TGDATCM 0012-2021 甘草煮散饮片.pdf

团体标准 甘草（甘草）煮散饮片 Gancao（Gancao）zhusanyinpian （完成时间：2021 年 9 月）T/GDATCM 00122021 2021-12-24 发布 2022-03-24 实施 广 东 省 中 药 协 会发 布 ICS 11.120.99 CCS C273 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台T/GDATCM 00122021 I 目 次 前 言.III 引 言.IV 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 规范性技术要素.1 附录 A.4 附录 B.5 参考文献.15 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台T/GDATCM 00122021 III 前 言 本文件按照GB/T1.12020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由广东省中医院（广东省中医药科学院）提出。本文件由广东省中药协会归口。本文件起草单位：广东省中医院（广东省中医药科学院）、中国中医科学院中药研究所、中国医学科学院药用植物研究所、平安津村有限公司。本文件主要起草人：宫璐、徐江、姚辉、刘玉德、白俊其、廖保生、丘小惠、林小兰、黄志海、徐文、张丹纯。全国团体标准信息平台T/GDATCM 00122021 IV 引 言 甘草为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根茎。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止疼，调和诸药之功效。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。主要分布于新疆、内蒙古、宁夏、甘肃、陕西朔州，以野生为主；人工种植甘草主产于新疆、内蒙古、甘肃的河西走廊、陇西的周边，宁夏部分地区。甘草多生长在干旱、半干旱的沙土、沙漠边缘和黄土丘陵地带，在引黄灌区的田野和河滩地里也易于繁殖。它适应性强，抗逆性强。甘草煮散饮片来源于豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.干燥根和根茎炮制成饮片后的加工品。传统煮散一般为捣碎至粗颗粒，宋代太平惠民和剂局方中规定，煮散剂服法上多注“为粗末”，然而并未详细规定其颗粒度大小。在充分参考历代煮散基本要求和现代煮散研究文献的基础上，起草了甘草（甘草）煮散饮片标准。全国团体标准信息平台T/GDATCM 00122021 1 甘草（甘草）煮散饮片 1 范围 本文件规定甘草（甘草）煮散饮片的检测标准。本文件适用于甘草（甘草）煮散饮片的质量控制。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。（1）中华人民共和国药品管理法（2）中华人民共和国中医药法（3）中华人民共和国药典（4）国家药品标准工作手册（5）广东省中医药条例（6）中药煮散饮片质量标准研究指导原则和技术要求（试行）3 术语和定义 3.1 来源 豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.干燥根和根茎炮制成饮片后的加工品。3.2 中药煮散饮片 中药煮散饮片是将传统中药饮片按规定制成一定大小，供调配或医院制剂使用的颗粒状中药饮片。4 规范性技术要素【制法制法】取甘草（厚片），制成粒度为0.810.0mm的煮散饮片，即得。【性状性状】本品呈不规则颗粒状。多见黄白色颗粒，可见表皮红棕色或灰棕色，具纵皱纹，或黄白色颗粒。切面显纤维性，质坚实，气微，味甜而特殊。【鉴别鉴别】（1）本品粉末淡棕黄色。纤维成束，直径814m，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。草酸钙方晶多见。具缘纹孔导管较大，稀有网纹导管。木栓细胞红棕色，多全国团体标准信息平台T/GDATCM 00122021 2 角形，微木化。（2）取本品粉末 1g，加乙醚 40ml，加热回流 1 小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇 30ml，加热回流 1 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水 40ml 使溶解，用正丁醇提取 3 次，每次 20ml，合并正丁醇液，用水洗涤 3 次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇 5ml 使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材 1g，同法制成对照药材溶液。再取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每 1ml 含 2mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典 2020 年版通则 0502）试验，吸取上述三种溶液各 12l，分别点于同一用 1%氢氧化钠溶液制备的硅胶 G 薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15112）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。（3）DNA 条形码分子鉴定 模板 DNA 提取 取本品适量，研成细粉，用植物基因组提取试剂盒提取供试品模板 DNA 溶液，置-20保存备用。另取甘草对照药材适量，同法制成对照药材模板 DNA 溶液，置-20保存备用。PCR 反应 ITS2 条形码通用引物：ITS2F（5-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3）和 ITS3R（5-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3）。PCR 反应体系：在 200l 离心管中进行，反应总体积为 25l，反应体系包括 2 Taq PCR Mix 12.5l，通用引物（2.5mol/l）各 1l，模板 DNA 2l，无菌超纯水 8.5l。将离心管置 PCR 仪，ITS2 条形码 PCR 反应参数：94预变性 5 分钟，循环反应 40 次（94 30 秒，56 30 秒，72 45 秒），延伸（72）10 分钟。另取无菌超纯水，同法上述 PCR 反应操作，作为空白对照。