DB14T 689-2012 绒山羊人工授精操作技术规程.pdf

ICS65.020.30B 40DB14山西省地方标准DB 14/T6892012绒山羊人工授精操作技术规程2012-12-20 发布2013-01-20 实施山西省质量技术监督局发 布DB14/T6892012I目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14采精.15精液品质检查.26精液的稀释、分装、贮存和运输.37输精.4附录 A（规范性附录）输精器材的清洗与消毒.5附录 B（规范性附录）种公羊精液品质检查登记表.6附录 C（资料性附录）精液稀释液参考配方.7附录 D（资料性附录）输精情况登记表.8DB14/T6892012II前言本标准按GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山西省农业厅提出并归口。本标准起草单位：山西省牧草工作站、山西农业大学、晋岚绒山羊育种中心。本标准主要起草人：姚继广、任有蛇、郑永田、赫磊、王慧生、刘旗、张建新、杜海梅。DB14/T68920121绒山羊人工授精操作技术规程1范围本标准规定了绒山羊人工授精的采精，精液品质检查，精液的稀释、分装、贮存、运输和输精。本标准适用于山西省内绒山羊的人工授精。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 636猪人工授精技术规程NY/T 1335牛人工授精技术规程DB14/T 522晋岚绒山羊3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1适繁母羊身体健康，繁殖机能正常，年龄在 16 岁的雌性羊。3.2发情鉴定用一定方法判断母羊是否发情及发情所处阶段的过程。3.3人工授精利用器械以人工方法采集公羊的精液，经特定处理后，再输入到发情母羊生殖道特定部位使其妊娠的动物繁殖技术。4采精4.1公羊的调教4.1.1用于采精的种公羊的选择和鉴定按 DB14/T 522 的规定执行，公羊的调教从 1.01.5 岁开始。4.1.2将预调教的种公羊放入发情母羊群中，让其自然交配几次，以激发性欲，建立条件反射后赶出。也可在用调教好的公羊采精时，让其旁观。然后训练其用假阴道采精，使其逐步克服胆小怕人的行为习惯，逐渐适应假阴道采精。每日早、晚按摩睾丸各 1 次，每次 10min15min。DB14/T689201224.2采精前准备4.2.1器械的准备采集的器械包括干燥箱、恒温箱、显微镜、盖玻片、载玻片、擦镜纸、血球计数器、pH试纸、长柄镊子、酒精灯、滤纸、假阴道组件（外壳、内胎、胶塞、集精瓶等）、凡士林、量筒、玻璃棒、温度计、采精架、开膣器、输精器、移液枪或注射器、手电筒、白瓷盘、脸盆、毛巾、肥皂等。器械的洗涤与消毒按照NY/T 1335和附录A的规定执行。4.2.2精液稀释液配制精液稀释液配制方法可参照附录C。使用前置于水浴锅内预热至37。4.2.3假阴道的准备4.2.3.1洗涤。假阴道的主要部件如内胎和集精杯等，在使用前一天以 1%2%的碳酸氢钠温液彻底洗涤，也可配合使用肥皂脱去油脂，再用清水冲洗 34 遍，然后晾干。4.2.3.2安装内胎。采精的当天，将内胎的光滑面向里粗糙面向外，置于外壳内拉直，再将内胎两端外翻在外壳的两端，用胶圈加以固定，防止滑脱。4.2.3.3消毒。以长柄镊夹取 75%酒精浸湿的纱布块，全面涂擦内胎进行消毒。待消毒彻底后，再安装集精杯。集精杯可用蒸煮或酒精消毒。4.2.3.4冲洗。用灭菌的稀释液对灭菌后的内胎和集精杯冲洗 23 次，洗掉酒精或蒸馏水。