TCCCMHPIE 1.23-2016 植物提取物 虾青素油.pdf

ICS 11.120C 25T中国医药保健品进出口商会团体标准T/CCCMHPIE 1.212016植物提取物 虾青素油Plant extractAstaxanthin Oil2017-06-21 发布2017-07-01 实施中国医药保健品进出口商会 发 布前 言本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20004.1-2016 给出的规则起草。本标准由中国医药保健品进出口商会提出。本标准由中华人民共和国商务部归口。本标准起草单位：北京绿色金可生物技术股份有限公司。本标准主要起草人：姚军芳、侯翔燕、李艳梅、张培楠、吴启林、李春华。T/CCCMHPIE 1.2320161植物提取物 虾青素油1范围本标准规定了虾青素油的的技术要求、检验方法、检验规则和标签、包装、运输、贮存及保质期要求。本标准适用于以人工培养的红球藻属雨生红球藻（Haematococcus pluvialis）为原料经提取精制后，得到的虾青素油。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GGB 9685 食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 0832 水分测定法中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 0821 重金属检查法中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法3技术要求3.1工艺要求3.1.1植物原料雨生红球藻（Haematococcus pluvialis）为人工养殖，在培养成熟后，收获而得到。3.1.2工艺过程雨生红球藻超临界二氧化碳萃取或溶剂提取纯化产品3.2产品要求3.2.1感官要求应符合表 1 的规定。表 1 感官要求项 目要 求色泽深红色气味藻类特殊气味状态油状物3.2.2理化要求应符合表 2 的规定。T/CCCMHPIE 1.2320162表 2理化要求项目指标鉴别符合规定虾青素含量/%5.0游离虾青素含量(面积归一化法)/%5.0水分/%0.5重金属（以 Pb 计）/(mg/kg)10铅（Pb）/(mg/kg)1.0镉（Cd）/(mg/kg)1.0砷（As）/(mg/kg)2.0汞（Hg）/(mg/kg)1.03.2.3微生物要求应符合表 3 规定。表 3 微生物指标项目指标细菌总数/(cfu/g)1000霉菌及酵母菌数/(cfu/g)100大肠埃希氏菌不得检出沙门氏菌不得检出3.2.4其他污染物其他污染物限量要求，依据不同要求，应符合我国相关法规的规定。对于出口产品，应符合出口目的国相关法规的规定。4检验方法4.1感官检验启开试样后，立即嗅其气味；另取试样适量置于无色50mL比色管中，在自然光线下，观察其色泽、外观，并检查有无异物。4.2理化检验4.2.1鉴别按第 A.2 章中规定的检验方法进行测定，所得供试品谱图中的三个主要的峰分别与对照品谱图中的 13-顺式虾青素，全反式虾青素和 9-顺式虾青素的保留时间一致。4.2.2虾青素含量按第 A.2 章中规定的检验方法进行测定。4.2.3游离虾青素含量按第 A.3 章中规定的检验方法进行测定。4.2.4水分T/CCCMHPIE 1.2320163按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 0832 水分测定法中第一法进行测定。4.2.5重金属（以 Pb 计）按按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 0821 重金属检查法中第二法进行测定。4.2.6铅按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.2.7镉按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.2.8砷按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.2.9汞按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.3微生物检验4.3.1细菌总数按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中规定的方法检验。4.3.2霉菌及酵母菌数按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中规定的方法检验4.3.3大肠埃希氏菌按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法中规定的方法检验。4.3.5沙门氏菌按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法中规定的方法检验。5检验规则5.1组批同品种、同等级、同一批投料生产的产品，以同一生产日期为一检验批次。5.2出厂检验5.2.1产品须逐批检验，检验合格并签发合格证后产品方可出厂。5.2.2出厂检验项目：外观、水分、虾青素含量、游离虾青素含量、重金属及有害元素、菌落总数、霉菌及酵母菌数、大肠埃希氏菌、沙门氏菌。5.3型式检验5 3.1型式检验项目包括本标准中规定的全部项目。T/CCCMHPIE 1.23201645.3.2正常生产时每年应进行一次型式检验。5.3.3有下列情况之一时，应进行型式检验。a）原料来源变动较大时；b）正式投产后，如配方、生产工艺有较大变化，可能影响产品质量时；c）出厂检验与上一次型式检验结果有较大差异时；d）产品停产 6 个月以上,恢复生产时；e）食品安全监督部门提出进行型式检验的要求时。5.4判定规则5.4.1检验结果全部项目符合本标准规定时，判该批产品为合格品。5.4.2检验结果不符合本标准要求时，可以在原批次产品中双倍抽样复检一次，判定以复检结果为准。