马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫功能和肠道形态及屏障功能的影响.pdf

动物营养学报，（）：马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫功能和肠道形态及屏障功能的影响刘梦杰 周 静 李 越 丁倚晴 陈家燕 董 齐 吕伟杰 郭世宁，（华南农业大学兽医学院，广州；广东省兽用中药与天然药物工程技术研究中心，广州）摘 要：本试验旨在研究马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫功能和肠道形态及屏障功能的影响。选取 日龄健康的黄羽肉鸡 羽，按体重随机分成 组，每组 个重复，每个重复 羽。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中分别添加（组）和 复方中草药添加剂（组），试验期 。结果显示：与对照组相比，）组各阶段肉鸡的平均日增重（）显著提高（），日龄和 日龄肉鸡的料重比（）显著降低（）。）组 日龄肉鸡血清总蛋白（）含量显著升高（），日龄肉鸡血清甘油三酯（）、尿素（）含量和 日龄肉鸡血清总胆固醇（）、含量显著降低（）；组 日龄肉鸡血清白蛋白（）、含量显著升高（），和 日龄肉鸡血清、含量显著降低（）。）组 日龄肉鸡血清干扰素（）含量显著降低（）；组 和 日龄肉鸡血清免疫球蛋白（）、免疫球蛋白（）、白细胞介素（）和空肠黏膜分泌型免疫球蛋白（）含量显著升高（），日龄肉鸡脾脏指数和 日龄肉鸡胸腺指数显著升高（），日龄肉鸡血清 含量显著降低（）。）组 日龄肉鸡血清丙二醛（）含量显著降低（）；组 日龄肉鸡血清总超氧化物歧化酶（）、谷胱甘肽过氧化物酶（）和 日龄肉鸡血清、活性与总抗氧化能力（）显著升高（），和 日龄肉鸡血清 含量显著降低（）。）组和 组 日龄肉鸡空肠绒毛高度（）显著提高（），空肠隐窝深度（）没有显著差异（）；组 日龄肉鸡空肠绒隐比（）显著提高（）。）组 日龄肉鸡空肠咬合蛋白（）、闭锁小带蛋白（）相对表达量和 日龄肉鸡空肠超氧化物歧化酶（）、相对表达量显著升高（）；组 和 日龄肉鸡空肠、闭合蛋白（）及 相对表达量显著提高（），日龄肉鸡空肠 相对表达量和 日龄肉鸡空肠过氧化氢酶（）相对表达量显著增加（），日龄肉鸡空肠 相对表达量显著降低（）。综上可知，饲粮中添加马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂可提高肉鸡的生长性能，增强机体抗氧化能力和免疫功能，促进肠道绒毛发育，增强肠道屏障功能，且 的效果优于 。收稿日期：基金项目：广东省重点领域研发计划“无抗饲料生物合成关键技术研究与应用”（）作者简介：刘梦杰（），男，湖北武汉人，博士研究生，从事中兽药的研发及应用研究。：通信作者：郭世宁，教授，博士生导师，：期刘梦杰等：马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫关键词：中草药添加剂；肉鸡；生长性能；抗氧化能力；免疫功能中图分类号：文献标识码：文章编号：（）近年来由于饲料中促生长的抗菌药物的禁止使用，养殖业迫切需要解决禁抗后带来的养殖经济效益低下的问题。由于中药具有原料来源广泛、临床试验基础丰富以及对机体的副作用小等优势，并且富含多种有机物，在促进动物生长、提高畜禽产品品质、增强机体抗病力和免疫力中发挥着重要作用。马齿苋在许多国家被用作药用植物，含有生物碱、亚麻酸、黄酮、多糖等生物活性成分，其具有广泛的药理活性，如抗炎、抗菌、抗氧化、抗溃疡和伤口愈合作用。在蛋鸡饲粮中补充 或 的干马齿苋可增加鸡蛋重量，提高产蛋量和饲料效率。苦参中的生物活性成分主要有生物碱、黄酮类、三萜及其皂苷类、木脂素类其他化合物等，具有抗菌、抗氧化、抗炎、免疫调节和抗生育等作用。已有研究显示，苦参用作饲料添加剂对育肥猪有增重效果，苦参提取物可提高肉羊发免疫功能和抗菌能力。伏龙肝具有温中燥湿、止血、止泻之功效，可缓和药性，增强药材的补脾、安胃、止呕、止泻作用。