TPIAC 00002-2021 抗生素菌渣及有机肥基料、作物、环境介质中头孢菌素检测方法.pdf

抗生素菌渣及有机肥基料、作物、环境介质中头孢菌素检测方法 Method for determination of cephalosporin in antibiotic fermentation residue,raw fertilizer material,crop,and related environments（发布稿）2021-08-01 发布 2021-08-01 实施 中国化学制药工业协会 发 布PIAC 中国化学制药工业协会团体标准 T/PIAC 000022021 全国团体标准信息平台T/PIAC 000022021 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2020的规则起草。本标准由中国家环境保护抗生素菌渣无害化处理与资源化利用工程技术中心提出。本标准由中国化学制药工业协会归口。本文件起草单位：国家环境保护抗生素菌渣无害化处理与资源化利用工程技术中心、同济大学、中国科学院生态环境研究中心、中国环境科学研究院、北京农业生物技术研究中心、清华大学、新疆大学、哈尔滨工业大学、常州大学、中广核达胜科技有限公司。本文件主要起草人：沈云鹏、任立人、刘惠玲、张昱、田书磊、王建龙、贾殿赠、王旭明、初里冰、潘广成、雷英、邓留杰、董丽萍、杨敏、王鲁香、戴晓虎、蔡辰、田哲、吴昊、邓葵、任建军、刘尊奇、刘胜辉、周春华、张远斌、冯书娟、刘希禹、张幼学、殷文娟、刘淑云、陈启军、地尔夏提.艾沙江、李志杰。本标准首批承诺执行单位：国家环境保护抗生素菌渣无害化处理与资源化利用工程技术中心、同济大学、中国科学院生态环境研究中心、中国环境科学研究院、北京农业生物技术研究中心、清华大学、新疆大学、常州大学、新疆农业大学、新疆环境科学研究院、伊犁州环境监测站、伊犁州检验检测认证研究院、伊犁川宁生物技术股份有限公司。全国团体标准信息平台T/PIAC 000022021 II 目目 录录 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 抗生素菌渣及有机肥基料中头孢菌素 C 的测定 液相色谱法.1 3.1 原理.1 3.2 试剂和材料.1 3.2.1 试剂.1 3.2.2 试剂配制.2 3.2.3 标准品.2 3.2.4 标准溶液配制.2 3.2.5 材料.2 3.3 仪器设备.2 3.4 样品.3 3.5 分析步骤.3 3.5.1 提取.3 3.5.2 净化.3 3.5.3 测定.3 3.5.4 加标实验.4 3.5.5 平行试验.4 3.6 结果计算.4 3.7 准确度和精密度.4 4 土壤中头孢菌素 C 的测定 液相色谱-串联质谱法.6 4.1 原理.6 4.2 试剂和材料.6 4.2.1 试剂.6 4.2.2 试剂配制.6 4.2.3 标准品.6 4.2.4 标准溶液配制.6 4.2.5 材料.7 4.3 仪器设备.7 4.4 样品.7 4.5 分析步骤.7 4.5.1 提取.7 4.5.2 净化.8 4.5.3 测定.8 4.5.4 加标实验.9 4.5.5 平行试验.9 4.6 结果计算与表述.9 4.6.1 定性测定.9 4.6.2 定量测定.9 4.7 精密度和准确度.9 5 作物中头孢菌素 C 的测定 液相色谱-串联质谱法.11 5.1 原理.11 5.2 试剂和材料.11 5.2.1 试剂.11 5.2.2 试剂配制.11 5.2.3 标准品.11 全国团体标准信息平台T/PIAC 000022021 III 5.2.4 标准溶液配制.11 5.2.5 材料.11 5.3 仪器设备.12 5.4 样品.12 5.5 分析步骤.12 5.5.1 提取.12 5.5.2 净化.12 5.5.3 测定.12 5.5.4 加标实验.13 5.5.5 平行试验.13 5.6 结果计算与表述.13 5.6.1 定性测定.13 5.6.2 定量测定.13 5.7 精密度和准确度.13 6 