TSDAA 0047-2021 阿莫西林可溶性粉中非法添加三种硝基 咪唑类药物的测定 高效液相色谱法.pdf

ICSICS 65.020.3065.020.30B B 4343团团 体体 标标 准准T/SDAAT/SDAA 00470047202120212021202111113030 发布发布2021202112123131 实施实施山东省畜牧协会发布发布阿莫西林可溶性粉中非法添加三种硝基咪唑类药物的测定 高效液相色谱法Determination of illegal addition of 3 kinds of nitroimidazoles to amoxicillin soluble powder-Highperformance liquid chromatography全国团体标准信息平台T/SDAAT/SDAA 0047004720212021全国团体标准信息平台T/SDAAT/SDAA 0047004720212021前言本文件按照GB/T 1.12020的规定起草。本文件由山东省畜牧协会提出并归口。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件起草单位：青岛农业大学、诸城外贸有限责任公司、青岛特种食品研究院、南京农业大学、山东省农业科学院家禽研究所、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、青岛九联集团股份有限公司、山东新和盛农牧集团有限公司、济宁绿源食品有限公司、青岛六和万福食品有限公司、青岛新万福食品有限公司、青岛海润农大检测有限公司、中国动物卫生与流行病学中心、山东得利斯食品股份有限公司、南京黄教授食品科技有限公司、潍坊工商职业学院、潍坊市动物疫病预防与控制中心、青岛市畜牧兽医研究所、新希望六和股份有限公司。本文件主要起草人：孙京新、乔昌明、许永国、王宝维、黄明、徐幸莲、宋敏训、汤晓艳、杨圣仁、金钧、张从祥、种震、史蕾、魏玉龙、王玉东、郑乾坤、乔俊杰、徐常青、臧海燕、王秀颖、王鹏、李岩、郭丽萍、苗春伟、张春平、朱连勤、陈甫、冯永胜、王述柏、郝小静、张希斌。本文件为首次发布。全国团体标准信息平台T/SDAAT/SDAA 0047004720212021全国团体标准信息平台T/SDAAT/SDAA 0047004720212021阿莫西林可溶性粉中非法添加三种硝基咪唑类药物的测定高效液相色谱法1范围本文件规定了阿莫西林可溶性粉中非法添加硝基咪唑类药物的高效液相色谱测定方法。本文件适用于阿莫西林可溶性粉中甲硝唑、洛硝达唑、地美硝唑的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要需要界定的术语和定义。4原理试样中甲硝唑、洛硝达唑、地美硝唑用甲醇提取，经C18色谱柱分离，二极管阵列检测器检测，由保留时间与紫外光谱对照定性，外标法定量。5试剂或材料除非另有说明，仅使用分析纯。5.1 水：符合GB/T 6682，一级。5.2 甲醇（CH3OH）:色谱纯。5.3 乙腈（CH3CN）:色谱纯。5.4 乙酸（CH3COOH）:含量99.5%。5.5 0.3%乙酸溶液：量取乙酸3.0mL，用水稀释并定容至1000 mL。5.6 流动相：乙腈+0.3%乙酸溶液=10+90，现用现配。全国团体标准信息平台T/SDAAT/SDAA 00470047202120215.7 对照品：甲硝唑（Metronidazole，C6H9N3O3，CAS号：443-48-1）、洛硝达唑(Ronidazole，C6H8N4O4，CAS号：7681-76-7)、地美硝唑(Dimetridazole，C5H7N3O2，CAS号：551-92-8)，含量均98.0%。5.8 标准贮备溶液（1000g/mL）：精密称取甲硝唑、洛硝达唑、地美硝唑对照品各 50mg（精确至 0.00001g），用甲醇溶解定容于 50mL 棕色容量瓶中，分别配制成浓度为 1000g/mL的对照品标准贮备溶液，4以下保存，有效期 6 个月。5.9 混合标准中间工作溶液（100g/mL）：分别准确量取 10.0mL 标准贮备溶液（5.8）用甲醇混合定容至 100mL，配制成浓度为 100g/mL 的混合标准中间工作溶液，4以下保存，有效期 1 个月。5.10 混合标准工作溶液：准确量取 0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL、10.0mL 混合标准中间工作溶液（5.9）用甲醇分别稀释定容至 50mL，制得浓度为 1.0g/mL、2.0g/mL、5.0 g/mL、10.0 g/mL、20.0 g/mL 的系列混合标准工作溶液，现用现配。