本研究在前人研究的基础上，将苦参、马齿苋、伏龙肝等合理配伍，补中有消，相辅相成，以期达到更好的促生长和增强免疫力的效果，并将该复方作为饲料添加剂应用到肉鸡饲粮中，观察其对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫功能和肠道形态及屏障功能的影响，以期为禁抗后中草药饲料添加剂的研发及其在肉鸡健康养殖生产中的应用提供参考依据。材料与方法 试验材料 本试验所用复方中草药添加剂由苦参（生产批号：）、马齿苋（生产批号：）、伏龙肝（生产批号：）组成，将苦参、马齿苋和伏龙肝粉碎后过 目筛，按 的比例配合、混匀，分装后备用。该复方中草药添加剂的营养成分及有效活性成分含量见表。表 复方中草药添加剂的营养成分及有效活性成分含量（干物质基础）（）营养成分 含量有效活性成分 含量粗蛋白质 水提粗提物 粗脂肪 总黄酮 粗纤维 总多糖 粗灰分 钙 磷 试验设计 试验用肉鸡购自广东佛山南海种禽有限公司。将 只 日龄（初始均重 ）且健康状况良好的黄羽肉鸡公雏随机分成 组，每组 个重复，每个重复 只。对照组（组）饲喂不添加复方中草药添加剂的基础饲粮，试验组分别在基 础 饲 粮 中 添 加 （组）和 （组）复方中草药添加剂。饲养试验周期为 ，分为第 阶段（日龄）和第 阶段（日龄）。饲养管理与基础饲粮 试验于华南农业大学进行，试验开展前清理消毒鸡舍，所有鸡只自由采食和饮水，鸡舍通风和环境符合卫生要求，各组肉鸡饲养试验全程按照黄羽肉鸡饲养管理技术规程（）中的饲养管理技术规程进行饲养管理。基础饲粮参照鸡饲养标准（）配制，其组成及营养水平见表。动 物 营 养 学 报 卷表 基础饲粮组成及营养水平（饲喂基础）（）项目 日龄 日龄 原料 玉米 豆粕 豆油 磷酸氢钙 石粉 食盐 赖氨酸 蛋氨酸 预混料）胆碱 合计 营养水平 ）代谢能 （）粗蛋白质 钙 有效磷 赖氨酸 蛋氨酸 半胱氨酸 ）预混料为每千克饲粮提供 ：，烟酸 ，叶酸 ，生物素 ，泛酸钙 ，。）粗蛋白质为实测值，其余为计算值。，测定指标及方法 营养成分及有效活性成分含量测定 复方中草药添加剂的粗蛋白质（）、粗灰分（）、粗纤维（）、粗脂肪（）、钙（）和磷（）含量参照张丽英的方法测定。准确称取 复方中草药添加剂粉末，加入 蒸馏水 浸 泡 ，、超 声 辅 助 提 取，重 复 次，过 滤，将 滤 液 合 并，、旋转蒸发浓缩药液，将其冷冻干燥（条件：温度阱，真空度 ，干燥 ），计算水提粗提物含量。参考戴洁等的方法，采用苯酚硫酸法进行复方中草药添加剂中多糖含量的测定；参考刘玉明等的方法，采用硝酸钠硝酸铝氢氧化钠（）比色法进行复方中草药添加剂中总黄酮含量的测定。生长性能测定 试验开始时称量肉鸡的体重作为初始体重；分别于试验第 和 天，以重复笼为单元，对全部鸡只称量体重，记录体重（）及饲料消耗量，计算 日龄、日龄和全期（日龄）的平均日采食量（）、平均日增重（）和料重比（）。血清生化指标与抗氧化指标测定 分别于试验第 和 天，每组随机选取 只鸡翅静脉采血，每只采集 于乙二胺四乙酸（）抗凝管中，室温静置 后，离心 取上清，保存待测。采用迈瑞 全自动生化分析仪及迈瑞生物公司生产的配套试剂盒测定血清生化指标，血清生化指标包括：总蛋白（）、白蛋白（）、尿素（）、总胆固醇（）、甘油三酯（）含量与谷丙转氨酶（）、谷草转氨酶（）活性。血清抗氧化指标包括总抗氧化能力（）、总超氧化物歧化 酶（）与 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶（）活性和丙二醛（）含量，均采用南 期刘梦杰等：马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定。免疫相关指标测定 分别于试验第 和 天，每组随机选取 只肉鸡，称量体重并采血后剖杀，去除相关免疫器官表面的结缔组织和脂肪，称重，计算免疫器官指数免疫器官指数（）免疫器官重量（）体重（）；采集空肠中部 左右的肠段，纵向剖开肠段，用预冷的生理盐水冲洗干净食糜后，用载玻片刮取空肠黏膜至 冻存管，于 冰箱中保存备用。血清免疫球蛋白（）、免疫球蛋白（）、白细 胞 介 素 （）、干 扰 素 （）和空肠黏膜分泌型免疫球蛋白（）含量均采用上海酶联生物科技有限公司生产的试剂盒测定。