DB13T 1213-2010 奶牛性控冷精输精和性控胚胎移植操作规程.pdf

ICS 65.020.30B 43D B 1 3、钾 竺，冫 pi省地 、万标味 七，比卜刁DB 13/T 1213-2010奶 牛 性 控 冻 精 输 精 和性 控 胚 胎 移 植 操 作 规 程2010-04-19发布2010-05-04实施河北省质量技术监督局发布DB13/T 1213-2010月 I J 吕 本 标 准 按 照 GB1.1-2009给 出 的 规 则 起 草。本 标 准 由 河 北 省 畜 牧 兽 医 局 提 出。本 标 准 起 草 单 位：河 北 省 畜 牧 兽 医 研 究 所。本 标 准 主 要 起 草 人：安 永 福、桑 润 滋、平 凡、李 林、徐 华、邳 明 伟、邳 静 伟、刘 春 红、郑 国 强、侯井 锋、王 庆 勇、张 克 菊DB13/T 1213-2010奶 牛 性 控 冻 精 输 精 和 性 控 胚 胎 移 植 操 作 规 程范围 本 标 准 规 定 了 奶 牛 性 控 冻 精 和 性 控 胚 胎 的 术 语 和 定 义，性 控 冻 精 的 质 量、保 存 和 运 输，性 控 冻 精 授精 母 牛 的 选 择，性 控 冻 精 的 输 精 操 作，性 控 胚 胎 的 移 植 操 作。本 标 准 适 用 于 奶 牛 养 殖 场（小 区）、人 工 授 精 站（点）对 奶 牛 应 用 性 控 冻 精 输 精 和 进 行 性 控 胚 胎 移植 时 的 操 作。规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文件。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本 文 件。GB 4143-2008牛冷冻精液 GB/T 5458-1997液氮生物容器 NY/T 1335-2007牛人工授精技术规程 NY/T 1445-2007奶牛肝胎释植枯术规程术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准。3.1 性控冻精 通过 精子 分离技术 使奶 用种 公牛 的X.Y精子得到有效 的分离，将分离后得到 的X精子进行分装冷 冻 制 成 的 冷 冻 精 液 制 剂。3.2 性控胚胎 应 用 性 别 鉴 别 技 术 筛 选 出 的 可 用 于 移 植 的 奶 牛 胚 胎。4性控冻精的质量、保存和运输4.1质量 性 控 冻 精 除 每 剂 的 有 效 精 子 数 不 低 于 200万 个、其 中 X精 子 含 量 不 低 于 90 外，其 他 标 准 应 符 合GB 4143-2008的 要 求。性 控 冻 精 输 精 妊 娠 的 母 牛 其 母 犊 出 生 率 应 不 低 于 90%.4.2保存 性 控 冷 冻 精 液 应 浸 泡 在 液 氮 生 物 容 器 中 的 液 氮 中 贮 存，液 氮 生 物 容 器 应 符 合 G B/T 5458-1997的 有关 规 定。应 定 期 检 查 生 物 液 氮 容 器 中 的 液 氮 量，当 液 氮 量 减 少 时 应 及 时 补 充，始 终 保 证 液 氮 液 面 高 于 冷藏 物 品 3 cm-5 cm。包 装 好 的 性 控 冻 精 由 一 个 液 氮 容 器 转 换 到 另 一 液 氮 容 器 时，在 液 氮 容 器 外 停 留 时 间DB13/T 1213-2010不得超过5s04.3运输 性 控 冷 冻 精 液 应 浸 泡 在 液 氮 生 物 容 器 中 的 液 氮 中 运 输，液 氮 生 物 容 器 应 符 合 G B/T 5458-1997的 有关 规 定。运 输 过 程 中 应 避 免 液 氮 生 物 容 器 剧 烈 震 动、倾 斜 和 与 其 他 物 体 碰 撞。5性控冻精授精母牛的选择5.1受 配 母 牛 应 选 择 中、高 产 奶 牛 及 其 后 代。