TSATA 035-2022 蜂蜜中21种生物碱的测定 液相色谱—串联质谱法.pdf

ICS67.05CCS X04团体标准T/SATA 0352022蜂蜜中 21 种生物碱的测定液相色谱串联质谱法Determination of 21 alkaloids in honeyLiquidchromatography-tandem mass spectrometry 2022-04-24 实施2022-03-24 发布深圳市分析测试协会发 布全国团体标准信息平台T/SATA 035-2022I目次前言.1 范围.12 规范性引用文件.13 术语与定义.24 原理.25 试剂和材料.26 仪器和设备.27 试样的制备与保存.38 测定方法.39 结果与计算.510 灵敏度、准确度和精密度.5附录 A（资料性）基质加标标准溶液（10 g/kg 上机浓度）色谱图.6附录 B（资料性）21 种生物碱的中文名称、英文名称、CAS 号、分子式、相对分子质量.10全国团体标准信息平台T/SATA 035-2022II前言本文件按照GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由深圳市分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：深圳市质量安全检验检测研究院、深圳市英思太检验检测有限公司。本文件主要起草人：丁燕玲、陈彤、钟名琴、吴荣顺、黄婷、闫清华、陈丹华、叶夏声、黄永生、罗兰、何玉榆。本文件为首次发布。全国团体标准信息平台T/SATA 035-20221蜂蜜中 21 种生物碱的测定-液相色谱串联质谱法1范围本标准规定了用液相色谱串联质谱仪器检测蜂蜜中多种生物碱的方法。本标准适用于蜂蜜中毒芹碱、毛果芸香碱、毒扁豆碱、东莨菪碱、山莨菪碱、钩吻碱、千里光非灵、倒千里光碱、原阿片碱、马钱子碱、秋水仙碱、塔拉乌头胺、次乌头碱、中乌头碱、草乌甲素、乌头碱、藜芦次碱、-卡茄碱、雷公藤吉碱、雷公藤次碱和-茄碱的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可以使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样经乙腈超声提取，离心后取部分提取液氮吹浓缩、复溶，经微孔滤膜过滤，用液相色谱串联质谱仪测定，保留时间、离子相对丰度定性判断被测物，外标法定量。5试剂和材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为GB/T 6682规定的一级水。5.1乙腈，色谱纯。5.2甲酸，色谱纯。5.3甲醇，色谱纯。5.4无水硫酸钠，分析纯。5.5乙酸铵，色谱纯。全国团体标准信息平台T/SATA 035-202225.6甲醇+水+甲酸（10+90+0.09）溶液配制：准确量取10.00 mL甲醇（5.3）、90.00 mL水、0.09 mL甲酸（5.2）溶液，混匀存放。5.7生物碱标准品：21种生物碱中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量详见附录B，均为有证标准物质。5.8标准储备溶液：1.00 mg/mL。准确称量每种标准物质，用甲醇配成 1.00 mg/mL 的标准储备液，-18冰箱中保存，有效期一年。5.9混合标准中间溶液：10.0 g/mL。分别准确吸取每种标准储备溶液（5.8）1.00 mL 于 100 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，-18冰箱中保存，有效期 3 个月。移取一定量的 10.0 g/mL 混合标准中间溶液，用甲醇配成不同浓度的混合标准工作溶液，2-4条件下贮存，有效期 1 个月。6 仪器和设备6.1 液相色谱串联质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)。6.2 电子天平：感量 0.1mg 和 0.01g。6.3 高速离心机：转速不小于 5000 r/min。6.4 超声波清洗仪。6.5 氮吹仪。6.6 涡旋振荡器。7 试样的制备与保存对未结晶的样品将其搅拌均匀，对有结晶的样品可将样品瓶盖塞紧后，置于40的水浴中温热融化，混合均匀后取样品约500 g，装入洁净容器，密封，并标明标记，于常温下保存。8 测定方法8.1 提取取 1.00 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 离心管中，加入 5.00 mL 去离子水，涡旋混匀。加入 10.00mL 乙腈，涡旋震荡 5 min，超声辅助提取 10 min。加入 4.00 g 无水硫酸钠，迅速振摇 1 min，不低于5000 转/min 离心 6 min。8.2 净化于上述离心后提取液（8.1）中移取 5.00 mL 上清液至 15 mL 带刻度小管内，在 45 水浴中氮吹浓缩至少于 0.5 mL。残留液用甲醇+水+甲酸（10+90+0.09）溶液准确定容至 1.0 mL，过 0.22m 滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。8.3 基质加标标准工作曲线的制备准确移取 21 种生物碱的混合标准溶液适量，添加到 1.00 g 空白试样中，浓度为 0.500g/kg，1.00g/kg，5.00g/kg，10.0g/kg，20.0g/kg，50.0g/kg 的各系列空白添加试样，按 8.1-8.2 步骤操作，供液相色谱串联质谱仪测定。全国团体标准信息平台T/SATA 035-202238.4 仪器参考条件8.4.1液相色谱条件a)色谱柱：BEH C18（1003.0mm，1.7m）；b)流动相：A相：5 mmol/L乙酸铵（加0.1%甲酸）溶液；B相：甲醇溶液；c)梯度：0.00-0.50min，维持90A；0.50-4.00min，90A线性变化到70A；4.00min-6.50min,70A线性变化到10A；6.50min-9.00min,维持10A；9.00min-10.00min,10A立即变化到90A。