TCAICC 03-2021 蔬菜水果中毒死蜱的快速检测胶体金免疫层析法.pdf

ICS 67.050 Z 备案号：全联农业产业商会标全联农业产业商会标准准 T/CAICC-03-2021 蔬菜水果中毒死蜱的快速检测 胶体金免疫层析法 Rapid detection of chlorpyrifos in vegetables and fruits Colloidal gold immunochromatography 2021-12-31 发布 2022-01-01 实施 全联农业产业商会全联农业产业商会发布发布 全国团体标准信息平台 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 原理.1 4 试剂与材料.1 5 仪器与设备.2 6 分析步骤.2 7 结果判定.2 8 结果确认.3 9 性能指标.3 10 其他.4 附录 A（规范性附录）快速检测方法性能指标计算.5 全国团体标准信息平台 II 前 言 本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由全联农业产业商会提出。本文件起草单位：全联农业产业商会、北京勤邦生物技术有限公司、西北大学食品科学与工程学院、江西省农产品质量安全检测中心。本文件主要起草人：郭树、吴小胜、王春花、惠光朋、魏力杰、董硕、牛晨、杨琳芬、吴明庆。本文件为首次发布。全国团体标准信息平台 1 蔬菜水果中毒死蜱的快速检测 胶体金免疫层析法 1 范围 本方法规定了蔬菜水果中毒死蜱的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于抱子甘蓝、豇豆、韭菜、苹果等蔬菜水果中毒死蜱的快速测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 食药监办科201743号食品快速检测方法评价技术规范 3 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的毒死蜱经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和试纸条中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对样品中毒死蜱进行定性判定。4 试剂与材料 4.1 试剂 除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682中二级水的要求。4.1.1 甲醇（CH3OH）。4.1.2 提取液：由胶体金免疫层析试纸条配套提供，或按照其说明书配制。4.1.3 参考物质：毒死蜱参考物质的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量见表 1，纯度98%。表1 毒死蜱参考物质的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子质量 毒死蜱 Chlorpyrifos 2921-88-2 C9H11Cl3NO3PS 350.6 注：或等同可溯源物质。4.2 溶液配制 4.2.1 毒死蜱标准储备液（100 g/mL）：准确称取毒死蜱参考物质（4.1.3）1 mg，置于10 mL 容量瓶中，用甲醇（4.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为 100 g/mL 的毒死蜱标准储备液。4避光保存，有效期 6 个月。全国团体标准信息平台 2 4.2.2 毒死蜱标准工作液（1 g/mL）：精密移取毒死蜱标准储备液（100 g/mL）（4.2.1）0.1 mL，置于 10 mL 容量瓶中，用甲醇（4.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为 1 g/mL 的毒死蜱标准工作液。临用新配。4.3 材料 毒死蜱胶体金免疫层析试纸条，适用基质为蔬菜水果。需在阴凉、干燥、避光条件下保存。4.3.1 金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。4.3.2 检测卡。5 仪器与设备 5.1 电子天平：感量为 0.01 g。5.2 移液器：10 L200 L、100 L1000 L。6 分析步骤 6.1 试样制备 选取新鲜样品，擦去表面泥土，剪成1 cm左右见方碎片，备用。6.2 试样提取 称取2 g试样（精确至0.05 g）放入离心管中，加入6 mL提取液（4.1.2），上下振荡1 min，静置5 min，上清液即为样品待测液。6.3 测定步骤 吸取100 L样品待测液于金标微孔（4.3.1）中，抽吸23次使混合均匀，室温温育3 min，吸取100 L混匀液加入检测卡的加样孔中，室温反应10 min后进行结果判定。注1：测定步骤建议按照试纸条说明书。注2：结果判定建议使用读数仪，读数仪的具体使用参照仪器使用说明书。6.4 质控试验 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。6.4.1 空白试验 称取空白试样，按照6.2和6.3步骤与样品同法操作。6.4.2 加标质控试验 准确称取空白试样2 g（精确至0.05 g）放入离心管中，加入40 L毒死蜱标准工作液（1 g/mL）（4.2.2），使试样中毒死蜱浓度为0.02 mg/kg，按照6.2和6.3步骤与样品同法操作。7 结果判定 全国团体标准信息平台 3 7.1 读数仪测定 按读数仪说明书要求操作，直接读数并进行结果判定。7.2 目视判定 通过对比质控线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。目视判定示意图见图1。7.2.1 无效 质控线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，表明操作不正确或试纸条已失效，检测结果无效。7.2.2 阳性结果 质控线（C线）显色，检测线（T线）不显色或颜色浅于质控线（C线），表明样品中毒死蜱含量高于方法检出限，判定为阳性。7.2.3 阴性结果 质控线（C线）显色，检测线（T线）颜色深于质控线（C线）或与质控线（C线）颜色基本一致，表明样品中毒死蜱含量低于方法检出限，判定为阴性。图1 目视判定示意图 7.3 质控试验要求 空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。8 结果确认 当检测结果为阳性时，应按照GB 2763指定方法标准进行确证。9 性能指标 9.1 检出限：0.02 mg/kg。全国团体标准信息平台 4 9.2 灵敏度：95%。9.3 特异性：90%。9.4 假阴性率：5%。9.5 假阳性率：10%。注：性能指标计算方法见附录A。10 其他 本方法所述试剂、试纸条信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者应使用经过验证的满足本方法规定的各项性能指标的试剂、试纸条。全国团体标准信息平台 5 A A 附 录 A（规范性附录）快速检测方法性能指标计算 A.1 快速检测方法各个性能指标计算见表A.1。表A.1 快速检测方法性能指标计算表 样品情况样品情况a 检测结果检测结果b 总数总数 阳性阳性 阴性阴性 阳性 N11 N12 N1.=N11+N12 阴性 N21 N22 N2.=N21+N22 总数 N.1=N11+N21 N.2=N12+N22 N=N1.+N2.或 N.1+N.2 显著性差异（2）2=(N12-N21-1)2/(N12+N21)，自由度（df）=1 灵敏度（p+，%）p+=N11/N1.特异性（p-，%）p-=N22/N2.假阴性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-灵敏度 假阳性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特异性 相对准确度，%c(N11+N22)/(N1.+N2.)注：a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11 表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2 表示所有的第二列；N12 表示第一行，第二列。C为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。_ 全国团体标准信息平台