DB34T 2743-2016 槐米及其制品中总黄酮含量的测定 分光光度法.pdf

ICS 67.040 X 00 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 27432016 槐米及其制品中总黄酮含量的测定 分光光度法 Determination of Flavones in Sophora japonica and its products Spectrophotometric method 文稿版次选择 2016-12-30 发布 2017-01-30 实施安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 27432016 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司。本标准起草人：陆玮、刘国英、胡帮超、查枢屏、王玉良、汤有宏、李安军、何宏魁、胡心行、周庆伍、杨恩贺。DB34/T 27432016 1 槐米及其制品中总黄酮含量的测定 分光光度法 1 范围 本标准规定了槐米及其制品中总黄酮含量的测定 分光光度法。本标准适用于槐米、槐米提取液以及槐米发酵液等样品中总黄酮含量的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 5009.3 食品安全国家标准 食品中水分的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 槐米提取液 Sophora japonicas extraction 以槐米为主要原料进行提取而得到的产物。3.2 槐米发酵液 Sophora japonicas fermentation broth 以槐米作为主要原料发酵得到的产物。4 方法原理 本标准采用亚硝酸钠-氯化铝络合分光光度法测定槐米及其制品中的总黄酮含量。在中性或弱碱性且亚硝酸钠存在时，黄酮类化合物与铝盐生成螯合物，加入 NaOH 后溶液呈红橙色，在一定浓度范围内，其吸光度与黄酮类化合物的含量成正比，符合朗伯-比尔定律。5 试剂与材料 5.1 试剂 5.1.1 除另有说明外，本标准所用水应符合 GB/T 6682 的要求。5.1.2 无水乙醇：分析纯。5.1.3 亚硝酸钠：分析纯。DB34/T 27432016 2 5.1.4 氯化铝：分析纯。5.1.5 氢氧化钠：分析纯。5.2 试剂配制 5.2.1 亚硝酸钠溶液（5）：称取 5 g 亚硝酸钠，用水溶解定容至 100 mL；该溶液现配现用。5.2.2 氯化铝溶液（10）：称取 10 g 氯化铝，用水溶解定容至 100 mL。5.2.3 氢氧化钠溶液（4）：称取 4 g 氢氧化钠，用水溶解定容至 100 mL。5.2.4 乙醇溶液（60）：量取 600 mL 无水乙醇，用水溶解定容至 1000 mL。5.3 标准品 芦丁（C27H30O16，CAS号：153-18-4），纯度 99.0。5.4 芦丁标准储备液配制 准确称取 20 mg（精确至 0.1 mg）芦丁标准品，用 60乙醇溶液溶解定容至 100 mL，此溶液中芦丁含量为 200 mg/L。于 4冰箱中避光保存。6 仪器与设备 6.1 本标准中的“仪器”，为分析中所必需的仪器，一般实验室仪器不再列入。6.2 紫外可见分光光度计：配 1 cm 比色皿。6.3 分析天平：感量 0.1 mg。6.4 超声波清洗仪。6.5 离心机。6.6 滤膜：孔径为 0.45 m。7 分析步骤 7.1 试样制备 7.1.1 槐米 称取粉碎均匀的槐米试样 5 g（精确至 0.1 g）于 100 mL 烧杯中，加入 30 mL 60乙醇溶液，超声 30 min，用 60乙醇溶液定容至 50 mL 容量瓶。离心至澄清，过滤待用。7.1.2 槐米提取液试样 吸取 5 mL 提取液于 100 mL 烧杯中，加入 30 mL 60乙醇溶液，超声 10 min，以 60乙醇溶液定容至 50 mL 容量瓶，摇匀，过滤，待测。7.1.3 槐米发酵液试样 准确量取 40 mL 发酵液于 50 mL 具塞离心管中，离心，取上清液，用 0.45 m 的微孔滤膜过滤，吸取 2 mL 滤液，以 60乙醇溶液定容至 25 mL 容量瓶，摇匀，待测。7.2 仪器条件 DB34/T 27432016 3 7.2.1 测定波长：510 nm。7.2.2 比色皿：1 cm。7.3 标准曲线的制作 准确吸取芦丁标准溶液（5.4）0.0，0.5，0.8，1.0，1.3，1.5，1.8，2.0 mL 分别置于 10 m L比色管中，加乙醇溶液（5.2.4）至总体积为 5 mL，加亚硝酸钠溶液（5.2.1）0.3 mL，混匀，静置 8 min；再加入氯化铝溶液（5.2.2）0.3 mL，摇匀，静置 10 min；加氢氧化钠溶液（5.2.3）4.0 mL，用乙醇溶液（5.2.4）定容至刻度，摇匀，静置 10 min。配制成浓度为 0 mg/L、10 mg/L、16 mg/L、20 mg/L、26 mg/L、30 mg/L、36 mg/L、40 mg/L 的标准系列，测定其吸光度值。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。7.4 试样溶液的测定 吸取 1.0 mL 待测液于 10 mL 比色管中，加乙醇溶液（5.2.4）至 5.0 mL，加亚硝酸钠溶液（5.2.1）0.3 mL，混匀，静置 8 min；再加入氯化铝溶液（5.2.2）0.3 mL，摇匀，静置 10 min；加氢氧化钠溶液（5.2.3）4.0 mL，用乙醇溶液（5.2.4）定容至刻度，摇匀，静置 10 min。以未加氢氧化钠试剂的溶液为空白，测定其吸光度值，根据标准曲线计算样品中总黄酮的浓度。7.5 水分含量的测定 按照 GB 5009.3 规定执行。8 分析结果表述 8.1 槐米中总黄酮的含量（以干基计）按式（1）计算：)1(100005.010)(0HmccX.(1)式中：X 槐米中总黄酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c 由标准曲线计算得出的待测样品溶液的总黄酮浓度（mg/L）；c0 由标准曲线计算得出的空白溶液的总黄酮浓度（mg/L）；10 待测液稀释倍数；m 槐米样品的质量，单位为克（g）；0.05 槐米样品的提取液总体积，单位为升（L）；H 槐米中水分的质量分数（）；8.2 槐米制品中总黄酮的含量按式（2）计算：nccX10)(0.(2)式中：X 槐米制品中总黄酮的含量，单位为毫克每升（mg/L）；n 试样溶液稀释倍数。注：所得结果应表示至小数点后一位。DB34/T 27432016 4 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10。_