水中头孢菌素 C 的测定 液相色谱-串联质谱法.15 6.1 原理.15 6.2 试剂和材料.15 6.2.1 试剂.15 6.2.2 试剂配制.15 6.2.3 标准品.15 6.2.4 标准溶液配制.15 6.2.5 材料.15 6.3 仪器设备.16 6.4 样品采集与保存.16 6.5 分析步骤.16 6.5.1 调节水样 pH.16 6.5.2 净化.16 6.5.3 测定.16 6.5.4 加标实验.17 6.5.5 平行试验.17 6.6 结果计算与表述.17 6.6.1 定性测定.17 6.6.2 定量测定.17 6.7 精密度和准确度.17 7 大气中头孢菌素 C 的测定 液相色谱-串联质谱法.18 7.1 原理.18 7.2 试剂和材料.18 7.2.1 试剂.18 7.2.2 试剂配制.18 7.2.3 标准品.18 7.2.4 标准溶液配制.18 7.2.5 材料.18 7.3 仪器设备.18 7.4 样品.19 7.5 分析步骤.19 7.5.1 预处理.19 7.5.2 测定.19 7.5.3 加标实验.19 7.5.4 平行试验.20 全国团体标准信息平台T/PIAC 000022021 IV 7.6 结果计算与表述.20 7.6.1 定性测定.20 7.6.2 定量测定.20 7.7 精密度和准确度.20 附录 A.21 全国团体标准信息平台T/PIAC 000022021 1 抗生素菌渣及有机肥基料、作物、环境介质中 头孢菌素检测方法 1 1 范围范围 本标准规定了抗生素发酵生产过程产生的废菌丝体（抗生素菌渣）在进行无害化处理与资源化利用过程中头孢菌素 C 的检测方法。本标准适用于抗生素菌渣及无害化处理后制备的有机肥基料、作物、环境介质（土壤、水、大气）中头孢菌素 C 的检测。本方法检出限分别为：抗生素菌渣及有机肥基料中头孢菌素 C 0.05 mg/kg；土壤中头孢菌素 C 10 g/kg；作物中头孢菌素 C 10 g/kg；水中头孢菌素 C 0.1 g/L；大气中头孢菌素 C 0.02 g/m。2 2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分，总则与定义 GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分，确定标准测量方法重复性和再现性的基本方法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 HJ/T 166-2004 土壤环境监测技术规范 3 3 抗生素菌渣及有机肥基料中头孢菌素抗生素菌渣及有机肥基料中头孢菌素 C 的测定的测定 液相色谱法液相色谱法 3.1 原理 试样中头孢菌素 C 经水提取，固相萃取小柱净化处理后，采用高效液相色谱仪测定，外标法定量。3.2 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。3.2.1 试剂 全国团体标准信息平台T/PIAC 000022021 2 3.2.1.1 甲醇：色谱纯。3.2.1.2 超纯水：18.2 Mcm，25。3.2.1.3 甲酸：色谱纯。3.2.1.4 盐酸。3.2.1.5 氢氧化钠。3.2.2 试剂配制 3.2.2.1 0.1%甲酸：量取1 mL甲酸，用超纯水定容至1 L。3.2.2.2 稀盐酸：1M，量取10 mL分析纯盐酸，用水定容至100 mL。3.2.2.3 稀氢氧化钠：1M，称取4 g分析纯氢氧化钠，用水定容至100 mL。3.2.2.4 洗脱液：2%甲酸甲醇溶液，量取2 mL甲酸，用甲醇定容至100 mL。3.2.3 标准品 3.2.3.1 头孢菌素C标准品：cephalosporin C，C16H21N3O8S，CAS号：61-24-5，纯度98%。3.2.4 标准溶液配制 3.2.4.1 头孢菌素 C 标准溶液（1000 mg/L）：准确称取 100 mg 头孢菌素 C 标准品，用水溶解并定容至 100 mL，现用现配。