鹳榆止泻颗粒剂的成型工艺优化与质量标准研究.pdf

动物医学进展,():P r o g r e s s i nV e t e r i n a r yM e d i c i n e鹳榆止泻颗粒剂的成型工艺优化与质量标准研究收稿日期:基金项目:甘肃省高校产业支撑项目(C );财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系(C A R S );国家自然科学基金项目()作者简介:胥晨(),男,甘肃会宁人,硕士,主要从事中兽医学及中药药理学研究.通讯作者胥晨,纪鹏,马挺,武振帅,张晓松,华永丽,姚万玲,袁子文,王东升,魏彦明(甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 ;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,甘肃兰州 )摘要:优化鹳榆止泻颗粒剂的制备工艺并建立其质量标准,以辅料配比、润湿剂浓度、干燥温度为考察因素,颗粒成型率、吸湿率、水分、休止角为评价指标,用单因素结合正交试验优化鹳榆止泻颗粒剂的制备工艺.采用薄层色谱分析法、高效液相色谱法(H P L C)对鹳榆止泻颗粒剂中槲皮素、没食子酸、苦参碱、甘草酸分别开展定性和定量鉴别研究,建立其质量标准.结果表明,没食子酸、槲皮素、苦参碱和甘草酸检测质量浓度的线性范围分别为 g/m L、g/m L、g/m L、g/m L,精密度、重复性、稳定性(h)试验的R S D均(n),平均回收率为 、,R S D均(n).说明优化的鹳榆止泻颗粒剂成型工艺稳定可行,建立的鹳榆止泻颗粒剂的薄层鉴别及含量测定方法可用于鹳榆止泻颗粒剂的质量控制.关键词:鹳榆止泻颗粒剂;制备工艺;薄层色谱法;高效液相色谱法;质量标准中图分类号:S 文献标识码:A文章编号:()年起我国在畜禽养殖生产中实施“饲料端禁抗,养殖端减抗、限抗”政策,传统中兽药开发成为热点之一.鹳榆止泻散为课题组基于经典名方加减后产生的自拟方.全方补脾益气以固本,清热燥湿以去邪,标本兼治.本方可用于治疗畜禽腹泻类病症,经临床实践观察,其安全有效.中兽药剂型一般包括散剂、颗粒剂、注射剂等,其中颗粒剂具有便携、易吸收、作用迅速、稳定、方便等优点,成为兽医临床上应用较多的中兽药剂型之一.颗粒剂的制备方法主要包括湿法制粒与干法制粒.其中湿法制粒是指在药物浸膏粉或辅料中加入润湿剂,靠润湿剂使浸膏粉与粘合在一起形成颗粒,所得湿颗粒再进行干燥.作为经典的中药颗粒制备方法,湿法制粒法制成的颗粒具有较强的耐磨性和较优质的外观.而干法制粒是将适量的辅料与浸膏粉运用喷雾干燥等工艺干燥,搅拌均匀后通过重压或滚压的方法将其加工成所需硬度的药物薄片,并将薄片粉碎成所需大小颗粒的一种制备工艺.干法制粒存在颗粒成型差、硬度高且水溶性差的问题.本研究采用湿法制粒,以颗粒的成型率、溶化性、水分、颗粒性状为考查指标,旨在优化鹳榆止泻颗粒剂的最佳制粒工艺,另外为保证颗粒剂的有效成分含量和疗效,采用薄层色谱(T L C)和高效液相色谱(H P L C)法对其开展定性和定量鉴别研究,为鹳榆止泻颗粒剂的后期研发提供数据支持.材料与方法材料药物及主要试剂老鹳草、地榆、苦豆草、小茴香、甘草,武威牛满加药业有限责任公司提供并鉴定合格;玉米淀粉,糊精,槲皮素对照品(批号:,H P L C),没食子酸对照品(批号:,H P L C),甘草酸对照品(批号:,H P L C),苦参碱对照品(批号:,H P L C),以上对照品均由南京源植生物科技有限 公 司 提 供,用 于 鹳 榆 止 泻 颗 粒 剂 的T L C和H P L C鉴别.无水乙醇,乙腈(色谱级),甲醇(色谱级)与甲醇(分析级)等.主要仪器设备高效液相色谱仪(Am e r i c a,A g i l e n t 型),H Z K 真空干燥箱,上海恒跃医疗器械有限公司产品;WK 摇摆式制粒机,山西通正生物医药装备设计制造有限公司产品;D HG A恒温干燥箱,上海齐欣科学仪器有限公司产品.