5.2选 择 健 康、膘 情 适 中、体 况 良 好、繁 殖 机 能 正 常 且 无 繁 殖 疾 病 史 的 未 妊 娠 母 牛。5.3首 选 初 配 母 牛 和 三 胎 内 的 经 产 母 牛，以 1 5-2 0 月 龄，体 重 达 3 7 0 kg 以 上 的 青 年 母 牛 最 佳。6性控冻精的输精操作6.1母牛发情鉴定母 牛 的 发 情 鉴 定 按 N Y/T 1335-2007的 规 定 执 行。6.2输精准备输 精 准 备 按 NY/T 1335-2007的 规 定 执 行。6.3解冻性 控 冻 精 的 解 冻 方 法 按 G B 4143-2008的 规 定 执 行。6.4输精时间的确定6.4.1触摸卵泡法 通 过 直 肠 检 查 触 摸 卵 泡。在 卵 泡 壁 薄、满 而 软、有 弹 性 和 波 动 感 明 显 接 近 成 熟 排 卵 时 输 精 一 次；之后 6h-10h再 次 进 行 检 查，若 卵 泡 仍 未 破 裂，再 输 精 一 次。6.4.2外部观察法 观 察 母 牛 的 发 情 表 现，母 牛 接 受 爬 跨 后 8h-12 h是 适 宜 输 精 时 间。如 采 用 两 次 输 精，第 二 次 输 精时 间 为 母 牛 接 受 爬 跨 后 14 h-22 h。青 年 母 牛 的 输 精 时 间 宜 适 当 提 前。6.5输精方法和操作要领6.5.1采 用 直 肠 把 握 输 精 法。输 精 人 员 一 手 五 指 并 握，呈 圆 锥 形 从 肛 门 伸 进 直 肠，动 作 要 轻 柔，在 直肠 内 触 摸 并 把 握 住 子 宫 颈，使 子 宫 颈 把 握 在 手 掌 之 中，另 一 手 将 输 精 器 从 阴 道 下 口 斜 上 方 约 35。一 450角 向 里 轻 轻 插 入 阴 门 前 庭 段 后，略 向 前 下 方 进 入 阴 道 宫 颈 段，双 手 配 合；输 精 器 头 对 准 子 宫 颈 口，在 通过 子 宫 颈 横 行、不 规 则 排 列 中 褶 时，可 用 改 变 输 精 器 前 进 方 向、回 抽、摆 动、滚 动 等 操 作 技 巧，使 输 精器 前 端 通 过 子 宫 颈。插 进 后 过 子 宫 颈 口 螺 旋 状 皱 壁 3 cm-4 cm 到 达 输 精 部 位。6.5.2一 头 母 牛 应 使 用 一 支 输 精 器。注 入 精 液 前 略 后 退 约 0.5 cm，把 输 精 器 推 杆 缓 缓 向 前 推，通 过 细管 中 棉 塞 向 前 注 入 精 液。DB13/T 1213-20106.6输精部位6.6.16.6.2输 精 部 位 一 般 在 排 卵 侧 子 宫 角 深 部，或 是 两 侧 子 宫 角。如 果 能 够 准 确 判 断 出 排 卵 侧 并 能 使 输 精 器 前 端 顺 利 到 达 排 卵 侧 子 宫 角 就 采 用 子 宫 角 深 部 输 精，否 则，采 用 子 宫 体 输 精 器 后 拉 法 输 精，保 证 两 侧 子 宫 角 都 能 有 精 子 进 入。6.7输 精 后的妊 娠 检 查和 未 妊 牛处 理6.7.1输精后的妊娠检查 性 控 冻 精 人 工 授 精 后 的 妊 娠 检 查，按 NY/T 1335-2007的 规 定 执 行。6.7.2输精后未妊牛的处理 参 配 母 牛 在 输 精 后 的 第 一 或 第 二 情 期 观 察 到 了 明 显 的 发 情 表 现，经 直 肠 检 查 确 认 未 妊 娠，应 及 时 用普 通 冻 精 进 行 重 复 授 精；如 果 发 现 发 情 黏 液 不 干 净 或 有 其 他 繁 殖 疾 病，要 停 止 输 精 并 采 取 相 应 的 治 疗 措施，待 疾 病 痊 愈 发 情 表 现 正 常 后 再 进 行 人 工 授 精。6.8注意事项6.8.1使 用 性 控 冻 精 配 种 时，配 种 时 间 尽 量 控 制 在 排 卵 前 6h之 内。