TGTM 002-2023 BT&BL液体菌剂生产技术规程.pdf

ICS 65.080 CCS GTM 团体标准 T/GTM 0022023 BT&BL 液体菌剂生产技术规程 Technical regulations for BT&BL liquid bacterial agent production 2023-05-08 发布 2023-07-15 实施 北京国农科技特派员创新服务联盟发 布 全国团体标准信息平台T/GTM 0022023I目次 目次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 2 4 原料要求 2 5 生产环境要求 3 6 生产技术管理 3 7 产品质量检验 5 8 包装、标识和贮存 5 9 质量追踪 5 10 档案管理 5 附录 A 产品外观及技术指标 6 附录 B 菌体形态 7 附录 B1 苏云金芽孢杆菌种子罐移种时形态 7 附录 B2 苏云金芽孢杆菌发酵罐放罐时芽孢形态 7 附录 B3 地衣芽孢杆菌种子罐移种时形态 8 附录 B4 地衣芽孢杆菌发酵罐放罐时芽孢形态 8 全国团体标准信息平台T/GTM 0022023II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定和NYT8832006技术指标起草。本文件由河南安利绿色防控科技有限公司和微生物肥料技术研究推广中心联合提出。本文件由北京国农科技特派员创新服务联盟归口。本文件起草单位：河南安利绿色防控科技有限公司、微生物肥料技术研究推广中心、海南安利达生物活菌研究所、河南省深研活菌生物技术研究所、北京国农科技特派员创新服务联盟、保定多微质检技术服务有限公司、微生物肥产业技术创新战略联盟、河北省（保定）农用微生物菌种产业技术研究院。本文件主要起草人：胡鉴、邹文娜、郜素艳、江洋、黄思迪、尚小凤、王文蕾。全国团体标准信息平台T/GTM 00220231 BT&BL 液体菌剂生产技术规程 1范围 本文件规定了BT&BL液体菌剂产品的原辅料要求、生产环境要求、生产技术管理、质量检验、包装、运输、贮存、档案管理、质量追踪的要求。本文件适用BT&BL液体菌剂的生产。2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 19541 饲料原料 豆粕 GB 1353 玉米 GB/T 20880 食用葡萄糖 GB 29206 食品安全国家标准 食品添加剂 硫酸铵 GB 32449 饲料添加剂 硫酸镁 GB 34468 饲料添加剂 硫酸锰 GB 34458 饲料添加剂 磷酸氢二钾 GB 34470 饲料添加剂 磷酸二氢钾 GB 1886.214 食品安全国家标准 食品添加剂 碳酸钙（包括轻质和重质碳酸钙）GB/T 8885 食品安全国家标准 食品添加剂 食用玉米淀粉 GB/T 1445 绵白糖 GB/T 1250 极限数值的表示方法和判定方法 全国团体标准信息平台T/GTM 00220232GB/T 8170 数值修约规则 GB20287 农用微生物菌剂 NY 8832004 农用微生物菌剂生产技术规程 T/GTM0012021 农用微生物菌剂工业化生产标准 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 BT&BL 液体菌剂（BT&BL Liquid bacterial agent）BT&BL 液体菌剂商品名为“菌安天下”，由苏云金芽孢杆菌（BT）、地衣芽孢杆菌（BL）单独纯种发酵并复配而成具有促生和防病等多功能的速效农用微生物液体菌剂产品，其田间实验结果证明，无论是拌种、蘸根还是叶面喷施、滴灌对水稻、玉米、大豆、小麦等农作物及棉花、辣椒、油菜等经济作物都有很好的促生长和防病效果。4原辅料要求 4.1豆粕 豆粕质量应符合 GB/T 19541 粗蛋白含量在 43.0%以上的规定，豆粕经除尘除杂后粉碎成过 40 目筛的粉末后使用。4.2玉米粉 玉米质量应符合 GB1353 三等以上的规定，玉米经除尘除杂后粉碎成过 40 目筛的粉末后使用。4.3葡萄糖 葡萄糖质量应符合 GB/T 20880 的规定。4.4硫酸铵 硫酸铵质量应符合 GB 29206 的规定。全国团体标准信息平台T/GTM 002202334.5硫酸镁 硫酸镁质量应符合 GB 32449 的规定。4.6硫酸锰 硫酸锰质量应符合 GB 34468 的规定。4.7磷酸氢二钾 磷酸氢二钾质量应符合 GB 34458 的规定。4.8磷酸二氢钾 磷酸二氢钾质量应符合 GB 34470 的规定。4.9碳酸钙 碳酸钙质量应符合 GB 1886.214 轻质碳酸钙的规定。4.10玉米淀粉 玉米淀粉质量应符合 GB/T 8885 的规定。4.11绵白糖 绵白糖质量应符合 GB/T 1445 的规定。5生产环境要求 5.1 生产环境和生产车间应当符合NY/T883相关规定 5.2 原料库/成品库应满足阴凉、通风、干燥、避免阳光直射的要求。5.3 生产设备：种子罐、主发酵罐、配料罐、空压机、蒸汽锅炉、复配罐、灌装线的生产能力大小应能满足生产需要。