方法鹳榆止泻颗粒剂成型工艺优化鹳榆止泻颗粒剂干浸膏的制备依据文献 制备药液,经真空浓缩得干浸膏,粉碎后备用.单因素试验辅料的选择.首先将浸膏粉和辅料(糊精、可溶性淀粉)分别按照的比例均匀混合,随后用润湿剂(m L/L乙醇)制备软材,最后用制粒机制粒,并经干燥、整粒后制得颗粒剂,通过观察成型率来筛选出最佳辅料.辅料添加比例筛选.在筛选好辅料后,按照不同比例称取浸膏粉与辅料,并混合均匀后,用 m L/L乙醇作为润湿剂制软材,用制粒机制粒,然后干燥、整粒,筛选出最佳辅料配比.润湿剂浓度筛选.选择乙醇作为润湿剂制粒.按照以上筛选的最佳比例称取份浸膏粉与辅料,分别用不同浓度乙醇进行润湿(、m L/L),然后完成制粒过程,通过观察颗粒品质与成型性筛选最佳润湿剂浓度.干燥温度与时间筛选.按照以上筛选的最佳条件制软材,所得软材分别在、条件下烘干,筛选颗粒最佳干燥温度.按以上条件制软材,最佳温度条件下烘干、h,测定颗粒中水分,筛选出颗粒最佳干燥时间.正交试验设计选择辅料配比(A)、乙醇浓度(B)、干燥时间(C)作为正交试验的考察因素,成型率、吸湿率、水分、休止角的综合评分为评价指标建立正交试验,优选鹳榆止泻颗粒最佳制备工艺.综合加权评分计算采用综合加权评分法评估鹳榆止泻颗粒剂制备工艺,根据各因素在制粒过程中对颗粒剂合格率的影响,以及在实际量化生产中药物的有效利用,将权重系数设为颗粒成型率(Y)吸湿率(Y)水分(Y)休止角(Y)().综合评分(Y/Y m a x)(Y/Y m a x)(Y/Y m a x)(Y/Y m a x).式 中Y m a x、Y m a x、Y m a x、Y m a x分别指颗粒最大成型率、吸湿率最大值、含水率最大值及休止角最大值.成型工艺验证称取浸膏粉以“”中所得最佳制粒工艺平行制备批颗粒,按要求测定颗粒的相关指标,验证工艺可行性.鹳榆止泻颗粒剂质量标准研究定性鉴别槲皮素的鉴别.取鹳榆止泻颗粒剂g,按照 的比例加入纯水充分溶解,在文献 方法基础上,加入盐酸饱和乙酸乙酯 m L,通过超声萃取、离心后取上清液,重复操作,合并次上清液,水浴蒸干,残渣用m L甲醇溶解制成供试品溶液.按相同方法取不含老鹳草和地榆的颗粒剂制成对应的阴性对照品溶液.取老鹳草和地榆各g,回流提取次,滤液离心 m i n,取上层清液按照供试品溶液制备方法操作,制得老鹳草和地榆药材样品溶液.另取槲皮素对照品,用甲醇溶解制成对照品溶液(浓度为m g/m L).吸取适量制备好的种溶液,从左至右依次点于同一硅胶G薄层板上,用甲苯乙酸乙酯甲酸()作为展开剂进行展开,取出薄层板烘干后置于薄层色谱观察分析仪在 n m条件下观察.没食子酸的鉴别.用甲醇溶解没食子酸对照品,制成对照品溶液(浓度为m g/m L).按定性鉴别中方法分别制得老鹳草药材、地榆药材、供试品及阴性对照品溶液.吸取适量制备好的种溶液,从左至右依次点于同一硅胶G薄层板上,用甲苯乙酸乙酯甲酸()作为展开剂进行展开,取出薄层板烘干后置于薄层色谱观察分析仪在 n m条件下观察.苦参碱的鉴别.称取苦参碱对照品用甲醇溶解制备成m g/m L的对照品溶液.另取鹳榆止泻颗粒剂g,按照 的比例加入甲醇溶解,超声处理(m i n),并进行离心(r/m i n,m i n),取上清液水浴蒸干,残渣加甲醇制成g/m L供试品溶液.取不含苦豆草的颗粒,按以上方法制备出无苦豆草的阴性对照品溶液.称取苦豆草粉末g,按文献 方法制成苦豆草药材溶液.吸取适量制备好的种溶液,从左至右依次点于同一硅胶G薄层板上,用三氯甲烷甲醇浓氨水()置 下放置后取下层溶液作为展开剂进行展开,取出薄层板烘干后,先均匀喷洒碘化铋钾试剂,再喷洒亚硝酸钠乙醇溶液至显色斑点清晰可见.甘草酸的鉴别.称 取 适 量 甘 草 酸 对 照 品,加 入 甲 醇 溶 解 制 成m g/m L的对照品溶液.取 g本品,加入 m L三氯甲烷,加热回流h,滤过,弃去滤液,待残渣中溶剂挥干后加入 m L纯水,再加入 m L水饱和的正丁醇液,密塞,超声处理 m i n,r/m i n离心 m i n,取上清液水浴蒸干,残渣加m L甲醇制成供试品溶液.另分别取g甘草药材和 g缺甘草的颗粒,按以上方法制成相应的甘草药材溶液和不含甘草的阴性对照品溶液.