4.2.3.5注水。由假阴道外壳的注水孔注入假阴道夹层腔体积 2/3 左右的热水，水温 4045，年轻羊可低 12。4.2.3.6安装集精杯。注水后，将消毒冲洗后的集精杯插入假阴道一端。在集精杯夹层中灌入 4045的温水，使杯内保持 38左右。4.2.3.7涂润滑剂。用灭菌的玻璃棒蘸取灭菌的润滑剂涂至假阴道前 1/2 处，滑润其内腔。4.2.3.8调压。根据采精个体的不同，从胶塞的进气孔注入一定量的空气以维持假阴道内腔适宜的压力，刺激阴茎产生射精反射。4.2.3.9测温。临采精时，用灭菌的温度计插入假阴道内测试其温度，温度以 3840为宜。4.2.4台羊的准备选择健康、体格大小与公羊相近的发情母羊固定在采精架上做为台羊。采精前，对台羊后驱进行清洗消毒处理。4.3采精操作采精要做到定点、定时、定人。采精时，助手将种公羊引到台羊前。采精者蹲在台羊右后方，右手横握假阴道，胶塞向下，前低后高，与母羊骨盆的水平线保持3540。当公羊爬跨、伸出阴茎时，迅速用左手托住包皮，将阴茎导入假阴道内。当公羊猛力前冲，并弓腰后，则完成射精。随公羊从台羊身上滑下时，顺势将假阴道向下向后移动，保持集精瓶端向下，并立即倒转竖立，然后打开胶塞放气，取下集精瓶，并盖上盖子送操作室检查。4.4采精频率成年种公羊每天可采精12次，连续采3d5d，休息1d。5精液品质检查DB14/T689201235.1采精量采精后，用移液枪或注射器将精液移至预热的试管，并计量采精量。绒山羊的射精量一般在0.5ml1.5ml。5.2外观检查正常颜色为乳白色，无脓无腐败气味，肉眼可见云雾状。带有腐败臭味，颜色为红色、黄色、绿色的精液应废弃。5.3精子活力检查活力前，将载玻片和盖玻片在37的恒温板上预热。取1滴待检查精液，稀释后置于已预热的载玻片上，上覆盖玻片，在光学显微镜下放大200400倍，估测精液样品中前进运动精子所占百分率。采用01.0的10级评分标准。100%直线前进运动者为1.0分，90%直线前进运动者为0.9分，以此类推。鲜精活力不低于0.7。5.4精子密度5.4.1常规检查时用估测法。即在显微镜 1010 倍视野下判断精子的稠密和稀疏程度。精子密度可分为“密”、“中”、“稀”三级。密：整个视野内充满精子几乎看不到空隙，很难见到单个精子活动。中：视野内精子之间有相当于一个精子长度的明显空隙，可见单个精子的活动。稀：视野内精子之间的空隙很大，甚至可查清所有精子数。5.4.2定期检查时，用血细胞计数板准确测定每毫升精液中的精子数。即在显微镜下统计出计算室的四角及中央共 5 个中方格（80 个小方格）内的精子数，再根据稀释倍数计算出每毫升精液中的精子数。5.5填表把检查结果填入精液品质检查登记表（见附录B）。6精液的稀释、分装、贮存和运输6.1稀释液的配制稀释液的配制按照NY/T 636的规定进行。稀释液配方参见附录C。牛奶稀释液、卵黄稀释液在4的恒温箱中保存时间不应超过24h。6.2精液的稀释6.2.1精液稀释的倍数精液一般稀释24倍。精子密度在25亿以上的精液可稀释1020倍。10倍以上高倍稀释时，应分两步进行，先加入稀释液总量的1/31/2进行低倍稀释，稍等片刻后再将剩余的稀释液全部加入稀释。6.2.2精液稀释的步骤精液稀释的步骤按照NY/T 636进行。稀释完毕静置5min后，做精子活力检查。稀释后活力不低于稀释前，方可进行分装与保存。6.3精液分装DB14/T68920124用移液枪将精液分装到1.5ml5ml的离心管中，并标明种公羊耳号、生产日期、生产单位等信息。6.4精液贮存6.4.1常温保存放置于操作室消毒的容器内，1525条件下避光保存。