TZACA 021-2020 豆芽中氟喹诺酮和硝基咪唑类药物的测定 液相色谱串联质谱法.pdf

ICS 67.120.30 B 50 T/ZACA 团体标准 T/ZACA 0212020 豆芽中氟喹诺酮类和硝基咪唑类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationof residues of fluoroquinolones and nitroimidazoles in beansprout byliquid chromatography-tandem mass spectrometry 2020-01-13 发布 2020-01-19 实施 浙江省质量合格评定协会 发 布 全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/ZACA 0212020 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 原理.1 4 试剂和材料.1 5 仪器和设备.2 6 分析步骤.2 7 精密度.5 8 准确度.5 9 灵敏度.5 附录 A（资料性附录）氟喹诺酮类及硝基咪唑类药物中英文名称、CAS 号、分子式和相对分子质量6 附录 B（资料性附录）氟喹诺酮类及硝基咪唑类药物混合标准溶液选择离子流图(20 g/kg).7 全国团体标准信息平台T/ZACA 0212020 II 前 言 本标准依据GB/T 1.12009规定的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由浙江省质量合格评定协会提出并归口。本标准主要起草单位：绿城农科检测技术有限公司、浙江省疾病预防控制中心。本标准参与起草单位：浙江省农业科学院农产品质量标准研究所、湖州市农畜水产品检测中心、丽水蓝城农科检测技术有限公司。本标准主要起草人：余鹏飞、何晓明、章舒祺、徐小民、杨鲁琼、洪琳、倪娟桢、田佩琪、朱萌萌、周婷婷、郭利攀、徐杰、沈东强、卢军、沈雄雅、陈志民、朱丽婷。本标准为首次发布。全国团体标准信息平台T/ZACA 0212020 1 豆芽中氟喹诺酮类和硝基咪唑类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了豆芽中恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、达氟沙星、洛美沙星、甲硝唑、二甲硝咪唑、异丙硝唑、洛硝哒唑含量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于豆芽中恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、达氟沙星、洛美沙星、甲硝唑、二甲硝咪唑、异丙硝唑、洛硝哒唑含量的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用1%乙酸乙腈提取，经均质提取、浓缩、正己烷净化、离心后，用液相色谱-串联质谱仪测定，用基质外标法定量。4 试剂和材料 除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.1.2 乙腈（CH3CN）：分析纯。4.1.3 冰乙酸（CH3COOH）：分析纯。4.1.4 氯化钠（NaCl）：分析纯。4.1.5 甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.1.6 甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.7 甲酸铵（HCOONH4）：色谱纯。4.1.8 正己烷（C6H14）：色谱纯 4.2 试剂配制 4.2.1 1%乙酸乙腈：移取 5 mL 冰乙酸（4.1.3）和 495 mL 乙腈（4.1.2）混合。4.2.2 复溶液（0.1%甲酸-30%乙腈水溶液）：300 mL 乙腈（4.1.1）、1 mL 甲酸和 699 mL 水混合。4.2.3 0.1%甲酸-2 mmol 甲酸铵水溶液：称取 0.126 g 甲酸铵，加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 L。全国团体标准信息平台T/ZACA 0212020 2 4.2.4 0.1%甲酸乙腈：移取 1 mL 甲酸和 999 mL 混合。4.2.5 乙腈饱和正己烷：移取 200 mL 正己烷(4.1.8)于 250 mL 分液漏斗中，加入少量乙腈，剧烈振摇数分钟，静止分层，弃去下层乙腈层即得。4.3 标准品 氟喹诺酮类、硝基咪唑类标准物质：纯度均90%（详见附录A）4.4 标准溶液配制 4.4.1 标准储备溶液 准确称取适量的氟喹诺酮和硝基咪唑类各标准物质（4.3）于 25 mL 容量瓶中，用甲醇配制成 100 mg/L 的储备液，-18以下避光保存，有效期为 6 个月。4.4.2 标准中间液 准确移取一定体积的每种标准储备液（4.4.1）分别放入 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成 10.0 g/mL 的标准中间液，混合均匀，转移至储液瓶中，-18以下避光保存，有效期为 3 个月。4.4.3 混合标准工作液 分别准确移取每种 1.00 mL 标准中间液（4.4.2）于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混合均匀，转移至储液瓶中，配制成 1.00 g/mL 的混合标准工作液，4以下避光保存，有效期为 7 天。4.4.4 标准工作曲线 移取一定体积的混合标准工作液（4.4.3）用空白基质液分别配制成含4.00 g/L、10.0 g/L、25.0 g/L、100 g/L、250 g/L、500 g/L的8种氟喹诺酮类和4种硝基咪唑类标准工作溶液，浓度由低到高进样检测，以定量子离子的峰面积为纵坐标，对应浓度为横坐标，采用直线拟合的方式绘制标准工作曲线。实际检测中，经验证后可适当调整标准曲线的浓度范围。注：空白基质的制备和处理过程同6.1、6.2。5 仪器和设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源。5.2 高速组织捣碎机。5.3 分析天平，感量 0.01 g 和 0.00001 g。5.4 氮吹仪。5.5 涡旋混匀器（2500 r/min）。