空肠形态测定 在试验第 天，将各组剖杀的肉鸡分离出空肠，剪取中段 ，用生理盐水轻缓地冲洗肠道残留的内容物，洗净后迅速置于 多聚甲醛溶液中常温固定，使用苏木精伊红（）染色后制作石蜡切片。使用 显微镜（，德国）观察切片并拍照，使用 软件测量肠道绒毛高度（）和隐窝深度（），并计算 与 的比值，即绒隐比（）。空肠相关基因表达检测 分别于试验第 和 天，截取空肠，除去肠道内容物并用生理盐水反复洗涤干净，使用无菌载玻 片 刮 取 全 部 黏 膜 组 织 分 装 于 冻 存 管 内，保存备用，用于空肠相关基因表达的测定。通过 试剂法（南京诺唯赞生物科技股份有限公司）提取空肠组织总，用微量紫外可见分光光度计（）测定 浓度和纯度，参照反转录试剂盒 （）说明，对总 进行反转录合成，储存在 冰箱中备用。实时荧光定量 检测采用 染料法，在 仪 器 上 进 行，按 照 试剂盒配制反应体系并进行反应，用 法计算目的基因 相对表达量。所用引物由北京擎科生物技术有限公司合成，引物信息见表。表 引物信息 类型基因引物序列 （）登录号 参考文献内参基因 肌动蛋白：甘油醛磷酸脱氢酶：目的基因 白细胞介素：干扰素：超氧化物歧化酶：谷胱甘肽过氧化物酶：过氧化氢酶：咬合蛋白：闭合蛋白：闭锁小带蛋白：动 物 营 养 学 报 卷 数据统计与分析 试验数据经 处理后，采用 软件进行单因素方差分析（），并采用 氏法进行组间多重比较，试验结果均以平均值和标准误表示，表示差异显著。结 果 复方中草药添加剂对肉鸡生长性能的影响 由表 可知，复方中草药添加剂对 日龄、日龄及 日龄肉鸡的 均无显著影响（），但能显著影响 日龄、日龄及 日龄肉鸡的 与 日龄和 日龄肉鸡的 （）。与 组相比，组对肉鸡 日龄和 日龄肉鸡的 有升高趋势（，），日龄和 日龄肉鸡的 显著降低（）。与 组相比，组 日龄、日龄和 日龄肉鸡 显著提高（），日龄和 日龄肉鸡的 显著降低（）。表 复方中草药添加剂对肉鸡生长性能的影响 项目组别 标准误 值 日龄 平均日增重 （）平均日采食量 （）料重比 日龄 平均日增重 （）平均日采食量 （）料重比 日龄 平均日增重 （）平均日采食量 （）料重比 同行数据肩标不同字母表示差异显著（），相同字母或无字母表示差异不显著（）。下表同。（），（）复方中草药添加剂对肉鸡血清生化指标的影响 由表 可知，复方中草药添加剂对 日龄肉鸡血清、和 含量以及 日龄肉鸡血清、和 含量有显著影响（），对 日龄肉鸡血清、活性与、含量以及 日龄肉鸡血清、活性均没有显著影响（）。与 组相比，组 日龄肉鸡血清 含量显著提高（），日龄肉鸡、含量与 日龄肉鸡血清、含量显著降低（）。与 组 相 比，组 日 龄 肉 鸡 血 清、含量显著升高（），和 日龄肉 鸡 血 清、含 量 显 著 降 低（）。复方中草药添加剂对肉鸡免疫相关指标的影响 由表 可知，复方中草药添加剂对 日龄肉鸡的脾脏指数与血清、和空肠黏膜 含量以及 日龄肉鸡的胸腺指数与血清、和空肠黏膜 含量有显著影响（），对 日龄肉鸡的胸腺和法氏囊指数以及 日龄肉鸡的脾脏和法氏囊指数没有显著影响（）。与 组相比，组 和 日龄肉鸡的血清（，）和 含量（，）有升高趋势。与 组相比，组 日龄肉鸡的脾脏指数和 日龄肉鸡的胸腺指数以及 和 日龄肉鸡的血清、和空肠黏膜 含量显著提高（）。期刘梦杰等：马齿苋、苦参、伏龙肝复方中草药添加剂对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫表 复方中草药添加剂对肉鸡血清生化指标的影响 项目组别 标准误 值 日龄 丙氨酸氨基转移酶 （）天冬氨酸氨基转移酶 （）白蛋白 （）总蛋白 （）总胆固醇 （）甘油三酯 （）尿素 （）日龄 丙氨酸氨基转移酶 （）天冬氨酸氨基转移酶 （）白蛋白 （）总蛋白 （）总胆固醇 （）甘油三酯 （）尿素 （）表 复方中草药添加剂对肉鸡免疫相关指标的影响 项目组别 标准误 值 日龄 脾脏指数 胸腺指数 法氏囊指数 免疫球蛋白 （）免疫球蛋白 （）分泌型免疫球蛋白 （）日龄 脾脏指数 胸腺指数 法氏囊指数 免疫球蛋白 （）免疫球蛋白 （）分泌型免疫球蛋白 （）复方中草药添加剂对肉鸡血清细胞因子含量的影响 由表 可知，复方中