可保存48h，最好是当天用完。6.4.2低温保存温度为05。应缓慢降温，可将分装好的精液用橡皮筋绑定在温度计上，放入盛有37敞口容器中，再将该容器放入到4冰箱内，使其在3h4h内温度降低到4，然后再冷藏于4冰箱内。使用时，在37水浴锅中升温后检测活力在0.5以上方可使用。6.5精液运输应放置于保温效果良好的避光装置内运输。运输过程中要避免剧烈震动。7输精7.1母羊发情鉴定把结扎有试情布的试情公羊放入待检母羊群中进行试情。如果母羊站立不动接受试情公羊爬跨，表明为发情母羊，可用于输精。7.2输精时间适宜输精的时间是母羊发情后的20h30h。一般情况下，早晨发现的发情母羊下午输精1次，第2天早晨再输1次；下午发现的发情母羊第2天早晨输精1次，第2天下午再输1次。7.3精液检查经运输或保存后的精液，应用显微镜进行活力检查，确定精子活力在0.5以上方可使用。7.4输精程序7.4.1清洗消毒输精前，输精人员清洁双手。输精前将母羊外阴部用消毒液（来苏儿溶液等）消毒、水洗、擦干。7.4.2输精输精时，助手两腿固定（夹住）母羊头颈部，双手倒提母羊后腿，倾斜约40。输精员左手提尾，用开膣器打开阴道，找到子宫颈口。将装有精液的输精枪，插入子宫颈口内0.5cm1.0cm，输精0.1ml0.2ml。操作时边捻边推，交叉进行，如遇阻力应回抽，调整角度，重新捻推，防止损伤子宫。7.5填写母羊输精记录表把母羊输精记录填入输精情况登记表（参见附录D）。DB14/T68920125AA附录A（规范性附录）输精器材的清洗与消毒A.1玻璃器材采用电热鼓风干燥箱进行高温干燥消毒，要求温度控制在130150，并保持20min30min，待温度降至60以下时，方可开箱取出使用。也可采用高压蒸汽消毒维持30min。A.2橡胶制品一般采用75%的酒精棉球擦拭消毒，最好再用95%的酒精棉球擦拭1次，以加速挥发残留在橡胶上面的水分和酒精气味，然后用生理盐水冲洗。A.3金属器械可用新洁尔灭等消毒溶液浸泡，然后用生理盐水等冲洗干净，也可以用75%的酒精棉球擦拭或用酒精灯火焰消毒。A.4溶液如润滑剂、生理盐水等，可隔水煮沸30 min或用高压蒸汽消毒，消毒时为了避免玻璃瓶爆裂，瓶盖要取下或橡胶皮塞上插上大号注射针头，瓶口用纱布包扎。DB14/T68920126BB附录B（规范性附录）种公羊精液品质检查登记表种公羊精液品质检查登记表见表B.1。表 B.1种公羊精液品质检查登记表采集日期耳号采精员采精量颜色气味活力精子密度稀释液量稀释后总量检验员备注DB14/T68920127CC附录C（资料性附录）精液稀释液参考配方C.1牛奶稀释液把鲜奶以多层纱布过滤，煮沸消毒10min15min，冷至室温，除去奶皮即可，一般稀释24倍。C.20.89氯化钠（生理盐水）稀释液氯化钠（化学纯）0.89g，蒸馏水100ml。一般稀释12倍，即时使用。C.3葡萄糖卵黄稀释液无水葡萄糖3.0g，柠檬酸钠1.4g，消毒蒸馏水80ml，新鲜卵黄20ml。将葡萄糖、柠檬酸钠溶于蒸馏水，过滤34次。蒸煮30 min，降至室温。再将卵黄用注射器抽出，加入后振荡溶解即可应用。稀释23倍，可作保存和运输之用。C.4TCG配方葡萄糖1.48g，三羟基甲基氨基甲烷3.02g，柠檬酸2.38g，定容到100ml容量瓶中，每升稀释液中添加青霉素、链霉素各100万单位，然后用10ml离心管分装，保存4备用。DB14/T68920128DD附录D（资料性附录）输精情况登记表输精情况登记表见表D.1。表 D.1输精情况登记表母羊耳号胎次发情日期第 1 次输精第 2 次输精预产期输精员公羊耳号输精量精液倒流公羊耳号输精量精液倒流_