TFSSJ SYNY002-2020 香菇栽培种工厂化生产技术规程.pdf

ICS 65.020.20 B 05 团体标准 T/FSSJ SYNY0022020 代替 T/FSSJ SYNY002-2017 香菇栽培种工厂化生产技术规程 Production Technical Practice for Factory Cultivation of Letinous edodes Spawn 2020-01-20 发布 2020-01-20 实施 辽宁省食用菌协会 发 布 全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/FSSJ SYNY0022020 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。本标准由辽宁省食用菌协会提出。本标准由辽宁省食用菌协会归口。本标准起草单位：辽宁三友农业生物科技有限公司、辽宁省微生物科学研究院、辽宁省食用菌协会。本标准主要起草人：邹存兵、赵铠、朱巍巍、张忠伟、陈飞、黄云松、李莹莹、孙凯、刘东旭、刘芳岑、盛金、王俊超。全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/FSSJ SYNY0022020 1 香菇栽培种工厂化生产技术规程 1 范围 本标准规定了液体菌种生产香菇栽培种的术语和定义、液体菌种制备与相关技术要求、栽培种制作工艺、栽培种质量检查、生产记录与存档、留样、标签标志包装运输。本标准适用于本标准适用于香菇栽培种的工厂化生产。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 19170 香菇菌种 GB/T 12728 食用菌术语 GB/T 150.4 压力容器 第4部分：制造、检验和验收 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1846 食用菌菌种检验规程 3 术语和定义 GB/T 12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1 发酵罐 fermentation bioreactor 进行发酵培养的专用设备，也称发酵反应器。3.2 罐压 pressure of fermentation bioreactor 指液体菌种培养过程中培养器内保持的空气压力，单位：Mpa。3.3 通风量 ventilation volume 液体菌种培养时每分钟通入培养基中的无菌空气的量。用V/V（培养基体积/通入空气体积）标示。3.4 接种量 inoculation quantity 接入培养器中的菌种的数量，以菌种体积与培养基体积的百分比标示。全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/FSSJ SYNY0022020 2 3.5 摇瓶液体种 flask culture 装在玻璃三角瓶内于摇床上恒温振荡培养的液体菌种。3.6 初始pH值 initial pH 液体培养基配制灭菌后未接种时的pH值。4 人员 应有与液体菌种生产所需的专业技术人员，包括检验人员。5 场地和设施 5.1 生产场地、厂房和布局 通风良好，交通便利。周围无工矿企业污染源、生活垃圾堆放和填埋场、工业固体废弃物和危险废弃物堆放和填埋场等。有堆料场、原料库、拌料室、分装室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室、贮存室等，满足生产需求。布局符合符合NY/T 528 规定。5.2 生产设施与设备 根据生产需求进行配备，基本设备应具有磅秤、拌料机、全/半自动装袋窝口机、高压蒸汽锅炉等。使用符合NY/T 1731设备管理规定。压力容器应符合GB/T 150.4规定并经政府有关部门检验合格。6 生产工艺流程 母种摇瓶液体种发酵罐液体种 培养料配制装袋灭菌冷却接种培养 栽培种 7 培养基 母种培养基使用附录A中A.1规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）或A.2规定的综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA）。液体种培养基根据香菇品种及当地原料的要求使用适宜配方（见附录B），严格掌握初始pH。栽培种培养基配方参照NY/T 528 标准附录B 原种和栽培种常用培养基配方及其适用种类，根据香菇品种及当地原料的要求选择使用。8 母种 母种继代培养后须按NY/T 1846 规定抽样，并进行感官检验和菌丝微观特征检验，合格菌种进入生产流程。母种质量要求符合NY/T 1742 关于母种生产的规定。全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/FSSJ SYNY0022020 3 9 摇瓶液体菌种生产 9.1 培养基分装及灭菌 摇瓶液体种培养基装量为容器体积的1/4至1/3，分装后立即灭菌。按常规高压蒸汽灭菌锅操作规程，0.1Mpa0.12Mpa（121126），维持25min。灭菌后的摇瓶液体种培养基于301 培养箱恒温培养48小时后，观察确认无混浊、无异味，可用于接种培养。9.2 接种 按无菌操作规程，将母种斜面菌丝体切割成2mm4mm颗粒，移入摇瓶培养基中，每100 mL液体培养基接种菌丝体颗粒1颗3颗。