6.8.2使 用 性 控 冻 精 时，尽 量 缩 短 解 冻 与 输 精 之 间 的 时 间，应 解 冻 一 支 输 一 支。6.8.3从 液 氮 罐 中 取 性 控 冻 精 时，提 漏 中 的 冻 精 不 可 超 过 液 氮 罐 口，如 果 l0s内 还 没 有 将 性 控 冻 精 取出，应 将 性 控 冻 精 立 刻 沉 入 液 氮 中 然 后 再 提 到 罐 口 重 复 操 作；单 支 性 控 冻 精 取 出 后 在 空 气 中 先 停 留 55左 右，然 后 放 入 38 一 40 温 水 中 l0s后 取 出 用 干 脱 脂 棉 擦 干 后 剪 断 封 口，装 入 输 精 器 准 备 输 精。6.8.4输 精 时 要 保 证 输 精 器 的 无 菌 和 与 输 精 器 接 触 的 部 位 及 器 具 的 干 净 卫 生。6.8.5输 精 器 前 端 插 入 子 宫 颈 口 时 的 动 作 要 求 轻、稳、准，应 尽 量 避 免 创 伤 子 宫 颈 和 子 宫 引 起 出 血。6.8.6在 输 精 8h之 后 进 行 第 二 次 直 肠 检 查 卵 泡 侧，对 于 没 有 排 卵 的 参 配 牛 只，在 推 断 了 排 卵 时 间 后要 继 续 适 时 输 精。7性控胚胎移植7.1供体牛的选择7.1.1供 体 牛 应 选 择 遗 传 性 能 稳 定，系 谱 清 楚，生 产 性 能 优 良 的 母 牛。7.1.2供 体 牛 要 求 健 康 状 况 良 好，体 况 中 等 以 上，生 殖 系 统 和 繁 殖 功 能 正 常，无 遗 传 和 传 染 性 疾 病。7.1.3青 年 母 牛 应 在 14月 龄 以 上 或 达 到 成 年 牛 体 重 70 以 上；成 年 母 牛 应 有 一 胎 以 上 的 正 常 繁 殖 史，10岁 以 上 的 母 牛 一 般 不 选 作 供 体。7.1.4超排处理时按NY/T 1445-2007进行操作。7.2供体牛人工授精 精 液 质 量 应 符 合 GB 4143-2008的 规 定。人 工 授 精使 用 的 冷 冻 精 液，应 根据 供 体 母 牛 选 种 选 配的要 求，选 择 遗 传 性 状 稳 定、系 谱 清 楚、并 经 后 裔 测 定 验 证 为 优 良 种 公 牛 的 冷 冻 精 液。人 工 授 精 按 N Y/T1335-2007的 规 定 执 行。供 体 牛 使 用 性 控 冻 精 人 工 授 精 时，按 本 标 准 第 6章 的 规 定 进 行 操 作。7.3胚胎采集及处理DB13/T 1213-2010 胚 胎 采 集 及 处 理 按 NY/T 1445-2007中 5.3的 规 定 执 行。取 得 胚 胎 后，可 应 用 现 代 生 物 学 技 术（如免 疫 学 方 法、分 子 生 物 学 方 法 等）对 胚 胎 进 行 性 别 鉴 别，废 弃 不 需 要 的 胚 胎。鉴 别 后 的 性 控 胚 胎 如 需 要冷 冻 保 存 和 解 冻，按 NY/T 1445-2007中5.4的规 定 执 行。若 授 精 时 使 用 的 是 性 控 冻 精，则 不 用 进 行 性 别 鉴 别。7.4受体牛的选择 受 体 牛 宜 选 择 低 产 奶 牛、本 地 黄 牛 或 杂 交 牛。要 求 体 型 较 大（体 高 120 cm 以 上），膘 情 适 中，发 情周 期 正 常，生 殖 系 统 无 疾 患。青 年 母 牛 16-18月 龄 以 上；成 母 牛 2-6周 岁，产 后 2个 月 以 上，无 流 产和 繁 殖 疾 病 史。7.5性控胚胎的移植操作 进行性控胚胎移植时，受体牛的同期发情处理和具体移植操作按NY/T 1445-2007中6.2和6.3的 规 定 执 行，有 关 记 录 表 格 参 考 NY/T 1445-2007中 的 第 7章。7.6胚 胎 移植 后 的 妊 娠检 查 和 未妊 娠 牛 的 处理7.6.1胚胎移植后的妊娠检查按 NY/