TSDAA 018-2021 鸡肉中37种兽药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICSICS 65.020.3065.020.30B B 4343团团 体体 标标 准准T/SDAAT/SDAA 01801820212021鸡肉中鸡肉中 3 37 7 种兽药残留量的测定种兽药残留量的测定液相色谱液相色谱-串联串联质谱法质谱法DeterminationDetermination ofof 3737 veterinaryveterinary drugdrug residuesresidues inin chickenchicken bybyliquidliquid chromatography-chromatography-tandemtandem massmass spectrometryspectrometry2021202106062 22 2 发布发布2021202107072 23 3 实施实施山东省畜牧协会发布发布全国团体标准信息平台5T/SDAAT/SDAA 0 01818-202-2021 1全国团体标准信息平台6T/SDAAT/SDAA 018-2021018-2021前前 言言本标准按照 GB/T1.1-2020 给出的规则起草。本标准由山东省畜牧协会提出并归口。本文件起草单位：江苏省农业科学院、山东益生种畜禽股份有限公司、青岛农业大学。本文件主要起草人：龚兰、赵航、王冉、魏瑞成、栾枫婷、陈明、邵雪梅、朱磊、张泽璟、唐敏敏、何涛、郭龙宗、尹燕博。本文件为首次发布。全国团体标准信息平台7T/SDAAT/SDAA 018-2021018-2021全国团体标准信息平台8T/SDAAT/SDAA 018-2021018-2021鸡肉中37种兽药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法1范围本文件规定了鸡肉中磺胺类（甲氧苄啶、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶，磺胺二甲基嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉），氟喹诺酮类（恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、沙拉沙星），四环素类（土霉素、四环素、金霉素、强力霉素），硝基咪唑类（地美硝唑、甲硝哒唑、洛硝哒唑、异丙硝唑），大环内酯类（罗红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、红霉素、阿奇霉素、克拉霉素），抗病毒类（金刚烷胺、金刚乙胺），酰胺醇类（氯霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺、甲砜霉素），林可胺类（林可霉素、克林霉素）残留量的液相色谱-串联质谱测定方法的前处理及检测步骤。本文件适用于鸡肉中上述37种兽药残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3原理试样经甲酸乙腈水提取，固相萃取柱净化，用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂与配置除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水.4.1 乙腈：色谱级。4.2 甲醇：色谱级。4.3 甲酸：色谱级。4.4 2%甲酸水：2 mL甲酸加水稀释至100 mL，混匀。4.5 甲醇-水溶液：10 mL甲醇和90 mL水，混合均匀。4.6 氢氧化钠溶液（c=0.03 mol/L）：称取0.6 g氢氧化钠，溶解于500 mL水中，混匀。4.7 0.1%甲酸水溶液：1 mL甲酸（4.3）加水稀释至1 L，混匀。4.8 0.1%甲酸乙腈溶液：1 mL甲酸（4.3）加乙腈稀释至1 L，混匀。全国团体标准信息平台9T/SDAAT/SDAA 018-2021018-20214.9 标准储备液：磺胺类（甲氧苄啶、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶，磺胺二甲基嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉），氟喹诺酮类（恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、沙拉沙星），四环素类（土霉素、四环素、金霉素、强力霉素），硝基咪唑类（地美硝唑、甲硝哒唑、洛硝哒唑、异丙硝唑），大环内酯类（罗红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、红霉素、阿奇霉素、克拉霉素），抗病毒类（金刚烷胺、金刚乙胺），酰胺醇类（氯霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺、甲砜霉素），林可胺类（林可霉素、克林霉素）（纯度均大于等于95%，具体见附录A）。（精确至0.01 mg）于10 mL容量瓶中，用甲醇（4.2）溶解后定容至刻度；氟喹诺酮类用0.03 mol/L的NaOH溶液（4.6）溶解，甲醇（4.2）定容，分别配制成1 000 mg/L的标准储备液。于-18以下避光保存，有效期为3个月。4.10 混合标准中间液（1 g/mL）：分别准确移取标准储备液各0.1 mL，用甲醇-水溶液（4.5）稀释至刻度，混匀，4下避光保存。4.11 混合标准工作液：准确吸取混合标准中间液（4.11）适量，用甲醇-水溶液（4.5）稀释成质量浓度分别为0.25、0.5、1、2、5、10、50和100 g/L的系列混合标准工作溶液。5材料5.1 固相萃取小柱：氮乙烯吡咯烷酮与二乙烯基苯共聚物的混合型反相填料，200 mg/6 mL，或者相当。5.2 微孔滤膜：0.22 m，有机相型。6仪器设备6.1 液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源。6.2 分析天平：感量 0.01 g、0.000 01 g。6.3 旋涡混合器。6.4 振荡器。6.5 超声波清洗器。6.6 离心机，最高转速为 10 000 r/min。6.7 氮吹仪。6.8 固相萃取装置。7样品7.1 试样的制备将鸡肉样品用组织捣碎机绞碎，装入洁净容器，密封，标记。全国团体标准信息平台10T/SDAAT/SDAA 018-2021018-20217.2 试样的保存将试样于-18以下保存。