5.11 微孔滤膜：0.45m，有机相。6 仪器设备6.1 高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器（分辨率小于 1.2nm）。6.2 分析天平：感量 0.001g，0.0000 1g。6.3 高速离心机：转速不低于 12000r/min。6.4 超声波清洗器。7 7 试验步骤试验步骤7.17.1 提取提取平行做两份试验。称取试样 1 g（精确至 0.001 g)，于 50 mL 棕色容量瓶中，加甲醇40 mL 摇匀，超声 15min，取出冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，静置。取适量溶液于 50mL 塑料离心管中，10000r/min 离心 10min，上清液用 0.45m 微孔滤膜过滤，供高效液相色谱仪测定。7 7.2 2 色谱色谱参考参考条件条件色谱柱：C18色谱柱：柱长 250mm，内径 4.6mm，粒径 5m，或性能相当者；流动相：4.6；柱温：40；全国团体标准信息平台T/SDAAT/SDAA 0047004720212021流速：1.0 mL/min；进样量：10 L；定量检测波长：315nm；定性采集波长范围：200nm400nm。7 7.3 3 测定测定在仪器的最佳条件下，取系列混合标准工作溶液、试样溶液上机测定。7 7.3.13.1 定性定性通过试样溶液色谱图的保留时间与相应标准溶液色谱图的保留时间以及色谱峰的紫外光谱相对照定性。试样溶液保留时间与标准溶液保留时间一致（差异小于等于5%），且为单一物质峰（纯度角小于纯度阈值）；试样溶液色谱峰的紫外光谱与标准溶液色谱峰的紫外光谱一致（匹配角小于匹配阈值），且最大吸收波长一致（差异小于等于2nm），则可判断试样中存在相对应的药物。甲硝唑、洛硝达唑、地美硝唑标准溶液紫外光谱图参见附录 A。7 7.3 3.2 2 定量定量记录 315 nm 波长处的色谱图，以峰面积为纵坐标，对应的标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据标准曲线计算得到试样溶液中硝基咪唑类药物的浓度（g/mL）。若试样溶液浓度超出曲线测定范围应稀释到曲线测定范围内。标准溶液色谱参见附录 B。8 8 试验数据处理试验数据处理试样中硝基咪唑类药物的含量以质量分数wi计，数值以克每千克(g/kg)表示，按公式(1)计算：wi=1000全国团体标准信息平台T/SDAAT/SDAA 0047004720212021（1）式中：i试样溶液中对应的某种硝基咪唑类药物的浓度，单位为微克每毫升(g/mL)；m 试样质量，单位为克（g）；V 样品最终定容体积，单位为毫升（mL）；计算结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9.检测方法检测限、定量限、回收率、精密度9.19.1 检测限和定量限检测限和定量限本方法的检测限为0.015g/kg，定量限为0.05g/kg。9.29.2 回收率回收率本方法在 0.05g/kg2.5g/kg 添加浓度水平上的回收率为 95%105%。9.39.3 精密度精密度在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的差值不大于该算术平均值的5%。全国团体标准信息平台T/SDAAT/SDAA 0047004720212021附录 A(资料性)甲硝唑、洛硝达唑、地美硝唑紫外光谱图A.1 甲硝唑紫外光谱图见图 A.1。AU0.000.02nm200.00250.00300.00350.00228.6317.5图 A.1甲硝唑紫外光谱图A.2 洛硝达唑紫外光谱图见图 A.2。AU0.000.02nm200.00250.00300.00350.00207.4309.2图 A.2 洛硝达唑紫外光谱图全国团体标准信息平台T/SDAAT/SDAA 0047004720212021A.3 地美硝唑紫外光谱图见图 A.3。AU0.000.020.04nm200.00250.00300.00350.00203.9317.5图A.3地美硝唑紫外光谱图附录 B(资料性)硝基咪唑类药物标准溶液色谱图B.1硝基咪唑类药物标准溶液色谱图见图B.1。AU0.000.020.04Minutes2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.00MET-7.327RON-8.850DIM-10.081说明：甲硝唑（MET）；洛硝达唑（RON）；地美硝唑（DIM）。图 B.1 硝基咪唑类药物标准溶液色谱图（20.0g/mL）_全国团体标准信息平台