔及泌尿生殖道粘膜 属于正常菌群属于正常菌群,引起条件性感染引起条件性感染 口腔支原体口腔支原体:慢性呼吸道感染慢性呼吸道感染 唾液支原体唾液支原体:齿槽溢脓齿槽溢脓 生殖支原体生殖支原体:生殖道、呼吸道和关节腔的炎症生殖道、呼吸道和关节腔的炎症,流产、早产和新生儿肺炎流产、早产和新生儿肺炎 发酵支原体发酵支原体:类风湿性关节炎类风湿性关节炎 AIDSAIDS相关相关(分离率明显升高分离率明显升高)人型支原体人型支原体:渗出性咽炎、渗出性咽炎、非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎 (nongonococcal urithritis,NGU),卵巢脓肿、卵巢脓肿、产褥败血症产褥败血症 脲原体属脲原体属(Ureaplasma)从支原体分出的独立的新属从支原体分出的独立的新属 正常菌群正常菌群:绝大多数绝大多数 有致病性有致病性:解脲脲原体解脲脲原体 （U.urealyticum,Uu)U.urealyticum,Uu)19541954年从年从NGUNGU患者的病灶处分离患者的病灶处分离 类似肺炎支原体类似肺炎支原体 能水解尿素能水解尿素 生物学性状生物学性状 形态形态:圆形或球杆状圆形或球杆状 染色染色:革兰染色阴性革兰染色阴性 温度和酸碱度温度和酸碱度:37,pH 6.0:37,pH 6.0 菌落菌落:很小很小(15(15 m m6060 m,m,放大放大200200倍倍),),称称T T株（株（Tiny colony strainTiny colony strain）敏感性敏感性:敏感敏感:四环素、氯霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、卡那霉素、0.05%0.05%醋酸铊、醋酸铊、125125 g/ml 5g/ml 5-碘碘-2 2脱氧尿苷脱氧尿苷 不敏感不敏感:青霉素青霉素 生化特性生化特性:水解尿素产氨水解尿素产氨 致病性致病性 存存 在在:人和动物的口腔人和动物的口腔、呼吸道呼吸道、泌尿生殖道泌尿生殖道 血清型血清型:解脲脲原体解脲脲原体(Uu)(Uu)有有1414个血清型个血清型 传播途径传播途径:性接触传播性接触传播、母婴传播母婴传播 所致疾病所致疾病 (STD)STD)泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染:NGUNGU 、盆腔感染盆腔感染、宫颈宫颈 炎炎、阴道炎阴道炎、输卵