TSDAQI 039-2021 饲料中抗氧化剂丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)的测定 气相色谱法.pdf

ICSB 4665.120T/SDAQI团体标准T/SDAQI 0392021饲料中抗氧化剂丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)的测定气相色谱法Determination ofbutylated hydroxyl anisole(BHA)、dibutylated hydroxyl toluene(BHT)in feedsGas chromatography2021-10-25 实施山东质量检验协会发 布2021-09-25 发布全国团体标准信息平台T/SDAQI 0392021I版权说明本文件系由山东质量检验协会（简称“协会”）组织创制的团体标准文本（含制定过程中的草案），协会拥有本文件的著作权，受中华人民共和国著作权法保护。除法律所允许的情形或事先得到协会书面许可外，任何组织和个人不得以任何理由进行复制、销售、传播本文件，或抄袭、歪曲本文件等侵权行为，否则，行为人应承担相应的民事、行政责任，构成犯罪的，将依法追究其刑事责任。其他文件引用本文件，不属侵权行为。凡利用本文件进行或支持贸易、认证等商业活动，应事先购买正式文本或得到协会书面授权。购买本文件或获得授权，请与协会联系。欢迎社会各界举报侵权盗版行为，协会将依法严格保护举报人信息。联系人：范红梅联系电话：0531-8970198615668365153联系邮箱：协会对本版权声明拥有最终解释权。全国团体标准信息平台T/SDAQI 0392021II前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东质量检验协会提出并归口。本文件起草单位：山东省产品质量检验研究院、青岛市食品药品检验研究院、滨州市食品药品检验检测中心。本文件主要起草人：周莉莉、康兆广、赵海峰、侯广月、李丽、韩家忠、王一村、王苹苹、武笑颖、张鑫、赵娟、袁雪、姜鑫、栾文惠、李梓源、李延臻、李秀超、潘舰。本文件的所有权和解释权归山东质量检验协会。如果您在本文件使用中发现错误或技术内容有不当之处，请及时与协会秘书处联系，将意见发送到。全国团体标准信息平台T/SDAQI 03920211饲料中抗氧化剂丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)的测定气相色谱法1范围本文件规定了饲料中丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)的测定。本文件适用于配合饲料、复合预混合饲料、浓缩饲料、鱼粉、骨粉、蛋白饲料等饲料中BHA、BHT的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1饲料采样GB/T 20195动物饲料试样的制备3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样中的抗氧化剂用有机溶剂提取、净化后，用气相色谱仪检测，采用保留时间定性，外标法定量。必要时，用气相色谱质谱联用仪进行确证。5试剂除非另有规定，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T 6682规定的一级水。5.1正己烷。5.2环己烷。5.3乙酸乙酯。5.4乙腈。5.5氯化钠：分析纯。5.6BHA 标准品：纯度99.0%5.7BHT 标准品：纯度99.3%。5.8BHA、BHT 标准储备液：准确称取 BHA、BHT 标准品各 50mg(精确至 0.1 mg)，用乙酸乙酯和环己烷混合溶液（1:1）定容至 50mL，配制成 1000mg/L 的储备液，于 4冰箱中避光保存。全国团体标准信息平台T/SDAQI 039202125.9BHA、BHT 标准使用液：吸取标准储备液 0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL 于一组 10mL 容量瓶中，用乙酸乙酯和环己烷混合溶液（1:1）定容，此标准系列的浓度为 10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100mg/L、200mg/L，现用现配。6仪器和设备6.1气相色谱仪，配有氢火焰离子化检测器（FID）。6.2凝胶渗透色谱仪(GPC)或其他等效净化设备。6.3电子天平：感量为 0.1mg 和 0.01mg。6.4旋转蒸发仪。6.5涡旋混合器。6.6组织粉碎机。7试样制备固体或半固体样品粉碎混匀，然后用四分法取样，或根据试样情况取有代表性试样，密封保存。8试验步骤8.1提取称取饲料2.0g(准确至0.1mg)，于50mL离心管中，加入5mL乙腈饱和的正己烷溶液，涡旋1min充分混匀，浸泡10min。