TCI 036-2022 鲜食型高抗性淀粉马铃薯含量指标及检测方法.pdf

ICS 67.040CCS B20团体标准T/CI 036-2022鲜食型高抗性淀粉马铃薯含量指标及检测方法Content Index of High Resistant Starch Potato and Its Detection Method2022-7-1 发布2022-7-1 实施中国国际科技促进会发布发布全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/CI 036-2022I目次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语及定义.14 原理.15 试剂和材料.25.1 试剂.25.2 材料.46 仪器和设备.47 试样准备及水分测定.48 分析步骤.59 结果计算.610 精度.7全国团体标准信息平台T/CI 036-2022II前言本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则要求进行编写。某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由浙江大学提出。本文件由中国国际科技促进会归口。本文件起草单位：浙江大学、浙江大学中原研究院、金华市农业科学院、浙江大学山东（临沂）现代农业研究院、海南浙江大学研究院、浙江省农业科学院、浙江省中药研究所有限公司、浙江绿巨人生物技术有限公司、杭州赋禾数字科技有限公司、衢州市三易易生态农业科技有限公司。本文件主要起草人：吴殿星、程林润、舒小丽、张 宁、王 寅、张 良、孙 健、沈 易、孟雨莎、张晓艳、郑楠楠、徐开盛、徐应英、姜 章。本文件为首次发布。全国团体标准信息平台T/CI 036-20221鲜食型高抗性淀粉马铃薯含量指标及检测方法1 范围本文件规定了抗性淀粉及高抗性淀粉马铃薯的术语和定义，鲜食型高抗性淀粉马铃薯中抗性淀粉含量的量值判定范围及马铃薯抗性淀粉含量的测定方法。本文件适用于各类马铃薯品种块茎及其制品的抗性淀粉含量测定及鲜食型高抗性淀粉马铃薯的判定。企业在制定企业标准时可参照使用，相关机构在选育、审定和应用高抗性淀粉马铃薯及其制品时可参照使用。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用谁的，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最亲版本（包括所有修订单）适用于本文件。GB/T 31784马铃薯商品薯分级与检验规程GB/T5497粮食、油料检验 水分测定法GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T 1066马铃薯等级规格LST 3016马铃薯3 术语及定义3.1 抗性淀粉（Resistant starch）是指在健康人体小肠中不被消化吸收而能进一步在大肠中被全部或部分发酵吸收的淀粉。3.2 高抗性淀粉马铃薯（High resistant starch potato）在正常生长发育过程中积累产生，蒸煮或加工后可食部分的抗性淀粉含量8%的马铃薯品种（系）。3.3 鲜食型马铃薯指用作蔬菜或粮食的马铃薯。4 原理全国团体标准信息平台T/CI 036-20222马铃薯体外模拟人体消化，经唾液淀粉酶，胃蛋白酶和胰淀粉酶过夜消化后，非抗性淀粉被水解成葡萄糖，然后利用乙醇终止反应，消化后残渣即为粗抗性淀粉。然后用 KOH 将未被 消化的淀粉溶解，再利用淀粉葡萄糖苷酶将抗性淀粉水解成葡萄糖。生成的葡萄糖与葡萄糖氧化酶/过氧化物酶（GOPOD）试剂会产生显色反应，形成复合物，在 510 nm 处会产生特征吸收峰。测定其在 510 nm 处吸光值，利用葡萄糖标准液绘制标准曲线，计算出样品消化残渣产生的葡萄糖量，再利用葡萄糖淀粉转化系数将其转化为淀粉含量，即可得出样品中的抗性淀粉含量。5 试剂和材料5.1 试剂除特殊说明外，所用试剂均为分析纯试剂。