8检测步骤8.1提取称取试样2 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，准确加入3 mL 2%甲酸水（4.4）和7 mL乙腈（4.1），涡旋超声15 min，振荡5 min，4下10 000 r/min离心8 min，取上清液于另一个50 mL离心管中，待净化。8.2净化用微量移液器准确吸取 2 mL 上述上清样液通过固相萃取小柱（5.1）并弃去流出液，再准确量取 1.2 mL 样液通过小柱并收集样液，准确吸取 1 mL 净化样液，于 40氮吹至近干，准确加入 1 mL 甲醇-水溶液（4.5）复溶，过滤膜（5.2），待上机。8.3 基质匹配标准系列溶液的制 8取空白样品，按8.1和8.2处理制得空白样品提取液，精密量取混合标准工作液（4.11）适量，用空白样品提取液稀释，配制得到37种兽药的基质匹配标准系列溶液。以色谱峰面积为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。37种兽药基质匹配标准溶液色谱图参见附录B中的图B.1。8.4 测定8.4.1 液相色谱-质谱/质谱仪条件色谱柱：HSS T3 色谱柱（100 mm2.1 mm，1.7 m），或性能相当者。柱温：40。流速：0.3 mL/min。进样量：2 L。全国团体标准信息平台11T/SDAAT/SDAA 018-2021018-2021流动相：A：0.1甲酸水溶液（4.6），B：0.1%甲酸乙腈溶液（4.7），梯度洗脱程序见表 1。表 1 流动相梯度洗脱条件8.4.2质谱参考条件电离方式：电喷雾电离，正离子模式（ESI+）及负离子模式（ESI-）。检测方式：多反应监测（MRM）。离子源电压：5.5 kV。离子源温度：500。雾化气：50 psi。辅助气：55 psi。气帘气：45 V。碰撞气：8 V。多反应监测（MRM）离子对、去簇电压及碰撞电压见表 2。时间（s）0.1%甲酸水%0.1%甲酸乙腈%0.009730.259734.0076249.0039710.0039710.10973全国团体标准信息平台12T/SDAAT/SDAA 018-2021018-2021表 237 种兽药的主要参考质谱参数化合物化合物母离子母离子(m/z)子离子子离子(m/z)去簇电压去簇电压（V）碰撞电压碰撞电压（V）甲氧苄啶291.1230*15032261.115035磺胺甲噁唑254156*5022925036磺胺间甲氧嘧啶281156.1*14523108.114537磺胺二甲基嘧啶279186*35251563526磺胺间二甲氧嘧啶311156*70302187027磺胺喹噁啉300.9156*70241087037金刚烷胺152.1135.1*802593.18040金刚乙胺180.1163.3*5023121.25033环丙沙星322.1288.2*7825245.17834蒽诺沙星360.2318.1*10027261.310037诺氟沙星320.2302.1*7030276.27023培氟沙星334.1290.2*8026233.18036氧氟沙星362.3318.1*10027261.310037洛美沙星352265.2*9033308.19025达氟沙星358.2340.1*9032314.19027沙拉沙星386.2342*8026299.28039土霉素461.1426.4*7028443.37019四环素445.2410.3*7029全国团体标准信息平台13426.97021金霉素479.3444.2*7032462.17024强力霉素445.1428.1*7026154.27047地美硝唑14295.1*503381.15038甲硝哒唑17282*4933128.24920洛硝哒唑201140*201555.12024异丙硝唑170.1124.2*4825109.24836氟苯尼考胺248121.2*1003193.210028替米考星869.869.3*3859174.33858罗红霉素837.4158.2*7443679.47430螺旋霉素843.6174.2*6043540.56041泰乐菌素916.5174.1*8749772.38740红霉素734.3576.3*7627158.27636克拉霉素748.5158.0*5036590.45027阿奇霉素749.5591.3*6028158.06037林可霉素407.2126.2*6935359.36926克林霉素425.3126.3*5244359.35227氯霉素321152*-42-22257.1-42-15氟苯尼考356.3185*-56-25336.1-56-12甲砜霉素354185*-60-27289.9-60-16全国团体标准信息平台14T/SDAAT/SDAA 018-2021018-20218.4.3 基质匹配标准系列溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下，分别取基质匹配标准系列溶液（8.3）和试样溶液（8.2）上机测定。8.4.4 定性测定在相同试验条件下，试样溶液与基质匹配标准系列溶液中待测物的保留时间相对偏差应在2.5 之内。根据表2选择的定性离子对，比较试样谱图中待测物和基质标准工作溶液中定性离子的相对离子丰度，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表 3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差8.4.5 定量测定按照 8.4.1 和 8.4.2 设定仪器条件，取试样溶液和基质匹配标准工作液上机分析，以基质标准工作溶液浓度为横坐标，色谱峰面积（响应值）为纵坐标，绘制标准曲线，作单点或多点校准，外标法定量。试样溶液与标准溶液中待测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内，如超出线性范围，应重新试验或将试样溶液和基质匹配标准溶液作相应稀释后重新测定。单点校准定量时，试样溶液中待测物的浓度与标准溶液浓度相差不超过 30%。8.4.6 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。9试验数据处理用色谱数据处理机或按式（）计算试样中待测物含量：fmAVACXss（1）式中：X 试样中被测组分的残留量，单位为 g/kg；CS标准工作液中被测组分浓度，单位为 ng/mL；相对离子丰度/（%）502050102010最大允许偏差/（%）20253050全国团体标准信息平台15T/SDAAT/SDAA 018-2021018-2021A试样