TZNZ 056-2021 水产品中39种农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICS 67.120.30 CCS B 50 T/ZNZ 浙 江 省 农 产 品 质 量 安 全 学 会 团 体 标 准 T/ZNZ 0562021 水产品中 39 种农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of 39 pesticides residues in aquatic product by liquid chromatography-tandem mass spectrometric method 2021-04-22 发布 2021-05-22 实施 浙江省农产品质量安全学会 发 布全国团体标准信息平台T/ZNZ 0562021 I 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容有可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。本文件起草单位：绿城农科检测技术有限公司、蓝城检测技术（上海）有限公司、浙江省农业科学院、浙江省水产质量检测中心、岛津企业管理（中国）有限公司、湖州市农畜水产品检测中心。本文件主要起草人：何晓明、杨鲁琼、章舒祺、余鹏飞、黄福勇、徐杰、洪琳、郭利攀、缪亚飞、赵月钧、朱凝瑜、朱萌萌、沈东强、刘标、武肖、朱晓霞、田平。全国团体标准信息平台T/ZNZ 0562021 1 水产品中 39 种农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本文件规定了水产品中39种农药及相关化学品残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于鱼类、虾类、蟹类、鳖类等水产品中39种农药及相关化学品残留量的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理 试样用乙腈提取，盐析离心，QuEChERS净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。5 试剂和材料 5.1 试剂 5.1.1 乙腈（C2H3N）：色谱纯。5.1.2 甲酸（CH2O2）：色谱纯。5.1.3 正己烷（C6H14）：色谱纯。5.1.4 无水硫酸镁（MgSO4）：650 灼烧 4 h，置于干燥器内备用。5.1.5 氯化钠（NaCl）：500 灼烧 4 h，置于干燥器内备用。5.1.6 N-丙基乙二胺吸附剂（PSA）：粒径范围 40 m60 m，平均孔径 100。5.1.7 十八烷基键合硅胶吸附剂（C18）：粒径范围 40 m60 m，平均孔径 60 。5.1.8 微孔滤膜：0.22 m，有机膜。注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。5.2 试剂配制 5.2.1 0.1%甲酸水溶液：量取 1 mL 甲酸（5.1.2）于 1 000 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。全国团体标准信息平台T/ZNZ 0562021 2 5.2.2 0.1%甲酸乙腈溶液：量取 1 mL 甲酸（5.1.2）于 1 000 mL 容量瓶中，用乙腈（5.1.1）定容至刻度，混匀。5.2.3 QuEChERS 吸附剂：准确称取 100 mg PSA（5.1.6）、100 mg C18（5.1.7）和 300 mg 无水硫酸镁（5.1.4），储存于 15 mL 具螺旋盖聚丙烯离心管中，旋紧盖塞，置于干燥器内备用。5.2.4 定容液：量取 30 mL 乙腈（5.1.1）于 100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。5.2.5 乙腈饱和正己烷：取 200 mL 正己烷（5.1.3）于 250 mL 分液漏斗中，加入适量乙腈后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙腈层即得。5.3 标准品 39种农药的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子量见附录A，纯度应95%。5.4 标准溶液配制 5.4.1 标准储备溶液：分别准确称取标准品（5.3）100.0 mg（精确至 0.0001 g），用甲醇溶解并定容至 100 mL，此溶液浓度均为 1 mg/mL。4 避光密封保存，有效期 6 个月。5.4.2 混合标准中间溶液：取 1.00 mL 标准储备溶液（5.4.1）用甲醇定容至 100 mL，配制成 10 g/mL的混合标准中间溶液，4 避光密封保存，有效期 1 个月。5.4.3 空白基质溶液：称取空白试样，按照 7.2 规定的样品预处理方法操作制备。5.4.4 基质混合标准溶液：用空白基质溶液（5.4.3）将混合标准中间溶液（5.4.2）稀释成适合浓度的基质混合标准溶液，现配现用。6 仪器和设备 6.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.0001 g。6.3 离心机：转速不低于 8 000 r/min，控温范围为 0 至室温。6.4 涡旋振荡器。6.5 超声波清洗器。7 分析步骤 7.1 试样制备与保存 将抽取的样品充分搅碎和混匀。用四分法缩分出1 kg，均分为2份，分别装入洁净容器内，作为试样。密封并标明标记。将试样于-18 以下冷冻保存。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7.2 试样前处理 7.2.1 提取 取试样，常温自然解冻后，称取 5 g 试样（精确至 0.01g）于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 水，5 g氯化钠（5.1.5），涡旋混匀 1 min 后，准确加入 10.0 mL 乙腈（5.1.1），混匀 1 min，超声提取 20 min，4 下 8 000 r/min 离心 5 min。全国团体标准信息平台T/ZNZ 0562021 3 7.2.2 净化和浓缩 准确量取8.00 mL提取液置于装有QuEChERS吸附剂（5.2.3）的离心管中，涡旋混匀3 min，4 下8 000 r/min离心3 min。