TGZTPA 0001-2021 贵州茶叶中风味挥发性物质的测定 气相色谱质谱法.pdf

T/GZTPA团团 体体 标标 准准T/T/GZTPAGZTPA 0000001 1-2021-2021贵州茶叶中风味挥发性物质的测定气相色谱质谱法Determination of volatile flavoured compounds in Guizhou teaGas chromatography mass spectrometry2021-11-25 发布2021-11-26 实施贵贵 州州 省省 绿绿 茶茶 品品 牌牌 发发 展展 促促 进进 会会发布发布T/GZTPA0001-2021I前言本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由贵州省农产品质量安全监督检验测试中心提出。本文件由贵州省绿茶品牌发展促进会提出并归口。本文件起草单位：贵州省农产品质量安全监督检验测试中心、广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、贵州省绿茶品牌发展促进会。本文件主要起草人：李俊、蔡滔、王震、向章敏、刘凯、熊胜利、赖飞、徐嘉民、方舒婷、丁静、祝愿、王志、杜楠、张兴伦、周雪丽、王艺蓉、刘佳、王晓鹭、苏美丞。T/GZTPA0001-20211贵州茶叶中风味挥发性物质的测定 气相色谱质谱法1 1范围本文件规定了贵州茶叶中主要风味挥发物质组成及含量的方法。本文件适用于贵州茶叶中主要风味挥发物质含量的测定。2 2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第 2 部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法NY/T 2102茶叶抽样技术规范3 3术语与定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 4原理在一定温度条件下，顶空瓶内茶叶样品的挥发性组分向上空间挥发，产生蒸气压，在气-固二相达到热力学动态平衡时，其物质组成和浓度在两相基本保持一致，再采用固相微萃取纤维头对气相部分物质进行吸附萃取，通过进样口解析后进行色谱分离，然后再通过质谱仪进行物质定性分析，并采用内标相对含量法对风味挥发物质进行相对含量测定。5 5试剂或材料除非另有规定,仅使用分析纯试剂。5.15.1氯化钠（NaCl）；5.25.2乙酸苯乙酯（C10H12O2）：色谱纯，；5.35.3正己烷（C6H14）：色谱纯；6 6仪器设备6.16.1气相色谱-质谱联用仪：气相色谱-质谱，EI 源。6.26.2固相微萃取仪；6.36.3萃取纤维头：50/30 m，PDMS/DVB/CAR；6.46.4顶空瓶：20 mL；T/GZTPA0001-202126.56.5分析天平：感量 0.1 mg。7 7样品制备与保存7.17.1制样茶叶样品按照 NY/T 2102 进行采样和分样后，取样品约 200 g，经粉碎机粉碎，过 60 目筛，制成茶叶粉末，一式两份。7.27.2保存试样密封避光保存于4 冰箱，待用。8 8分析步骤8.18.1样品制备处理称取茶叶样品 0.2g（精确至 0.000 1 g）至 20 mL 顶空样品瓶中，加入 0.2g（精确至 0.00 1 g）氯化钠，用玻璃棒混匀，同时加入 50 ng 的内标物乙酸苯乙酯，用顶空瓶盖将其密封。然后将顶空瓶放入到固相微萃取仪加热装置中，在 60 条件下平衡 20 min，利用固相微萃取纤维头吸附 20 min，在 250 进样口解析进行气相色谱质谱分析。8.28.2分析条件8.2.18.2.1固相微萃取条件a)纤维头 PDMS/DVB/CAR;b)样品孵化温度：60；c)样品孵化时间：20 min；d)萃取吸附时间：20 min；e)解析温度：250；f)解析时间：3 min。8.2.28.2.2色谱条件a)色谱柱 1：HP-FFAP(50 m200 m，0.3 m)或等效柱；色谱柱 2：DB-WAX(30 m250 m，0.25m)毛细管气相色谱柱或等效柱；b)载气条件：流速 1.0 mL/min，不分流进样；c)进样口温度：250；d)色谱柱 1 柱温箱升温程序：炉温初始为 40，保持 2 min，以 2/min 升温至 220，保 4min；样品运行时间：92 min），溶剂延迟时间：4 min；e)色谱柱 2 柱温箱升温程序等同于色谱柱 1 柱温箱升温程序。f)传输线温度：260。8.2.38.2.3质谱条件a）扫描方式：质量全扫描模式，扫描质量数范围：40 m/z450 m/z;b）电离方式：电子轰击电离源(EI 源，电子能量 70 eV);T/GZTPA0001-20213c）离子源温度：230；d）四级杆温度：150；e）电离电压：70 eV。8.38.3定性与定量8.3.18.3.1保留指数定性在相同的条件下进行样品测定，被测试样中目标化合物色谱峰的保留指数与附录中提供化合物或查阅资料的保留指数相比较，相对误差应在2.0%之内。8.3.28.3.2物质鉴定定性实验质谱数据采用 NIST 标准谱库自动检索相识度匹配与人工解析相结合，查阅有关质谱资料，对质荷比、相对峰度、分子离子峰等进行分析，质谱信息的正向和反向匹配相似度800 的色谱峰可定性。8.3.38.3.3定量分析定量分析采用乙酸苯乙酯的内标相对含量法或面积归一法半定量。8.48.4样品测定将试样注入气相色谱-质谱联用仪，经色谱分离，质谱检测采集质谱数据，设定自动识别信噪比大于 100的色谱峰，使用 NIST 数据库进行相识度匹配；所检索的化合物的正向和反向匹配相似度均800 以上的色谱峰，采用内标相对定量法（假定校正因 F=1），得到各风味挥发物质的相对含量。3 种典型茶叶中风味挥发物质参见附录 A。8.58.5平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。8.68.6空白试验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。