电泳检测 照琼脂糖凝胶电泳法（中国药典 2020 年版通则 0541），凝胶浓度为 1.5%，凝胶中加入核酸凝胶染色剂 GelRed；供试品、对照药材与空白对照 PCR 反应溶液的上样量分别为 5l，DNA 分子量标记上样量为 2l（0.5g/l）。电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。供试品凝胶电泳图谱中，在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上，在约 500bp 处应有一条 DNA 条带，空白对照无条带。测序 在紫外光灯下迅速切取 500bp 处目的条带所在位置的凝胶，采用琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒进行纯化。以 PCR 扩增引物作为测序引物，使用 DNA 测序仪对目的条带进行测序。中药材 DNA 条形码序列 对原始测序结果应用有序列拼接功能的专业软件进行序列拼接，去除引物区，并使序列方向与 PCR 扩增正向引物方向一致。结果判定 将获得的序列与甘草基原植物甘草 G.uralensis 的 ITS2 条形码标准序列比对，应在变异范围内。甘草的 ITS2 序列比对后长度为 223bp，有两个变异位点，分别为 10 位点 G-A 变异，16 位点T-C 变异。甘草 G.uralensis 的 ITS2 标准序列特征如下（图 1，扫描二维码可读取核酸序列）：全国团体标准信息平台T/GDATCM 00122021 3 图 1 甘草 ITS2 标准序列特征图【检查】【检查】粒度 照粒度检查法（附录 A）测定，不能通过 10.0mm 筛（GB/T6003.1 2012 R20）的不得超过 2.0%，能通过二号筛的不得超过 5.0%。水分 不得过10.0%（中国药典2020年版通则0832第二法）。总灰分 不得过 5.0%（中国药典 2020 年版通则 2302）。重金属及有害元素 照铅、镉、砷、汞、铜测定法（中国药典 2020 年版通则 2321 原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定，铅不得过 5mg/kg，镉不得过 1mg/kg，砷不得过 2mg/kg；汞不得过 0.2mg/kg；铜不得过 20mg/kg。【含量测定】含量测定】照高效液相色谱法（中国药典 2020 年版通则 0512）测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相 A，以 0.05%磷酸溶液为流动相 B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为 237nm。理论板数按甘草苷峰计算均应不低于 5000。时间（分钟）流动相 A（%）流动相 B（%）08 19 81 835 1950 8150 3536 50100 500 3640 10019 081 对照品溶液的制备 取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加 70%乙醇分别制成每1ml 含甘草苷 20g、甘草酸铵 0.2mg 的溶液，即得（甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207）。供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约 0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%乙醇甲醇 100ml，密塞，称定重量，超声处理（功率 250W，频率 40kHz）30 分钟，放冷，再称定重量，用 70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含甘草苷（C21H22O9）不得少于 0.60%，和甘草酸（C42H62O16）不得少于 2.5%。【性味与归经】【性味与归经】甘、平。归心、肺、脾、胃经。【功能与主治】【功能与主治】补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。【用法与用量】【用法与用量】210g，遵医嘱酌情加减。【注意】【注意】不宜与海藻、京大戟、红大戟、甘遂、芫花同用。【贮藏】【贮藏】密封，置干燥处，防蛀。开封后一个月内使用完。全国团体标准信息平台T/GDATCM 00122021 4 附录 A（资料性附录）粒度检查法 称取煮散饮片供试品 100g，精密称定，照粒度及粒度分布测定法（中国药典 2020 年版通则 0982第二法）测定，置最上层 10.0mm 筛（GB/T6003.1 2012 R20）上，下层二号药筛，最下层配有密合的接收容器，筛上加盖，保持水平状态过筛，左右往返，边筛动边拍打 3 分钟。分别取不能通过 10.0mm 筛和能通过二号筛的颗粒及粉末，称定重量，分别计算所占比例。甘草煮散饮片不能通过 10.0mm 筛的不得超过 2.0%（最长径不得超过 12.0mm），能通过二号筛的不得超过 5.0%。全国团体标准信息平台T/GDATCM 00122021 5 附录 B（资料性附录）起草说明 别名别名 美草、蜜甘、蜜草、蕗草、国老1 甘草出自神农本草经，列为上品，因味甘甜而得名，“一名美草，一名蜜甘”。陶弘景名医别录中首次提出国老之名，“此草最为众药之王，经方少有不用者国老即帝师之称，虽非君而为君所宗”。李时珍称其“调和众药有功，固有国老之号”。本草图经，植物名实图考，本草蒙筌，本草纲目及全国中草药汇编中均记载甘草原植物图例。【来源来源】中国药典 2020 年版一部甘草收载了豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草 Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草 Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎。本文甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根茎。【原植物原植物】多年生草本；根与根状茎粗状，直径 13cm，外皮褐色，里面淡黄色，具甜味。茎直立，多分枝，高 30120cm，密被鳞片状腺点、刺毛状腺体及白色或褐色的绒毛，叶长 520cm；托叶三角状披针形，长约 5mm，宽约 2mm，两面密被白色短柔毛；叶柄密被褐色腺点和短柔毛；总状花序腋生，具多数花，总花梗短于叶，密生褐色的鳞片状腺点和短柔毛；苞片长圆状披针形，长 34mm，褐色，膜质，外面被黄色腺点和短柔毛；花萼钟状，长 714mm，密被黄色腺点及短柔毛，基部偏斜并膨大呈囊