吸取适量上述种溶液,从左至右依次点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯甲酸冰乙酸水()为展开剂,晾干后均匀喷洒 m L/L硫酸乙醇溶液,在 加热至斑点清晰可见,置于薄层色谱观察分析仪在 n m条件下观察.定量鉴别色谱条件.槲皮素色谱柱:A g i l e n tZ O R B A X S B C 柱(mm,m),流动相:甲醇(A)g/L磷酸(B),体积比为 ,流 速 m L/m i n,柱 温,检 测 波 长 动物医学进展 年第 卷第期(总第 期)n m,进样量:L.没食子酸色谱柱:A g i l e n t Z O R B A X S B C 柱(mm,m),流动相g/L磷酸(A)甲醇(B),体积比为 ,流速m L/m i n,柱温,检测波长 n m,进样量:L .苦参碱色谱柱:A g i l e n t Z O R B A X S B C 柱(mm,m),流动相:g/L磷酸(A)甲醇(B),体积比为,流速m L/m i n,柱温,检测波长 n m,进样量:L,.甘草酸 色 谱 柱:A g i l e n t Z O R B A X S B C 柱(mm,m),流动相:水(A)乙腈(B),体积比为 ,流速 m L/m i n,柱温,检测波长 n m,进样量:L.对照品溶液的制备.精密称取适量槲皮素对照品、没食子酸对照品、苦参碱对照品、甘草酸对照品,没食子酸与苦参碱分别加入超纯水溶解,制成 m g/m L和 m g/m L的对照品溶液,槲皮素与甘草酸分别加入甲醇溶解,制成 m g/m L和 m g/m L的对照品溶液,再经 m微孔滤膜滤过备用.供试品溶液的制备.精密称取颗粒剂g,加入甲醇溶解制成g/m L的供试品溶液,经 m微孔滤膜滤过,用于槲皮素含量测定.另精密称取颗粒剂 g,加入超纯水溶解制成m g/m L的供试品溶液,经 m微孔滤膜滤过,分别用于没食子酸、苦参碱.精密称取颗粒剂 g,加入甲醇溶解制成m g/m L的供试品溶液,经 m微孔滤膜滤过备用,用于甘草酸含量测定.线性关系考察.吸取槲皮素对照品溶液 、m L;没食子酸对照品溶液 、m L;苦参碱对照品溶液 、m L;甘草酸对照品溶液 、m L分别稀释至 m L,按中色谱条件进行测定,以含量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线.精密度试验.精密吸取槲皮素供试品溶液 L,按中色谱条件进行测定.分别精密吸取没食子酸、苦参碱和甘草酸供试品溶液 L,按中色谱条件进行测定.重复性试验.取不同批次鹳榆止泻颗粒剂,按中条件制备槲皮素、没食子酸、苦参碱和甘草酸供试品各份,按中色谱条件进行测定.稳定性试验.分别取槲皮素、没食子酸、苦参碱和甘草酸供试品溶液,放置于室温条件下,分别在第次进样后、h时进样,按中色谱条件进行测定.加样回收试验.取已知含量的槲皮素供试品溶液份,分别精密加入、m L浓度为 m g/m L的槲皮素对照品溶液,按中色谱条件进行测定.取已知含量的没食子酸供试品溶液份,分别精密加入、m L浓度为 m g/m L的没食子酸对照品溶液,按中色谱条件进行测定.取已知含量的苦参碱供试品溶液份,分别精密加入、m L浓度为 m g/m L的苦参碱对照品溶液,按中色谱条件进行测定.取已知含量的甘草酸供试品溶液份,分别精密加入、m L浓度为 m g/m L的甘草酸对照品溶液,按中色谱条件进行测定.结果鹳榆止泻颗粒剂成型工艺优化单因素试验辅料筛选结果表明,选择糊精作为辅料时,制粒容易,颗粒剂成型率高.浸膏粉糊精比例为()时,颗粒剂成型率为,且颗粒品质较优.润湿剂浓度筛选发现,乙醇浓度为 时,软材结块难制粒,乙醇浓度为无水乙醇时软材黏度过低,成型率低,乙醇浓度为 时,易制粒且颗粒品质较优.所制软材在 条件下干燥需耗费大量时间,下烘干时颗粒会出现板结现象,时颗粒性状较好,综上选择 为颗粒最佳干燥温度.条件下烘干、h,测定颗粒中水分,结果发现颗粒含水量均小于,符合兽药典规定,故选择h为颗粒最佳干燥时间