TZZB 0393-2018 银杏叶提取物.pdf

T/ZZB 03932018 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由浙江省品牌建设联合会提出并归口。本标准由浙江蓝箭万帮标准技术有限公司牵头组织制定。本标准主要起草单位：浙江康恩贝制药股份有限公司。本标准参与起草单位：金华市食品药品检验检测研究院。本标准主要起草人：叶剑锋、王宜祥、姚建标、胡林水、雷凯琴、沈紫江、张云飞、赵丹、郑涛。本标准由浙江蓝箭万帮标准技术有限公司负责解释。T/ZZB 03932018 1 银杏叶提取物 1 范围 本标准规定了银杏叶提取物的基本要求、技术要求、检测方法、检验规则及标签、包装、运输、贮存以及质量承诺等。本标准适用于以银杏干燥叶经乙醇溶液提取分离制成的银杏叶提取物。【中文名称】银杏叶提取物【CAS NO.】90045-36-6【英文名称】GINKGO LEAVES EXTRACT 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB 8978 污水综合排放标准 GB 21906 中药类制药工业水污染物排放标准 中华人民共和国国际商务标准(SW/T 1-2013)国际商务标准 植物提取物 银杏叶提取物 中华人民共和国药典（2015年版）一部 银杏叶提取物 中国人民共和国药典（2015年版）四部 环境保护部 危险废物规范化管理指标体系 3 基本要求 3.1 工艺 银杏叶提取物由干燥银杏叶经粉碎、乙醇溶液提取、上柱吸附、浓缩干燥等工序生产制得。3.2 原料 应从按照中药生产质量管理规范要求的规范化种植基地采摘银杏Ginkgo biloba L.的鲜叶，采收期为6月10月，经去除杂质，快速高温干燥而成的干燥叶。经干燥后的银杏叶应符合表1要求。表1 原料检测项目 项目名称 指标 测试方法 总黄酮醇苷（以干燥品计）/（）0.40 中华人民共和国药典2015版一部 萜类内酯（以干燥品计）/（）0.25 中华人民共和国药典2015 版一部 水分/（）12.0 中华人民共和国药典2015 版一部 总灰分/（）10.0 中华人民共和国药典2015 版一部 T/ZZB 03932018 2 表1（续）项目名称 指标 测试方法 杂质/（）2 中华人民共和国药典2015 版一部 酸不溶性灰分/（）2.0 中华人民共和国药典2015 版一部 醇溶性浸出物/（）25.0 中华人民共和国药典2015 版一部 3.3 生产设备 3.3.1 应具备自动上料、提取、履带干燥、金属在线检测等生产设备，设备应具有在线清洗以及洁净除尘等自控功能。3.3.2 生产过程使用的设备应无毒、耐腐蚀、不得与产品发生化学反应、不得吸附产品或向产品中释放物质，与产品直接接触的设备应采用 316 L 型不锈钢材质。全程物料运输处于全封闭状态，减少与外界接触产生交叉污染的风险。3.4 过程控制 生产过程应符合药品生产质量管理规范（GMP）要求，成品干燥、粉碎、混合和包装等工序应在D级洁净控制区内进行，全程空调系统、水系统、生产系统等均应当有在线监控。3.5 检测能力 应具备产品的性状、鉴别、水分、炽灼残渣、粒度、芦丁、乙醇、黄酮苷元峰面积比、游离黄酮苷元、总银杏酸、槐角苷、重金属、铅、镉、砷、汞、指纹图谱、总黄酮醇苷、萜类内酯以及微生物限度检查的检测能力。3.6 安全环保 3.6.1 生产过程废水排放应符合 GB 8978 中限值标准的规定。3.6.2 废水排放应执行 GB 21906 中规定的排放标准。3.6.3 危险固废应按照危险废物规范化管理指标体系中的要求实施。4 技术要求 4.1 性状要求 应符合表2规定。表2 性状要求 项目 要求 色泽 浅棕黄色至棕褐色 气味 气微，味微苦 外观 均匀，无可见异物粉末 4.2 理化指标 应符合表3规定。T/ZZB 03932018 3 表3 理化指标 项目名称 指标 鉴别（1）薄层色谱鉴别 供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。（2）液相色谱鉴别 供试品色谱中应呈现与银杏叶总内酯对照提取物色谱峰保留时间相对应的色谱峰。检 查 水分/（）3.0 炽灼残渣/（）0.6 重金属/（mg/kg）10 铅（Pb）/（mg/kg）1.0 镉（Cd）/（mg/kg）0.2 砷（As）/（mg/kg）1.0 汞（Hg）/（mg/kg）0.1 粒度 99通过五号筛 芦丁/（）4.0 乙醇/（）0.2 黄酮苷元峰面积比 槲皮素与山柰素的峰面积比应为 0.81.2 异鼠李素与槲皮素的峰面积比应0.15 游离黄酮苷元（以干燥品计）每 1g 含槲皮素（C15H10O7）不得过 5.0 mg，山柰素不得过 5.0 mg，异鼠李素（C16H12O7）不得过 2.0 mg 总银杏酸以白果新酸计/（mg/kg）1 槐角苷 不得显阳性 黄曲霉毒素 每 1000 g 含黄曲霉毒素 B1不得过 2 g，含黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素 G2的总量不得过 4 g 指纹图谱 与对照指纹图谱相似度不得低于 0.90 含量测定（以干燥品计）总黄酮醇苷/（）26.0 萜类内酯（以白果内酯、银杏内酯 A、银杏内酯B 和银杏内酯 C 的总量计）萜类内酯不得少于 7.0，其中白果内酯（BB）不得少于 2.6 4.3 微生物要求 应符合表4的规定。表4 微生物要求 项目 指标 需氧菌总数/（cfu/g）500 霉菌和酵母菌总数/（cfu/g）50 大肠埃希菌 不得检出/g T/ZZB 03932018 4 5 检测方法 5.1 安全提示及一般要求 5.1.1 本实验方法中涉及部分具有腐蚀性和毒害性的试剂，应按规定操作，使用时应小心谨慎。试剂储存应符合规定和要求。5.1.2 除特别标明外，用于液相测定和气相测定使用的试剂均为色谱级，用于测定铅、镉、砷、汞使用的试剂均为优级纯，其他一般测定所用试剂为分析纯，水为超纯水或相应纯度的水，未标明溶剂的溶液为水溶液。测定中所需溶液在未注明时，均按中华人民共和国药典2015 版的规定制备。5.2 性状要求 启开试样后，立即嗅其气和尝其味；另取试样适量置于白色瓷盘中观察其色泽、外观，并检查有无异物。5.3 鉴别 5.3.1 鉴别（1）：按中华人民共和国药典2015 版一部中银杏叶提取物【鉴别】项下“（1）”规定的方法进行测定。5.3.2 鉴别（2）：按中华人民共和国药典2015 版一部中银杏叶提取物【鉴别】项下“（2）”规定的方法进行测定。