5.6 离心机：转速12000 r/min。5.7 超声波提取仪。5.8 10 mL 试管。5.9 离心管：50 mL。5.10 容量瓶：25 mL。5.11 尼龙膜：0.22 m。6 分析步骤 全国团体标准信息平台T/ZACA 0212020 3 6.1 样品制备 取代表性豆芽样品约500 g，将其切碎后（不可用水洗），经高速组织捣碎机均匀捣碎，均分成两份，装入洁净容器内，密封，-18以下保存。6.2 样品处理 称取 5 g（精确至 0.01 g）试样，于 50 mL 离心管中，加入 5 mL 水和 10 mL 1%乙酸乙腈（4.2.1）均质 1 min，超声提取 20 min，加入 5 g 氯化钠（4.1.4）涡旋 1 min，12000 r/min 离心 3 min，上层有机相转移到 25 mL 容量瓶中，残渣再用 10 mL1%乙酸乙腈（4.2.1）重复提取一次，合并两次提取液，用1%乙酸乙腈（4.2.1）定容到 25 mL，混合均匀，准确移取 10.0 mL 提取液于 10 mL 试管中，40氮吹至近干。加入 1 mL 复溶液（4.2.2），超声 3 min、涡旋 3 min，溶解残渣，再加入 1 mL 乙腈饱和正己烷（4.2.5），涡旋 30 s，12000 r/min 离心 3 min，取下层清液过 0.22 m 尼龙膜于样品瓶中，供液相色谱-串联质谱仪测定。6.3 测定 6.3.1 液相色谱条件 6.3.1.1 色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3，2.1100 mm（i.d.），1.8 m，或性能相当者。6.3.1.2 进样量：5 L。6.3.1.3 流速为：0.35 mL/min。6.3.1.4 柱温：35 6.3.1.5 流动相：A 为 0.1%甲酸-2 mmol 甲酸铵水溶液；B 为 0.1%甲酸乙腈。梯度洗脱条件见表 1。表1 梯度洗脱程序 时间/min 流速/（mL/min）流动相 A/（%）流动相 B/（%）0.00 0.35 93 7 0.50 0.35 93 7 3.00 0.35 75 25 4.50 0.35 5 95 5.00 0.35 5 95 5.01 0.35 93 7 7.00 0.35 93 7 6.4 质谱条件 6.4.1 质谱参数 6.4.1.1 离子源为电喷雾离子源（ESI）。6.4.1.2 扫描方式为正离子扫描。6.4.1.3 检测方式为多反应监测。6.4.1.4 干燥气流量：8.0 L/min。6.4.1.5 加热气流量：10 L/min。6.4.1.6 接口温度：300。6.4.1.7 雾化气流量：2.8 L/min。6.4.1.8 DL 管温度：250。全国团体标准信息平台T/ZACA 0212020 4 6.4.1.9 加热块温度：400。6.4.1.10 毛细管电压：4000 V。6.4.1.11 定性离子对、定量离子对、碰撞能量（CE）和偏转电压（Q1、Q3）见表 2。表2 多反应监测条件 被测物名称 参考保留时间/min 母离子（m/z）子离子（m/z）Q1 电压/V CE Q3 电压/V 恩诺沙星 4.36 360.20 316.20*-13.0-19.0-15.0 342.20-13.0-21.0-16.0 诺氟沙星 4.02 320.20 302.15*-12.0-20.0-22.0 231.05-12.0-38.0-25.0 培氟沙星 4.08 334.20 316.15*-26.0-21.0-22.0 290.15-26.0-18.0-14.0 环丙沙星 4.10 332.20 314.15*-23.0-20.0-23.0 231.10-23.0-37.0-25.0 氧氟沙星 4.05 362.20 318.20*-14.0-19.0-21.0 261.15-14.0-27.0-13.0 沙拉沙星 4.48 386.20 368.05*-14.0-23.0-26.0 342.10-14.0-19.0-24.0 洛美沙星 4.26 352.20 265.10*-27.0-23.0-12.0 308.20-27.0-16.0-21.0 达氟沙星 4.26 358.20 340.15*-30.0-30.0-30.0 82.10-30.0-50.0-29.0 甲硝唑 2.94 172.10 128.10*-22.0-13.0-24.0 82.15-22.0-25.0-29.0 二甲硝咪唑 3.46 142.10 96.15*-10.0-17.0-18.0 81.15-10.0-25.0-30.0 洛硝哒唑 3.31 201.10 140.10*-14.0-14.0-14.0 55.20-14.0-23.0-24.0 异丙硝唑 4.80 170.10 109.15*-21.0-25.0-22.0 124.20-21.0-21.0-23.0 注：带“*”的离子为定量离子；对于不同质谱仪，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。本标准所用仪器为岛津Shimadzu LC-MS/MS 8050。6.4.2 液相色谱-串联质谱测定 6.4.2.1 定性测定 在相同的实验条件下，样液中被测物的色谱峰保留时间与标准溶液色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在2.5%之内；并且在扣除背景后的样液图谱中，所选的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比，偏差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。全国团体标准信息平台T/ZACA 0212020 5 表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/%50 20至50 10至20 10 允许的相对偏差/%20 25 30 50 6.4.2.2 定量测定 采用基质加标单点法或者基质标准工作曲线法定量。根据试样中被测组分的含量，选取响应值适宜的标准工作液进行分析。标准工作溶液和待测样液中 8 种氟喹诺酮和 4 种硝基咪唑的响应均在方法的线性响应范围内。如果含量超过标准曲线范围，可调整取样量、定容体积，重新处理样品后进行测定。在上述色谱条件下，参考保留时间参见表 2；标准溶液多反应监测色谱图见附录 B 中 B.1。6.