DB13T 1116-2009 焦糖色中的4-甲基咪唑的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.100D B 1 3省地方标准丬丬16可X、夕了DB13/T 1116-2009焦 糖 色 中 的 4一 甲 基 咪 唑 的 测 定 高效液相色谱法D eterm ination of 4-m ethylim idazo aspartam e in caram el H PLC m ethod2009-05-27发布2009-06-11实施河北省质量技术监督局发 布食品伙伴网http:/ 1116-2009月 I J 吕 本 标 准 中 的 附 录 A 为 资 料 性 附 录。本 标 准 由 河 北 省 质 量 技 术 监 督 局 提 出 并 归 口。本 标 准 起 草 单 位：河 北 省 食 品 质 量 监 督 检 验 研 究 院、河 北 省 食 品 安 全 重 点 实 验 室、河 北 师 范 大 学 生命 科 学 学 院、河 北 医 科 大 学 基 础 医 学 院。本 标 准 主 要 起 草 人：李 挥、张 岩、李 强、刘 敬 泽、吕 品、刘 辰 魁、王 丽 霞、康 素 芬。食品伙伴网http:/ 1116-2009焦 糖 色 中 的 4一 甲 基 咪 唑 的 测 定 高效液相色谱法1范围 本 标 准 规 定 了 焦 糖 色 中 4一 甲 基 咪 唑 的 测 定 方 法。本 标 准 适 用 于 焦 糖 色 中 4一 甲 基 咪 唑 的 测 定。本 方 法 的 检 出 限 为 5 m g/kg.2规范性引用文件 下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，其 随 后 所 有 的修 改 单（不 包 括 勘 误 的 内 容）或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准，然 而，鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准。GB/T 6682分析实验用水规格和试验方法原理样 品 中 4一 甲 基 咪 唑 经 高 效 液 相 反 相 C I8柱 分 离 后，根 据 色 谱 峰 的 保 留 时 间 定 性，根 据 峰 面 积 定 量。4试剂与材料除 另 有 规 定，所 有 试 剂 均 为 分 析 纯，水 为 G B/T 6682规 定 的 一 级 水。甲 醇：色 谱 纯。无 水 乙 醇。三 氯 甲 烷。三 氯 甲 烷 一 无 水 乙 醇 萃 取 液（80:20)：移 取 80 m L的 三 氯 甲 烷 及 20 m L的 无 水 乙 醇 混 合 均 匀 备In乙QU月叶。4444用4.5碳 酸 钠。4.6碳 酸 钠 溶 液（100 g/L)：准 确 吸 取 碳 酸 钠 100 g于 1 000 mL容 量 瓶 中，用 水 定 容 至 刻 度。4.7庚 烷 磺 酸 钠。4.8磷酸二氢钾。4.9磷 酸。4.10磷 酸 二 氢 钾 缓 冲 液（(0.05 m ol/L)：称 取 磷 酸 二 氢 钾 6.8 g、庚 烷 磺 酸 钠 1g于 1 000 m L 容 量瓶 中，加 水 900 m L，用 稀 磷 酸 调 节 pH 至 3.5，用 水 定 容 至 1 000 m L o4.11 4一 甲 基 咪 唑 标 准 品：纯 度）99%o4.1 2 4-甲 基 咪 唑 标 准 储 备 溶 液：准 确 称 取 0.1 0 0 0 g 4 一 甲 基 咪 唑 于 1 0 0 m L 的 容 量 瓶 中，用 流 动 相 溶解 定 容 至 刻 度。4一 甲 基 咪 唑 含 量 1.0 mg/mL，作 为 贮 备 溶 液。4.13 4一 甲 基 咪 唑 标 准 使 用 系 列 溶 液：准 确 吸 取 4一 甲 基 咪 唑 贮 备 溶 液 1.0 m L,2.0 m L,3.0 m L,4.0 m L.5.O mL于 50 mL容 量 瓶 中，用 流 动 相 定 容 至 刻 度，浓 度 分 别 为 20卩 g/mL,40林 g/mL,60林 g/山 L,80.tg/mL.100 g/mL的 系 列 标 准 溶 液，置 于 冰 箱 冷 藏 保 存。5仪器与设备食品伙伴网http:/ 1116-20095.1高 效 液 相 色 谱 仪，带 紫 外 检 测 器。5.2旋 转 蒸 发 器。5.3电 子 天 平：感 重 0.1 mg.0.001 go5.4分液漏斗：250 mL o5 5振 荡 器。5.6微 孔 滤 膜：0.45林 M.6分析步骤6.1样 品 处 理：准 确 称 取 3g样 品（精 确 至 0.001 g)，加 巧 m L 水 溶 解，移 入 250 m L 分 液 漏 斗 中，加 100 g/L 碳 酸钠 溶 液 15 m L，加 三 氯 甲 烷 一 无 水 乙 醇 萃 取 液 60 m L，剧 烈 振 摇 5 m in。静 置 分 层 后，将 有 机 相 移 入 另 一 分液 漏 斗 中，水 相 再 按 同 样 方 法 萃 取 一 次，合 并 有 机 相；用 1 0 0 g/L 碳 酸 钠 溶 液 洗 涤 提 取 液 3 次，每 次 3 0m L。然 后 将 有 机 相 通 过 无 水 硫 酸 钠 滤 入 旋 转 蒸 发 瓶 中，50 浓 缩 至 近 干，取 下，以 水 溶 解 残 渣 并 定 容至 1 0 毗，经 0.4 5 林 m 微 孔 膜 过 滤 后 供 H P L C 分 析。6.2测定6.2.1 HPLC参考条件 分 析 柱：C 18,4.6 m m x250 m m 粒 度 5 m o 流 动 相：甲 醇:0.05 mol几 磷 酸 二 氢 钾 缓 冲 液（(pH 3.5，含 0.1 庚 烷 磺 酸 钠）=5:950 波长：210nmo 流速：1.0 m L/m ino6.2.2 标 准 曲 线：分 别 进 标 准 系 列 溶 液 各 1 0 L，进 行 H P L C 分 析，然 后 以 峰 面 积 为 纵 坐 标，以 4 一 甲基 咪 唑 的 含 量 为 横 坐 标，绘 制 标 准 曲 线。6.2.3试 样 测 定：吸 取 6.1处 理 后 的 试 样 溶 液 10 gL 进 行 H P L C 分 析，测 定 其 峰 面 积，从 标 准 曲 线 查得 测 定 液 中 4一 甲 基 咪 唑 的 含 量7结果计算 试 样 中 4一 甲 基 咪 唑 的 含 量 按 下 式 计 算：X=cxVxl000(1)m x 1000式 中：X一 试 样 中 4一 甲 基 咪 唑 的 含 量，单 位 为 毫 克 每 千 克（m g/kg);c一 由 标 准 曲 线 上 查 得 进 样 液 中 4一 甲 基 咪 唑 的 量，单 位 为 微 克 每 毫 升（林 g/m L);V 一 试 样 稀 释 液 总 体 积，单 位 为 毫 升（m L);m 一 试 样 质 量，单 位 为 克（g);计 算 结 果 保 留 两 位 有 效 数 字。8精密度在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的 10%0食品伙伴网http:/ 1116-2009附 录 A（资 料 性 附 录）4 一 甲 基 咪 唑 标 准 物 质 色 谱 图踢的月 13.08_ a.06_。d a.0S.a.0 2a月a口二a召力i t 10刀a 1召刀a za刀口盆6.013匀a刀a匀习a图 A.1 4一 甲 基 咪 哇 标 准 物 质 色 谱 图食品伙伴网http:/