静置5 min后，取4.00 mL上清液氮吹至近干，精密加入1.00 mL定容液（5.2.4）溶解残余物，加1 mL乙腈饱和正己烷（5.2.5），转至10 mL离心管中，涡旋混匀10 s，以8 000 r/min离心3 min，取下清液过0.22 m微孔滤膜（5.1.8），供液相色谱-串联质谱联用仪分析。7.3 测定 7.3.1 色谱参考条件 色谱各参数应符合下列条件：a)色谱柱：WATERS ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm 100 mm,1.7 m），或性能相当者；b)流动相：A：0.1%甲酸水溶液（5.2.1），B：0.1%甲酸乙腈溶液（5.2.2）；c)柱温：40；d)流速：0.25 mL/min；e)进样量：2 L；f)梯度洗脱程序见表 1。表 1 梯度洗脱程序 时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0.0 70 30 1.0 70 30 3.0 50 50 4.5 5 95 7.0 5 95 8.0 70 30 7.3.2 质谱参考条件 质谱各参数应符合下列条件：a)离子源：电喷雾离子源（ESI）；b)扫描方式：正、负离子扫描；c)离子源温度：400；d)干燥气：10.0 L/min；e)雾化气：3.0 L/min；f)毛细管电压：4000 V；g)加热气流量：10.0 L/min；h)检测方式：多反应监测（MRM）；i)定性离子对和定量离子对等详细仪器条件见附录 B。7.3.3 液相色谱-质谱测定 取试样溶液和相应浓度的基质混合标准溶液（5.4.4），作单点或多点校准，按外标法以峰面积计算。标准溶液和试样溶液中待测物质的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述条件下，标准溶液色谱全国团体标准信息平台T/ZNZ 0562021 4 图见附录 C。7.4 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。8 结果计算和表述 8.1 定性标准 在相同试验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在 2.5%之内；且试样中定性、定量离子的相对丰度比与浓度接近的标准溶液中对应的定性、定量离子的相对丰度比进行比较，若偏差不超过表 2 规定的范围，可判定为试样中含有对应的待测物质。表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度（%）50 2050 1020 10 允许偏差（%）20 25 30 50 8.2 定量测定 采用标准曲线法定量。按式（1）或仪器数据处理软件计算获得：（1）式中：试样中被测物质的残留量，单位为微克每千克（g/kg）；c从标准曲线上得到被测物质的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；溶解残余物所用溶液体积，单位为毫升（mL）；供试试料质量，单位为克（g）。计算结果应扣除空白值，保留3位有效数字。9 灵敏度 检出限：3-吲哚丁酸、6-苄基腺嘌呤、嘧菌酯、丁草胺、多菌灵、氯虫酰胺、氟虫酰胺、氟虫脲、异丙威、丙环唑、戊唑醇、氟苯脲、噻虫嗪、三唑磷、三环唑均为 0.500 g/kg；3-吲哚乙酸、4-氯苯氧乙酸、氯磺隆、呋虫胺、粉唑醇、氟铃脲、茚虫威、稻瘟灵、烯啶虫胺、醚苯磺隆均为 1.00 g/kg；噻嗪酮、灭幼脲、毒死蜱、醚磺隆、噻虫胺、除虫脲、仲丁威、氯吡嘧磺隆、吡虫啉、虱螨脲、氟酰脲、吡唑醚菌酯、砜嘧磺隆、肟菌酯均为 1.50 g/kg。定量限：3-吲哚丁酸、6-苄基腺嘌呤、嘧菌酯、丁草胺、多菌灵、氯虫酰胺、氟虫酰胺、氟虫脲、全国团体标准信息平台T/ZNZ 0562021 5 异丙威、丙环唑、戊唑醇、氟苯脲、噻虫嗪、三唑磷、三环唑均为 2.00 g/kg；3-吲哚乙酸、4-氯苯氧乙酸、氯磺隆、呋虫胺、粉唑醇、氟铃脲、茚虫威、稻瘟灵、烯啶虫胺、醚苯磺隆均为 3.50 g/kg；噻嗪酮、灭幼脲、毒死蜱、醚磺隆、噻虫胺、除虫脲、仲丁威、氯吡嘧磺隆、吡虫啉、虱螨脲、氟酰脲、吡唑醚菌酯、砜嘧磺隆、肟菌酯均为 5.00 g/kg。10 准确度 本方法在 5g/kg50 g/kg 添加浓度水平上的回收率在 70%120%之间。11 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。全国团体标准信息平台T/ZNZ 0562021 6 A A 附 录 A（资料性）39 种农药的中文名称、英文名称、CAS 号、分子式、相对分子量 表A.1为39种农药的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子量。表 A.1 39 种农药的中文名称、英文名称、CAS 号、分子式、相对分子量 序号 中文名称 英文名称 CAS号 分子式 相对分子量 1 3-吲哚乙酸 3-indolyl-acetic acid 87-51-4 C10H9NO2 175.18 2 3-吲哚丁酸 4-(3-indolyl)-butyric acid 133-32-4 C12H13NO2 203.24 3 4-氯苯氧乙酸 4-chlorophenoxyacetic acid 122-88-3 C8H7ClO3 186.59 4 6-苄基腺嘌呤 6-benzylaminopurine 1214-39-7 C12H11N5 225.30 5 嘧菌酯 azoxystrobin 131860-33-8 C22H17N3O5 403.39 6 噻嗪酮 buprofezin 69327-76-0 C16H23N3OS 305.44 7 丁草胺 butachor 23184-66-9 C17H26ClNO2 311.90 8 多菌灵 carbendazim 10605-21-7 C9H9N3O2 191.19 9 氯虫苯甲酰胺 chlorantraniliprole 500008-45-7 C18H14BrCl2N5O2 483.15 10 灭幼脲 chlorobenzuron 57160-47-1 C14H10Cl2N2O2 309.15 11 毒死蜱 chlorpyrifos 2921-88-2 C9H