GHT 1396-2022 松花粉及其制品中松源成分检测 实时荧光PCR法.pdf

GH/T1396-2022R:TCCCGTCTTAAACGATCCTCTCP:FAM-TCGTTGTCTCATGGATCTTTCCCTCAGC-TAMRA6.2三氯甲烷（氯仿）。6.3异丙醇。6.4蛋白酶K缓冲液。6.5灭菌水：在103.4kPa(121)灭菌20min。6.6乙醇溶液(70%，VW)。6.7蛋白酶K(10mg/mL):在100mg蛋白酶K中加入10mL蛋白酶K缓冲液，分装成1mLU管，-20储存。6.8NaoH溶液(10mmol/L):在160mL二级水中加入80.0 g NaOH溶解后冷却至室温，再用二级水补充至200mL。6.9Na2EDTA溶液(500mmol/L,pH8.0):称取18.6gNa2EDTA,加入70mL二级水，再加入NaOH溶液加热至完全溶解后，冷却至室温，Na0H溶液调pH至8.0，加二级水补充至100mL,在103.4kPa(121)灭菌20min。6.10Tris-HCl溶液（1mol/L,pH8.0):称取121.1 g Tris溶解于800mL二级水，用HCl调pH8.0,加二级水补充至1000mL,在103.4kPa(121)灭菌20min。6.11CTAB提取缓冲液(pH8.0):称取4.0 g CTAB,16.364 g NaCl,加入20mL1mol/L Tris-HCl溶液(pH8.0),8mL500mmol/LNa2EDTA溶液(pH8.0),先用70mL二级水溶解，再补充至200mL,在103.4kPa(121)灭菌20min。6.12CTAB沉淀液：称取1.0 g CTAB,0.467 g NaCl,先用70mL二级水溶解，再补充至200mL,在103.4kPa(121C)灭菌20min。6.13实时荧光PCR反应混合液：12.5uL反应体系包括：1U2U(Unit,酶学单位)的Taq酶、1PCR缓冲液、2.5mmol/L4.0mmol/L的Mg2、0.2U1U的UNG酶、0.2mmol/L的d(A,C,G)TPs、0.2mmol/L0.4mmol/LdUTP、400nmol/LROX染料。也可使用等效的实时荧光PcR预混液。7仪器设备7.1实时荧光PCR仪。7.2超微量分光光度计或紫外分光光度计。7.3组织研磨器。准信息服务平台7.4冷冻离心机：离心力15000g,制冷范围-20室温。7.5微量移液器：0.5L10L,10L100L,20L200L,200L1000L。7.6恒温混匀仪。7.7涡旋震荡器。