d)流速：0.40 mL/mine)柱温：40f)进样量：5.00 L8.4.2 质谱条件a)离子源：电喷雾离子源b)扫描方式：正离子扫描c)检测方式：多反应监测d)电离电压：2.00 kVe)源温：150 f)雾化温度：500 g)锥孔气流速：150 L/hh)雾化气流速：1000 L/hi)各种生物碱定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量见表1：表121种生物碱定性定量离子对及去簇电压、碰撞电压序号名称保留时间/minParent(m/z)Daughter(m/z)CompoundNameCone(v)Collision(ev)1毒芹碱4.70128.141.1coniine3021128.1*69.0coniine30152毛果芸香碱2.90208.8*96.2Pilocarpine2026208.8162.8Pilocarpine20203毒扁豆碱5.42276.2*162.0eserine3020276.2219.1eserine30114东莨菪碱5.00304.2*138.1hyoscine3021304.2156.2hyoscine30165山莨菪碱4.96306.2122.1anisodamine3028306.2*140.1anisodamine30246钩吻碱5.26323.1*195.1gelsemine3036323.1218.2gelsemine30327千里光非灵5.80334.2*120.0seneciphylline3026334.2306.1seneciphylline30248倒千里光碱5.46352.2120.1retrorsine3027352.2*324.1retrorsine3026全国团体标准信息平台T/SATA 035-202249原阿片碱6.52354.0*149.0Protopine2031354.0188.0Protopine203310马钱子碱5.83395.2244.1brucine3033395.2*324.1brucine302911秋水仙碱7.13400.2326.1colchicine3025400.2*358.2colchicine302112塔拉乌头胺5.87422.358.1talatisamine3044422.3*390.3talatisamine302913次乌头碱7.26616.3*524.2hypaconitine3034616.3556.3hypaconitine303014中乌头碱7.19632.4354.3Mesaconitine3032632.4*572.3Mesaconitine303215草乌甲素7.31644.3552.3BulleyaconitineA3037644.3*584.4BulleyaconitineA303216乌头碱7.28646.4526.3aconitine3037646.4*586.3aconitine303217藜芦次碱7.17674.4*456.3veratridine3047674.4474.4veratridine304418-卡茄碱7.06852.6*98.0a-chaconine3090852.6706.4a-chaconine306719雷公藤吉碱7.86858.5*686.3wilforgine3031858.5840.3wilforgine302620雷公藤次碱8.05868.5*178.0Wilforine5054868.5206.0Wilforine504121-茄碱7.08868.5*398.4a-solanine10065868.5722.4a-solanine10065注：带*为定量离子对。8.4.3 液相色谱-串联质谱测定8.4.3.1 定性测定按照上述条件测定样品和基质加标标准溶液，如果样品的质量色谱峰保留时间与基质加标标准溶液一致；定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质加标标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表2定性时离子相对丰度的允许偏差范围相对丰度允许偏差（）502020-502510-20301050全国团体标准信息平台T/SATA 035-202258.4.3.2 定量测定在仪器最佳工作条件下，对基质加标标准溶液进样，以峰面积为纵坐标，基质加标标准溶液浓度为横坐标，作单点或多点校准，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。21种生物碱基质加标标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图参见附录A。8.4.3.3 空白试验取空白试样，采用完全相同的测定步骤进行测定。9 结果计算试样中每种生物碱含量按式（1）计算：10001000mVcX（1）X:试样中待测组分含量（g/kg）；c:从标准工作曲线或单点校准得到的待测组分溶液浓度（ng/mL）；V:试样溶液定容体积（mL）；m:试样称样量（g）。注：计算结果需扣除空白值。结果保留3位有效数字。10 灵敏度、准确度和精密度10.1 灵敏度毒芹碱、毛果芸香碱、毒扁豆碱、东莨菪碱、山莨菪碱、钩吻碱、千里光非灵、倒千里光碱、原阿片碱、马钱子碱、秋水仙碱、塔拉乌头胺、次乌头碱、中乌头碱、草乌甲素、乌头碱、藜芦次碱、-卡茄碱、雷公藤吉碱、雷公藤次碱和-茄碱 21 种生物碱在蜂蜜中的方法检出限均为：0.500 g/kg。10.2 准确度本方法21种生物碱在0.500 g/kg-20.0 g/kg添加浓度的范围内，其回收率范围为60%-120%，相应浓度基质加标标准工作曲线的相关系数应大于0.99。10.3 精密度：本方法批内相对标准偏差20%，批间相对标准偏差20%。全国团体标准信息平台T/SATA 035-20226附录A（资料性）基质加标标准溶液（10 g/kg 上机浓度）色谱图min2.004.006.00%0100F5:MRM of 2 channels,ES+306.2 140.1QX-10.0 2.639e+