试验所用水符合 GB/T6682 规定实验用水。5.1.1 氯化钾（KCl）。5.1.2 氢氧化钠（NaOH）。5.1.3 氯氧化钾（KCl）。5.1.4 马来酸（C4H4O4）。5.1.5 冰醋酸(HAc)。5.1.6 二水合氯化钙（CaCl22H2O）。5.1.7 磷酸二氢钾（KH2PO4）。5.1.8 盐酸（HCl）。5.1.9 无水乙醇（CH3CH2OH）。5.1.10 苯甲酸（C7H6O2）。5.1.11 胃蛋白酶（1:3000）。5.1.12-胰淀粉酶（A3176）。5.1.13 淀粉葡萄糖苷酶，或淀粉葡萄糖苷酶原液（3300 U/mL）。5.1.14 葡萄糖测试试剂盒。5.1.15 D-葡萄糖标准品（C6H12O6，纯度 99.5%）。5.1.16 氢氧化钠溶液c(NaOH)=4.0 mol/L：准确称取 160.0 g 氢氧化钠，全国团体标准信息平台T/CI 036-20223加入 800 mL 水溶解后，定容至 1L。5.1.17 马来酸钠缓冲液c(C4H3O2COONa)=0.1 M,pH6.0：准确称取 23.2 g马来酸，加 1600 mL 水溶解后，用氢氧化钠溶液（5.1.16）调 pH 至 6.0。再加入 0.6 g 二水合氯化钙溶解后定容至 2L。该溶液在 4oC 下可稳定 12 个月。5.1.18 醋酸钠缓冲液c(CH3COONa)=1.2 M,pH3.8：将 69.6 mL 冰醋酸加入至 800 mL 水中，用氢氧化钠溶液（5.1.16）调 pH 至 3.8，定容至 1 L。该试剂在室温下可稳定 12 个月。5.1.19 醋酸钠缓冲液c(CH3COONa)=0.1M,pH4.5：将 5.8 mL 冰醋酸加入至 800 mL 水中，用氢氧化钠溶液（5.1.16）调 pH 至 4.5，定容至 1 L。该试剂在 4oC 可稳定 2 个月。5.1.20 氢氧化钾溶液c(KOH)=4 M：准确称取 44.8 g 氢氧化钾至 150 mL水中，搅拌溶解后定容至 200 mL。试剂在室温下可稳定 12 个月。5.1.21 盐酸溶液c(HCl)=0.1 M：量取 8.4 mL 浓盐酸，加适量水并稀释至1000 mL。5.1.22 苯甲酸溶液c(C6H5COOH)=0.2%：称取 0.2 g 苯甲酸溶于适量水中，然后定容至 100 mL。5.1.23 氯化钾盐酸缓冲液c(KCl)=0.1 M,pH 1.5：称取 7.35 g 氯化钾，溶于 500 mL 水中，然后用盐酸溶液（5.1.21）调 pH 至 1.5,再定容至 1 L。5.1.24 无水乙醇c(CH3CH2OH)=50%，体积分数：500 mL 无水乙醇加水定容至 1 L。5.1.25 淀粉葡萄糖苷酶原液（3300 U/mL）：根据购买淀粉葡萄糖苷酶活力单位，称取适量粉末，用 pH4.5 醋酸钠缓冲液缓冲液（5.1.19）配制，4oC 下可稳定 5 年。5.1.26 淀粉葡萄糖苷酶工作液（300 U/mL）：用 0.1 M 马来酸钠缓冲液（pH6.0）（5.1.17）将 2 mL 3300 U 淀粉葡萄糖苷酶原液（5.1.25 或直接购买的原液）稀释至 22 mL，然后分装在小离心管中，-20oC 保存备用，试剂-20oC 下可稳定 5 年。5.1.27-胰淀粉酶悬液-胰淀粉酶(10 mg/mL）+淀粉葡萄糖苷酶(3U/mL)：称取 1 g 胰腺-淀粉酶，用 100 mL 马来酸钠缓冲液。悬浮，振荡 5 min。加入 1 mL 300 U/mL 淀粉葡萄糖苷酶（5.1.26）。充分混合。1500 g 离心 10 min,全国团体标准信息平台T/CI 036-20224取上清液。现用现配。5.1.28 胃蛋白酶（10%）：称取 10.0 g 胃蛋白酶溶于氯化钾盐酸缓冲液溶液（5.1.23），并定容至 100mL。5.1.29 葡萄糖标准液（1mg/mL）：准确称取 1.00 g D-葡萄糖（99.5%，无结晶水）至 900 mL 苯甲酸溶液（5.1.22）中，然后定容至 1L。室温下密封可保存 5 年。也可直接使用购买的商品化 GOPOD 试剂盒中自带的葡萄糖标准液。