TZNZ 128-2022 食用菌中麦角甾醇的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.050CCS X04T/ZNZ浙 江 省 农 产 品 质 量 安 全 学 会 团 体 标 准T/ZNZ 1282022食用菌中麦角甾醇的测定 高效液相色谱法Determination of ergosterol content in edible fungihigh performanceliquid chromatography2022-09-15 发布2022-10-15 实施浙江省农产品质量安全学会发 布全国团体标准信息平台T/ZNZ 1282022I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。本文件起草单位：浙江省农业科学院农产品质量安全与营养研究所。本文件主要起草人：张玉、王伟、白丽萍、李雪、王君虹、孙素玲。全国团体标准信息平台T/ZNZ 12820221食用菌中麦角甾醇的测定 高效液相色谱法1范围本文件规定了食用菌中麦角甾醇（麦角固醇）的高效液相色谱测定方法。本文件适用于香菇、木耳、双孢蘑菇、金针菇、杏鲍菇、猴头菇等食用菌中麦角甾醇的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 12806 实验室玻璃仪器 单标线容量瓶NY/T 3304 农产品检测样品管理技术规范3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样经无水乙醇加热回流提取，用高效液相色谱仪紫外检测器280 nm下检测，以色谱峰保留时间定性，外标法定量。5试剂与材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂，色谱用水为 GB/T 6682 规定的一级水。5.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。5.2无水乙醇（C2H6O）。5.3麦角甾醇标准品（CAS：57-87-4）：纯度98%。5.4麦角甾醇标准储备液（1.0 mg/mL）：准确称取 10 mg（精确至 0.1 mg）麦角甾醇标准品（5.3），用甲醇溶解并定容至 10 mL，于 4冰箱保存，有效期 1 个月。5.5麦角甾醇标准工作液：分别准确吸取一定量的麦角甾醇标准贮备液，用甲醇稀释配置成 2.5 g/mL，5 g/mL，10 g/mL，50 g/mL，100 g/mL 的标准系列工作液。5.6微孔滤膜：0.45 m，有机系。6仪器与设备全国团体标准信息平台T/ZNZ 128202226.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。6.2分析天平：感量 1 mg 和 0.1 mg。6.3样品粉碎设备：组织捣碎机、高速粉碎机。6.4恒温水浴锅：可控温 80 1。6.5回流装置：配冷凝管的磨口烧瓶。6.6单标线容量瓶：50 mL，符合 GB/T 12806 的技术要求。7样品制备按 NY/T 3304 的规定对样品进行缩分后，新鲜样品用组织捣碎机匀浆后放入聚乙烯瓶中，存放于-18；干制样品粉碎后过80目筛，放入聚乙烯瓶或袋中，存放于4。8试验步骤8.1样品提取取制备好的样品0.5 g2 g（精确至1 mg），置于圆底烧瓶中，加入无水乙醇溶液 35 mL，摇匀，80 加热回流1 h，取出冷却至室温，全部转入50 mL容量瓶，用无水乙醇定容至刻度，摇匀过滤，滤液用微孔滤膜过滤，供色谱测定。8.2色谱参考条件色谱柱：C18柱，柱长250 mm，内径4.6 mm，粒度5 m；或性能相当的C18色谱柱；流动相：甲醇；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；进样量：10 L；柱温：室温。8.3标准曲线的制作将标准系列工作液（5.5）分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作液中麦角甾醇的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。麦角甾醇色谱图参见附录A。8.4测定将提取液注入高效液相色谱仪中，通过保留时间定性，得到待测物峰面积，根据标准曲线得到提取液中麦角甾醇的质量浓度。如果样液中麦角甾醇浓度与标准工作曲线相差较大时，调整样液浓度后再行测定。8.5空白实验除不加试样外，采用完全相同的实验步骤进行测定。9试验数据处理全国团体标准信息平台T/ZNZ 12820223试样中麦角甾醇含量（）以克每千克（g/kg）表示，按式（1）计算：.（1）式中：麦角甾醇含量，单位为克每千克（g/kg）；V试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；根据标准曲线计算得到的样液中麦角甾醇的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；m样品质量，单位为克（g）；F稀释倍数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定值的算术平均值表示，结果表示到三位有效数字。10精密度在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相互独立进行测试，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算数平均值的10%。11其他当样品称样量为0.5 g 时，麦角甾醇的检出限为0.03 g/kg。全国团体标准信息平台T/ZNZ 12820224附录A（资料性）麦角甾醇标准溶液及样品中麦角甾醇色谱图麦角甾醇标准溶液及样品中麦角甾醇色谱图见图A.1图A.7。图 A.1 麦角甾醇标准溶液色谱图图 A.2 香菇样品色谱图图 A.3 木耳样品色谱图图 A.4 双孢蘑菇样品色谱图图 A.5 金针菇样品色谱图图 A.6 杏鲍菇样品色谱图全国团体标准信息平台T/ZNZ 12820225图 A.7 猴头菇样品色谱图A_全国团体标准信息平台