复检后仍有一项或一项以上不符合标准时，判该批产品为不合格品。6包装、标签、运输、贮存和保质期6.1包装包装材料应符合 GB 9685 食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准的要求。6.2标签包装标签上应标注：产品名称、产品批号、产品规格、净含量、生产日期、保质期、生产厂名、厂址、产地。标签内容清晰可见，标签应粘贴牢固。6.3运输运输时必须轻装轻卸，不得与有毒、有害和易污染物品混装载运，严防雨淋、暴晒。6.4贮存产品应存放在干燥、通风、阴凉、避光、清洁的地方，堆码距墙壁和地面 20cm 以上、并有垫隔物。避免与有毒、有害、易腐、易污染等物品一起堆放。6.5保质期在符合规定的贮运条件、包装完整、未经开启封口的情况下，保质期为 24 个月。T/CCCMHPIE 1.2320165A.1一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和 GB/T 6682 规定的三级水。实验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2虾青素含量测定A.2.1方法提要虾青素油主要含有虾青素单酯、虾青素二酯和游离虾青素。虾青素酯经胆固醇酯酶酶解后，都转化成游离虾青素。虾青素含量以游离虾青素计。A.2.2仪器和用具A.2.2.1分析天平，感量为 0.01mg。A.2.2.2超声波清洗仪。A.2.2.3高效液相色谱仪（附紫外检测器）。A.2.2.40.45m 微孔滤膜，有机相。A.2.2.5棕色容量瓶（100mL）。A.2.2.6离心机。A.2.2.7涡旋混合器。A.2.2.8恒温箱。A.2.2.9氮吹仪。A.2.3试剂和溶液A.2.3.1甲醇，色谱纯。A.2.3.2叔丁基甲醚，色谱纯。A.2.3.3磷酸，优级纯。A.2.3.4三羟甲基氨基甲烷。A.2.3.5石油醚（60-90）。A.2.3.6丙酮。A.2.3.7纯水，GB/T 6682 规定的二级水。A.2.3.8十水硫酸钠。A.2.3.9无水硫酸钠。A.2.3.10盐酸A.2.3.11内标：反式-阿朴-8-胡萝卜醛（Trans-beta-apo-8-carotenal），Sigma货号10829或其他等同品。A.2.3.12对照品：USP Astaxanthin Esters from Haematococcus pluvialis RS（注：该对照品为雨生红球藻来源的虾青素酯混合物，含有 13-顺式虾青素、全反式虾青素和 9-顺式虾青素的脂肪酸酯，标示的总虾青素含量以酶解后游离虾青素计约 10%）。A.2.3.13胆固醇酯酶（Cholesterol esterase），Wako Pure Chemicals 货号 037-11221，Sigma 货号 C9281 或其他等同品。A.2.3.140.05mol/L Tris-HCl（pH7.0）缓冲液的配制：精确称取三羟甲基氨基甲烷 0.606g，用 75mL 去离子附录 A（规范性附录）检验方法T/CCCMHPIE 1.2320166水溶解，用 1mol/L 盐酸调 pH7.0，用水稀释至 100mL。A.2.3.15胆固醇酯酶溶液的配制：精确称取胆固醇酯酶适量到 25mL 容量瓶中，用 0.05mol/L Tris-HCL（pH）缓冲液溶解，配成浓度为 4 个酶活单位/mL 的酶溶液，现用现配。A.2.4色谱条件及系统适用性A.2.4.1色谱条件a)色谱柱：YMCTM Carotenoid S-5（4.6250mm，5m）或同类型色谱柱。b)流动相：A 相为甲醇，B 相为甲基叔丁基醚，C 相为 1%磷酸水。梯度条件见表 A.1。表 A.1梯度条件时间/minA/%B/%C/%0-1581 6615 30415-2366 1630 80423-271680427-2816 8180 15428-3581154c)检测波长：474nm。d)柱温：25e)流速：1.0mL/minf)进样量：20LA.2.4.2系统适用性理论塔板数按全反式虾青素计应不低于 5000，13-顺式虾青素与全反式虾青素的分离度应不小于 2.0。A.2.5操作方法A.2.5.1内标溶液的制备：取反式-阿朴-8-胡萝卜醛适量，精密称定，用丙酮溶解并配制成 0.18mg/mL 的溶液。A.2.5.2对照品储备溶液的制备：取虾青素酯对照品约 30mg，精密称定，到 10mL 干燥小烧杯中，用丙酮溶解并转移到 100mL 容量瓶中，丙酮定容，摇匀，即得（每 1mL 含全反式虾青素对照品 27g）。A.2.5.3对照品溶液的制备：准确吸取 2.0mL 对照品贮备液、1.0mL 内标溶液和 3.0mL 胆固醇酯酶溶液于10mL 玻璃具塞离心管中，倒置混合均匀。将离心管置于 37的恒温箱中反应 45min，每 10min 缓慢倒置混合一次。反应后，向管中加入 1g 十水硫酸钠、2mL 石油醚，涡旋混合 30 秒，然后置于离心机中在 3000rpm下离心 3min。吸取石油醚层于另一只 10mL 玻璃离心管（管中事先加入 1g 无水硫酸钠）。在室温下用氮气吹干石油醚，加入 3mL 丙酮，超声溶解，过滤，滤液即为对照品溶液。A.2.5.4供试品储备溶液的制备：将供试品置于 50-60水浴中避光保温 30min，每隔 10 分钟摇一次。称取供试品约 60mg，精密称定，于 10mL 干燥小烧杯中，丙酮溶解并完全转移至 100mL 容量瓶中，用丙酮定容至刻度，摇匀。可根据供试品的含量适当调节称样量，如供试品含量为 10%，则称样量为 30mg。A.2.5.5供试品溶液的制备：准确吸取 2.0mL 供试品贮备液和 1.0mL 内标溶液于 10mL 玻璃具塞离心管中，按“对照品溶液”项下操作，即得。A.2.5.6测定方法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液 20L，依次注入高效液相色谱仪，测定，计算含量。A.2.6结果计算虾青素油中虾青素含量以游离虾青素的质量分数 计，数值以%表示，按公式（A.1）计算：T/CCCMH