3.2.4.2 空白样品提取液：称取空白试样，按照 3.5.1 预处理方法制备。3.2.5 材料 3.2.5.1 固相萃取柱（阴离子交换柱-SAX 柱或相当者）：500 mg/6 mL。使用前按照说明书进行活化，保持柱体湿润。3.2.5.2 微孔滤膜：0.22 m，水系。3.2.5.3 聚丙烯离心管：50 mL、15 mL。3.2.5.4 试验筛：0.5 mm。3.3 仪器设备 3.3.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器。3.3.2 电子天平，感量0.0001 g。3.3.3 高速冷冻离心机。全国团体标准信息平台T/PIAC 000022021 3 3.3.4 pH计：测量精度 0.02。3.3.5 固相萃取装置。3.3.6 氮吹仪。3.3.7 超声波清洗器 3.3.8 涡旋振荡器。3.4 样品 3.4.1 样品制备 液态抗生素菌渣直接称量即可，菌渣的干制品和有机肥基料需研磨，过筛（0.5 mm）。3.4.2 样品保存 样品于冷藏箱保存（28）。3.5 分析步骤 3.5.1 提取 称取样品约1 g（精确至0.0001 g），于50 mL聚丙烯离心管中，加入20 mL水，涡旋振荡1 min，超声辅助提取10 min，以4000 rpm离心10 min，取上清液。重复操作一次，合并上清液，使用稀盐酸溶液或者稀氢氧化钠溶液调节pH至8.0。3.5.2 净化 将上述提取液以5 mL/min的流速通过已活化的固相萃取柱，用5 mL水淋洗萃取小柱，弃去全部淋洗液。减压抽干5 min，用6 mL洗脱液洗脱目标物，洗脱液置于氮吹仪上氮吹至近干。用1 mL水复溶残渣，经0.22 m微孔滤膜过滤，供高效液相色谱仪检测。3.5.3 测定 3.5.3.1 液相色谱检测条件 a)色谱柱：C18，4.6 250 mm，5 m，或能力相当者；b)柱温：35；c)进样量：20 L；d)检测波长：254 nm；e)流动相及梯度洗脱条件，见表 1。全国团体标准信息平台T/PIAC 000022021 4 表 1 流动相及梯度洗脱条件 时间/min 流速/(mL/min)流动相A（甲醇）/%流动相B（0.1%甲酸）/%0.00 1.0 3 97 10.00 3 97 10.01 90 10 18.00 90 10 18.01 3 97 25.00 3 97 3.5.3.2 工作曲线 从头孢菌素C标准溶液（3.2.4.1）中分别取0 mL、0.1 mL、0.5 mL、1 mL、5 mL、10 mL，用样品空白提取液稀释定容到100 mL，该系列标准溶液浓度为：0 mg/L、1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、50 mg/L、100 mg/L，以浓度和相应峰面积值为x轴、y轴绘制工作曲线。3.5.3.3 样品检测 试样溶液直接（或适当稀释后）与系列标准溶液在相同条件下检测，由工作曲线计算出相应头孢菌素C的含量。3.5.4 加标实验 参照GB/T 6379.1和GB/T 6379.4进行验证实验，添加1.0 mg/kg标准品到试样中，按以上步骤提取和检测，计算试样本底抗生素浓度和加标后抗生素浓度。3.5.5 平行试验 参照GB/T 6379.1和GB/T 6379.2进行验证实验，做两份试样的平行试验。3.6 结果计算 采用工作曲线法定量。按下式或仪器数据处理软件计算：X=CiVmK 式中：X试样中被测物质的含量，mg/kg；Ci从工作曲线得到的被测组分溶液浓度的数值，g/mL；V试液定容体积的数值，mL；m试样质量，g；K稀释因子。取平行测定结果的算术平均值为测定结果。3.7 准确度和精密度 全国团体标准信息平台T/PIAC 000022021 5 3.7.1 本方法在1.0 mg/kg添加浓度水平上的回收率在80%115%之间。3.7.2 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。全国团体标准信息平台T/PIAC 000022021 6 4 4 土壤中头孢菌