5.2 材料符合 GB/T 31784 鲜食型马铃薯三级质量要求，或 LS/T3106-2020 标准三级或 NY-T 1066 标准二级及以上马铃薯块茎鲜样或干样。但规格质量可不做要求。6 仪器和设备6.1 旋风式磨粉机。6.2 冷冻干燥机。6.3 分析天平（精度 0.1 mg）。6.4 pH 计。6.5 电饭煲。6.6 手持式匀浆机（最低转速 1000 rpm）。6.7 水浴摇床。6.8 翻转摇床。6.9 具盖螺纹圆底离心管（15 mL，1625 mm）。6.10 离心机。6.11 酶标仪。6.12 容量瓶（容量 100 mL,1000 mL,500 mL,50 mL）。6.13 移液器（量程 1 mL,10 l,200 l）。6.14 磁力搅拌器。6.15 全自动水份测定仪。7 试样准备A.干样或干制品全国团体标准信息平台T/CI 036-20225（1）用旋风磨磨碎，过 150 m 筛子，混匀后保存于自封袋中密封备用。（2）利用全自动水份测定仪或根据 GB/T5497 测定试样中水份。B鲜样1.鲜薯洗净去皮，吸干表面水份切小块备用；或者马铃薯切薄片，冷冻干燥（至少 48 h）或普通烘箱烘干后用旋风磨磨碎，过 150 m 筛子，混匀后保存于自封袋中密封备用。8 分析步骤（1）鲜样或干燥后样品根据 GB/T5497 测定试样中水份。（2）准确称取样品 1005 mg（干样）至 15 mL 带盖螺旋圆底离心管中，轻轻敲打试管以使样品位于底部（鲜样则称取 0.5 g 至试管中）；（3）加入 500 L 蒸馏水于各试管中，等电饭煲中的水沸腾后放入，蒸煮20 min，然后保温 10 min；（4）取出试管，等试管冷却至室温时，加入 2 mL 氯化钾盐酸溶液（5.1.23），利用手持式匀浆机（最小档，40 s）将样品捣碎；（5）加入 100 L 胃蛋白酶（5.1.28），置于旋转摇床 37 消化 1 h；（6）加入 4 mL 马来酸钠缓冲液（5.1.17）混匀，然后加入 4 mL-胰淀粉酶悬液（5.1.27），混匀；（7）旋紧试管盖，置于旋转摇床（20 转/min），于 37 消化过夜（16 h）；（8）取出试管，4000 rpm（1500 g）离心 10 min;（9）小心去除上清液，然后加入 2 mL 50%乙醇（5.1.24），旋涡振荡，将沉淀充分重悬，然后再加入 6 mL 50%乙醇（5.1.24），混匀，4000 rpm 离心 10min；（10）小心去除上清并重复重悬离心两次；（11）小心去除上清液，倒置试管去除多余水分，并用滤纸将试管壁上多余水分小心吸去；（12）在每个试管中加入 1 mL 水，将沉淀充分重悬，然后再加入 1 mL 4 M氢氧化钾溶液（5.1.20），轻轻混匀后，置冰水浴中振荡 20 min；（13）每个试管中加入 8 mL 1.2 M 醋酸钠缓冲液（5.1.18），混匀后，立即加入 0.1 mL 3300 U 的淀粉葡萄糖苷酶（5.1.25），混匀后置水浴摇床，50 全国团体标准信息平台T/CI 036-2022630 min，期间取出两次混匀；（14）取出试管，擦干试管表面水份，4000 rpm 离心 10 min；（15）对于抗性淀粉含量10%的样品，直接吸取 10 L 上清液至 96 孔酶标板中，加入 190 L GOPOD 试剂(5.1.14)；对于抗性淀粉含量10%的样品，吸取 1 mL 上清液到 15 mL 带盖螺旋圆底离心管中，加入 9 mL 0.1 M 醋酸钠溶液（5.1.19），混匀后吸取 10 L 至 96 孔酶标板中，加入 190 L GOPOD 试剂(5.1.14)；（16）葡萄糖标准曲线制备：吸取 0,1,3,5,7,9,10 L 1 mg/mL 葡萄糖标准试剂（5.1.29）至 96 孔酶标板中，不足 10 L 的分别用 0.1 M 醋酸钠溶液（5.1.19）补足至 10 L，加入 190 L GOPOD 试剂(5.1.14)；以 10 L 0.1M 醋酸钠溶液（5.1.19）加 190 L GOPOD 试剂作为空白试液；（