9 9结果计算9.19.1内标相对定量以乙酸苯乙酯为内标，采用内标相对定量法（假定校正因 F=1），按公式（1）计算：FAAisiisi（1）式中:i试验中某种风味挥发物质的质量浓度(ngkg-l)；is试验中内标的质量浓度(ngkg-l)；Ai试验中某种风味挥发物质的色谱峰面积；Ais试验中内标的色谱峰面积；F校正因子。计算结果应扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位小数。T/GZTPA0001-202149.29.2面积归一法定量试样中某种风味挥发物质的百分比 Y 按式(2)计算,通过测定相应峰面积对所有成分峰面积总和的百分数来计算给定组分 i 的含量：%100i ssiAAYi（2）式中:Yi试样中某种风味挥发物质占总风味挥发物质的百分比,单位为百分率（%）；Asi试样测定液中组分i的峰面积;As试样测定液中各风味挥发物质的峰面积之和。如果符合（10.2），取两次测量的算数平均值作为结果，结果保留3位有效数字。1010实验要求10.110.1空白及平行样实验要求每次实验均要求带入样品空白和样品平行样实验，每个平行进样一次即可，取平均值作为实验结果。10.210.2重复性在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15%。T/GZTPA0001-20215附录 A（资料性）贵州典型绿茶风味挥发物质信息A.1 贵州典型绿茶风味挥发物质总离子流(TIC)质谱色谱图见图 A.1RT:0.00-97.0005101520253035404550556065707580859095Time(min)0102030405060708090100Relative Abundance62.3056.9840.6653.6736.9050.3830.1133.7088.6574.7647.2423.9043.2017.8192.2684.417.9566.3672.5211.8780.12NL:2.99E7TIC MS TEST0128-005a)安顺普定朵呗毛峰绿茶RT:0.00-97.0505101520253035404550556065707580859095Time(min)0102030405060708090100Relative Abundance60.4957.0040.6730.6550.4154.9135.6274.7728.4692.2843.9584.0324.0866.3817.8787.9672.538.0077.2911.89NL:4.50E7TIC MS TEST0128-006b)石阡毛尖绿茶RT:0.00-97.0405101520253035404550556065707580859095Time(min)0102030405060708090100Relative Abundance62.3357.0136.9340.6753.6950.4274.7830.6384.4388.6647.2617.8492.2743.2323.917.8868.6372.5577.1811.85NL:2.59E7TIC MS TEST0128-007c)都匀毛尖绿茶图 A.1 贵州典型绿茶风味挥发物质总离子流(TIC)质谱色谱图T/GZTPA0001-20216A.2 贵州典型绿茶风味挥发物质色谱峰对应化合物信息见表 A.2表 A.2 贵州典型绿茶风味挥发物质色谱峰对应化合物列表序号保留时间RT保留指数 RIa（FFAP 柱）识别b化合物名称英文名字cas 号平均含量相对含量含量（%）(g/kg)A121.151201.03MS,RI1-戊醇1-Pentalol71-41-01.2071.43A225.861300.30MS,RI顺-2-戊烯醇Shun-2-pentenol1576-95-00.4225.00A330.011306.11MS,RI3-己烯醇3-hexenol928-96-12.29136.31A431.511400.10MS,RI反式-2-己烯-1-醇Trans-2-hexene-1-alcohol928-95-00.1810.71A534.311401.07MS,RI1-辛烯-3-醇1-Simene-3-alcohol3391-86-41.3781.55A636.901410.64MS,RI2-乙基己醇2-Ethylhexanol104-76-78.56509.52A740.681501.05MS,RI芳樟醇Althol78-70-64.67277.98A841.181501.45MS,RI正辛醇Positive-octanol111-87-50.6538.69A943.081508.52MS,RI二氢胆固醇Dihydrogen Cholesterol80-97-70.4023.81A1044.591600.17MS,RI二氢芳樟醇Dihydrosylol29957-43-51.5894.05A1148.101602.67MS,RI4-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)-1-丁醇4-(2-methyl-1,3-pentoxylring-2-group)-1-butanol5745-75-50.9455.95A1253.691702.28MS,RI2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氢-2H-呋喃-3-醇2,2,6-trimethyl-6-vinyltetrahydrogen-2H-furan-3-alcohol14049-11-74.36259.52A1358.541801.33MS,RI香叶醇Xiangfoliol106-24-14.79285.12A1460.491812.97MS,RI苯甲醇Benzoyl-methanol100-51-65.62334.52A1562.321900.38MS,RI苯乙醇Benzoyl-alcohol1960/12/85.25312.50A1