加入5mL饱和氯化钠溶液，用5mL正己烷饱和的乙腈溶液涡旋2min，3000r/min离心5min，收集乙腈层于试管中，再重复使用5mL正己烷饱和的乙腈溶液提取2次，合并3次提取液，待净化。8.2净化提取液经凝胶渗透色谱装置净化，收集流出液蒸发浓缩至近干，用乙酸乙酯和环己烷混合溶液定容至2mL（或采用等效净化方式），进仪器分析。凝胶渗透色谱净化参考条件见附录A。8.3气相色谱参考条件8.3.15%苯基-甲基聚硅氧烷毛细管柱（30m0.25mm0.25m），或等效色谱柱。8.3.2进样口温度：230。8.3.3升温程序：初始柱温 80，保持 1min，以 10/min 升温至 250，保持 5min。8.3.4检测器温度：250。8.3.5进样量：1L。8.3.6进样方式：不分流进样。8.3.7载气：氮气，纯度99.999%，流速 1mL/min。8.4定量测定将标准系列工作液及试样溶液分别注入气相色谱仪中，测定相应的抗氧化剂，以标准工作液的浓度为横坐标，以目标物响应值(如：峰面积、峰高等)为纵坐标，绘制标准曲线。根据试样溶液相应的抗氧化剂响应值，在标准曲线得到待测液中相应抗氧化剂的浓度，色谱图见附录B。当目标物有检出时使用气相色谱-质谱法进行确证（附录C）。全国团体标准信息平台T/SDAQI 039202138.5平行试验按上述规定对同一试样进行平行试验测定。8.6空白试验除不加试料外，按上述规定进行操作。9试验数据处理试样中抗氧化剂的含量按式（1）计算：fmVcY(1)式中：Y试样中抗氧化剂含量，mg/kg；c从校正曲线上得到的试样抗氧化剂浓度，mg/L；m试样质量，g；V样液最终定容体积，mL；f测定液稀释倍数。计算结果应扣除空白值，以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。10精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。11其他本方法定量限为：丁基羟基茴香醚(BHA)，2mg/kg；二丁基羟基甲苯(BHT)，2mg/kg。全国团体标准信息平台T/SDAQI 03920214A附录A（资料性）凝胶渗透色谱净化参考条件凝胶渗透色谱净化参考条件如下：凝胶渗透色谱柱：300mm20mm 玻璃柱，Bio Beads(S-X3)，40m75m；流动相：乙酸乙酯：环己烷=1：1(体积比)；流速：5mL/min；进样量：2mL；流出液收集时间：7min17.5min；紫外检测器波长：280nm。全国团体标准信息平台T/SDAQI 03920215附录B（资料性）标准谱图B.1BHA、BHT 标准溶液的气相色谱图图 B.1BHA、BHT标准溶液的气相色谱图（浓度为50.0 mg/L）B.2BHA、BHT 标准溶液的气相色谱质谱图图 B.2BHA、BHT标准溶液的气相色谱质谱图（浓度为1.0 mg/L）全国团体标准信息平台T/SDAQI 03920216B.3BHA（SIM 扫）离子比例图图 B.3BHA（SIM 扫）离子比例图B.4BHT（SIM 扫）离子比例图图 B.4BHT（SIM 扫）离子比例图全国团体标准信息平台T/SDAQI 03920217附录C（资料性）气相色谱-质谱法确证C.1仪器设备C.1.1气相色谱质谱联用仪（配有EI源）。C.1.2凝胶渗透色谱仪(GPC)。C.1.3电子天平：感量为0.1mg和0.01mg。C.1.4旋转蒸发仪。C.1.5漩涡振荡器。C.1.6粉碎机。C.2气相色谱质谱仪参考条件色谱柱：5%苯基-甲基聚硅氧烷毛细管柱，30m0.25mm0.25m，或等效色谱柱；色谱柱升温程序：70保持1min，然后以10/min程序升温至200，再以280后运行5min；载气：氦气，纯度99.999%，流速1mL/min；进样口温度：230；进样量：1L；进样方式：无分流进样，1min后打开阀；电子轰击源：70eV；离子源温度：230；GC-MS接口温度：280；溶剂延迟10min；选择离子监测：每种化合物分别选择1个定量离子，2个定性离子。每组所有需要检测离子按照出峰顺序，分时段分别检测。表 A.1 定量、定性离子表抗氧化剂名称定量离子定性离子1定性离子2BHA165137180BHT205145220C.3定性、定量测定C.3.1定性测定在相同试验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品相一致(相对丰度50%，允许20%偏差；相对丰度20%50%，允许25%偏差；相对丰度10%20%，允许30%偏差；相对丰度10%，允许50%偏差)，则可判断样品中存在这种抗氧化剂。C.3.2定量测定将标准系列工作液及试样溶液分别注入气相色谱质谱仪中，测定相应的抗氧化剂，以标准工作液的浓度为横坐标，以定量离子响应值(如：峰面积、峰高等)为纵坐标，绘制标准曲线。根据试样溶液相应的抗氧化剂响应值，在标准曲线得到待测液中相应抗氧化剂的浓度。全国团体标准信息平台T/SDAQI 03920218C.4其他本确证方法的检出限为：丁基羟基茴香醚(BHA)，0.01 mg/kg；二丁基羟基甲苯(BHT)，0.01 mg/kg。全国团体标准信息平台