6 生产技术管理 6.1菌种 所用菌种分别为苏云金芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌，纯菌种单独发酵。6.2菌种培养 6.2.1 凡用于菌种培养的器皿要经彻底清洗和灭菌。克氏瓶灭菌前须配上棉塞，并用防潮纸包扎管口。全国团体标准信息平台T/GTM 002202346.2.2 新配制并经灭菌的克氏瓶斜面培养基，应在 3032条件下培养 24 小时，检查确无污染方可使用。6.2.3 取出冰箱中干燥保存的菌种，在无菌条件下移接克氏瓶斜面，于 30条件下培养 5 天，待菌株都形成芽孢后可采用。6.2.4 菌株筛选纯化，每年进行一次筛选易产芽孢的菌株。6.3发酵生产 6.3.1 发酵前消毒 在生产前发酵车间应进行紫外消毒 12 小时。6.3.2 一级种子罐培养 6.3.2.1 种子罐使用前应进行 121，30 分钟的空消处理。6.3.2.2 种子罐空气过滤器消毒，滤器压力保持在 0.100.12MPa，保压 30 分钟。6.3.2.3 按照种子罐生产处方进行配料（实际装液量70%），并对种子罐进行高温蒸汽消毒，控制消毒温度 121，消毒 30 分钟，保温完成后开启冷水进行降温至 32左右待用，降温的同时通入无菌空气使得罐压力保持在 0.05MPa 以上。6.3.2.4 灭菌效果检查采用 NY/T883 规定的染色观察法。6.3.2.5 菌种悬液制备，把提前培养好的克氏瓶斜面用无菌蒸馏水洗下，制备成菌种悬液，取适量菌悬液经结晶紫染色，显微镜观察无杂菌后方可做下一步使用，6.3.2.6 合格菌悬液经 80水浴处理 15 分钟后备用。6.3.2.7 种子罐接种，火焰保护下接种。6.3.2.8 种子罐培养，通入无菌空气，调整进风量，开启搅拌，维持培养温度在 300.5培养 15 小时左右（pH 回升），取样观察菌体形态整齐，着色均匀，无芽孢、无杂菌污染，转移至发酵罐进行发酵培养。6.3.3 发酵罐发酵 6.3.3.1 发酵罐使用前应进行 121，30 分钟的空消处理。6.3.3.2 发酵罐空气过滤器消毒，过滤器蒸汽压力保持在 0.100.12 MPa，启保压 30 分钟。6.3.3.3 按照发酵罐生产处方进行配料（实际装液量70%），并对发酵罐进行高温蒸汽消毒，控制消毒温度121，消毒 30 分钟，保温完成后开启冷水进行降温至 32左右待用，同时向罐内通入无菌空气，使得罐内压力保持在 0.05MPa 以上。全国团体标准信息平台T/GTM 002202356.3.3.4 灭菌效果检查采用 NY/T883 规定的染色观察法。6.3.3.5 移种管道消毒，移种前先通过蒸汽把种子罐和发酵罐之间连接的移种管道消毒 60 分钟，6.3.3.6 发酵罐移种及发酵，利用压差的方法，用无菌空气把培养好的种子从种子罐经过消毒的移种管道压入发酵罐（接种量为 10%），调整发酵温度为 300.5，通入无菌空气，调整进风量，开启搅拌进行发酵培养，24 小时后定期取样，镜检菌体生长情况及芽孢形成情况，当芽孢成熟率在 90%以上即可放罐。6.4复配 6.4.1 复配罐及发酵罐与复配罐连接的管道要经过蒸汽消毒处理。6.4.2 利用无菌空气把培养好的发酵液从发酵罐中压入复配罐，加入需要的辅料后搅拌均匀，在复配罐中保压待检。7 产品质量检验 从复配罐中接取适量样品，按照 GB 20287 中规定进行检验。8 包装、标识和贮存 8.1 经检验合格的复配菌液经全自动灌装机和贴标机生产线自动灌装和贴标签，检查灌装后每瓶菌剂的密封性，产品在确保密封严密，没有渗漏的情况下进入装箱打包工序，最后入库存放。8.2 BT&BL 液体菌剂的包装、标识、运输和贮存应符合 NY/T 798 中第 7 章的规定。菌液采用塑料瓶装，有两种包装规格：一种规格为每瓶灌装液 100ml，80 瓶菌液装入一个纸箱，作为一件成品存放；另一种规格为每瓶灌装 500ml，30 瓶菌液装入一个纸箱，作为一件成品存放。8.3 在包装的过程中，未包装的液体产品应注意罐内压力不应掉零，防止杂菌进入。8.4 包装好的菌剂产品于干燥、通风、阴凉处储存。9 档案管理 按照 NT/T 883 规定执行。10 质量追踪 按照 NT/T 883 规定执行。全国团体标准信息平台T/GTM 00220236A A 附录A （资料性）产品外观及技术指标 A.1产品外观（感官）棕黄色酱油状液体，带有酸腥臭味。A.2产品技术指标 项目 剂、型 状态 液体 有效活菌数（cfu）亿/ml 2.0 霉菌杂菌数/（个/ml）3.0106 杂菌率/%10.0 pH 值 6.06.3 粘度/CPS 6.3 保质期/月 12 全国团体标准信息平台T/GTM 00220237附录B （资料性）菌体形态 B.1苏云金芽孢杆菌种子罐移种时形态 B.2苏云金芽孢杆菌发酵罐放罐时芽孢形态 全国团体标准信息平台T/GTM 00220238 B.3地衣芽孢杆菌种子罐移种时形态 B.4地衣芽孢杆菌发酵罐放罐时芽孢形态 全国团体标准信息平台T/GTM 00220231B B 全国团体标准信息平台