5.4 水分 按中华人民共和国药典2015版一部中银杏叶提取物【检查】项下“水分”规定的方法进行测定。5.5 炽灼残渣 按中华人民共和国药典2015版一部中银杏叶提取物【检查】项下“炽灼残渣”规定的方法进行测定。5.6 重金属 取【炽灼残渣炽灼残渣】项下残渣，按中华人民共和国药典2015版一部中银杏叶提取物项【检查】项下“重金属”规定的方法进行测定。5.7 铅 按中华人民共和国药典2015年版四部铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.8 镉 按中华人民共和国药典2015版四部铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.9 砷 按中华人民共和国药典2015版四部铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.10 汞 按中华人民共和国药典2015版四部铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.11 粒度 T/ZZB 03932018 5 取样品约30 g，按中华人民共和国药典2015版四部第二法进行测定。5.12 芦丁 5.12.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254 nm。理论板数按芦丁峰计算应不低于15000。表5 芦丁色谱条件与系统适用性试验 时间（min）流动相 A（）流动相 B（）040 9064 1036 4045 640 36100 4550 0 100 5051 090 10010 5160 90 10 5.12.2 对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。5.12.3 供试品溶液的制备 取银杏叶提取物100 mg，精密称定，置于10 ml容量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45m滤膜，取续滤液，即得。5.12.4 测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 l，注入液相色谱仪，测定，计算芦丁的含量。5.13 乙醇 5.13.1 色谱条件与系统适用性试验 以聚乙二醇（PEG-20M）为固定相的毛细管柱，柱温为程序升温：初始温度40，保持5 min，以每分钟10 速率升温至50，保持7分钟，再以每分钟20 速率升温至150，保持2分钟，再以每分钟50 速率升温至200，保持2 min。检测器温250；顶空瓶平衡温度100，平衡时间35 min。5.13.2 对照溶液的制备 精密称取无水乙醇适量，用N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释制成0.5mg/ml的溶液，摇匀，即得。精密量取对照溶液2 ml，置于5 ml顶空瓶中，密封。5.13.3 供试品溶液的制备 精密称取银杏叶提取物约0.6 g，置5 ml顶空瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺2 ml溶解，密封。5.13.4 测定法 进样，记录色谱图。按外标法以峰面积计算。5.14 黄酮苷元峰面积比 T/ZZB 03932018 6 按5.20.1中项下的总黄酮醇苷色谱峰计算槲皮素与山柰素的峰面积比值，异鼠李素与槲皮素的峰面积比的比值。5.15 游离黄酮苷元 5.15.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4磷酸溶液（50:50）为流动相；检测波长为360 nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500 5.15.2 对照品溶液的制备 分别取槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含30 g、30 g、20g的混合溶液，作为对照品溶液。5.15.3 供试品溶液的制备 取银杏叶提取物约40 mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80甲醇溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）20分钟，取出，放冷，再称定重量，用80甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。5.15.4 测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 l，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量。5.16 总银杏酸 按中华人民共和国药典2015版一部中银杏叶提取物项【检查】项下“总银杏酸”项规定的方法进行测定。5.17 槐角苷 5.17.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以乙腈为流动相B，以0.4磷酸溶液为流动相C；按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260 nm。理论板数按槐角苷峰计算应不低于40000。表6 槐角苷色谱条件与系统适用性试验 时间（min）流动相 A（）流动相 B（）流动相 C（）020 1525 8 7767 2040 2550 8 6742 4041 5015 8 4277 5.17.2 专属性试验 分别取银杏叶对照提取物溶液，槐角对照药材溶液及槐角苷对照品溶液，进样分析。银杏叶对照提取物溶液在与槐角苷对照品保留时间相同位置不得出现干扰峰，若有干扰，峰面积不得超过槐角苷对照品峰面积的5；槐角对照药材溶液中，槐角苷与其他色谱峰分离度应符合要求。5.17.3 对照溶液的制备 T/ZZB 03932018 7 取槐角苷对照品适量，精密称定，加80甲醇制成每1ml含20.0 g的溶液，作为对照品溶液；另取银杏叶对照提取物40 mg，加入80甲醇溶液20 ml超声处理10分钟，滤过，取续滤液，即得银杏叶对照提取物溶液；再取槐角对照药材40 mg，同法制成槐角对照药材溶液。5.17.4 供试品溶液的制备 取银杏叶提取物