9.3 培养 菌种培养温度261，空气相对湿度55%65%，避光振荡培养。往复式摇床振荡频率60次120次/分，旋转式摇床振荡频率150转180转/分。每日检查生长状态，及时检出浑浊、异味、泡沫异常的不合格菌种。摇瓶静置1分钟后，菌丝球体积占比液体培养基体积的4/5以上，可结束培养。10 发酵罐液体菌种生产 10.1 空气过滤系统检查 使用前要拆分检查滤芯，要求无油污、料污、无破损，外壳内外壁要求无污物、光亮洁净。滤芯在额定风量下，对粒径0.10.2m粒子的过滤效率大于99.99%，空气阻力低于280pa。10.2 发酵罐检查与清洗 检查罐上全部阀门、安全阀、压力表、要求完好，工作正常。对罐体内、外和全部阀门用流水进行冲洗，达到无死角、内壁无任何培养料残余物的洁净程度。10.3 空消灭菌 发酵罐初次使用、出现染菌、长期放置及更换品种时，应进行空消灭菌。有内置电加热棒的培养器加水至容积的80%加热至121，维持40min。用外源蒸汽灭菌的培养器，蒸汽压力达到0.1Mpa0.12Mpa（121124），维持40min。10.4 投料定容 将配制好的培养基材料搅拌均匀，倒入或用泵抽入发酵罐中，加水定容至所需体积。培养基投料总量为罐体总容积的70%80%。10.5 灭菌和冷却 按高压蒸汽灭菌方法操作，培养器内压力达到0.1Mpa0.12Mpa，培养基温度达到121124、保持时间60 min90 min。灭菌结束将培养基降温至2428。降温过程中要及时向培养器内补充过滤空气，防止罐压回零。全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/FSSJ SYNY0022020 4 10.6 接种 利用火焰保护接种，接种量为罐内培养基总量的0.1%0.5%。10.7 培养 发酵罐通风量每分钟1：0.51.2 VV(料液体积空气体积)，调节罐压保持在0.02 Mpa0.04 Mpa，培养温度调节在2426，培养7d10d可达到香菇液体菌种成品标准。特殊品种根据特殊需求具体设定。10.8 检测和判定 培养开始3d后每日从发酵罐中取出样品进行检测。按照NY/T 1846 中菌丝微观特征、细菌霉菌检验方法检验，如异常则排空罐内培养物，空消，重新生产。发酵终 pH 3.5-4.0，每100ml液体菌种菌丝干离心后重量1.42.0g/100ml。合格香菇液体菌种球状菌丝体呈白色，滤液呈淡黄色。菌球分布均匀、浓白清晰，有香菇液体菌种培养时特有的香气，无异味。11 栽培种生产 11.1 配料装袋 采用配套机械二级拌料法。按配方比例将木屑粗料先预湿后再同其他主料混合进行一级拌料，然后再加入辅料进行二次拌料，要求拌料均匀、含水量达标。机械窝口，插入专用塑料芯塞。11.2 灭菌和冷却 按高压蒸汽灭菌规程操作，排除冷空气后，升温至121、压力0.15MPa持续2.5h。灭菌后采用阶梯渐进式排气降压处理。降压结束迅速进入冷却室，开启降温处理。当袋内温度降至25下可以接种。11.3 接种 液体菌种接种量为20ml30ml/袋，接种后及时用无菌海绵塞封口。11.4 培养 培养温度以袋内中心温度为标准，保持袋内温度2223。培养室内空间相对湿度控制在55%以下，避光培养。接种5d后启动内循环通风，12d15d加强通风保持温度低于25。当菌丝长满菌袋后，降低培养室温度至1015，持续内循环通风3-5d。11.5 抽样和检测 按GB 19170规定进行抽样和检测。11.6 入库 合格菌种放于洁净的14冷库中短期保存备用。12 记录与留样 全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/FSSJ SYNY0022020 5 12.1 记录 配料、灭菌、培养环节应有生产记录，由具体操作人员现场填写，定期审核，签字后归档保存。12.2 抽样保存 按生产批次编号，随机抽取样品留存。抽样量为该批次生产量的0.1%，但每批次抽样数量不少于10；抽样量高于100可进行两级抽样。抽样菌棒46避光贮存，至本批次栽培种接种后正常出菇。13 标签、包装、运输、贮存 符合NY/T528关于标签标志、包装运输、贮存条件的要求。全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/FSSJ SYNY0022020 6 A A 附 录 A（规范性附录）母种常用培养基及配方 A.1 PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）马铃薯200g（用浸出汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000 ML，pH6.57.0。A.2 CPDA培养基（综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基）马铃薯200g（用浸出汁），葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，VB1 100mg，水1000 ML，pH6.57.0。全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/FSSJ SYNY0022020 7 B B 附 录 B（规范性附录）香菇液体种常用培养基及配方 B.1 马铃薯葡萄糖培养基 马铃薯全粉400g（100目），葡萄糖2000g，磷酸二氢钾100g，硫酸镁50g，水100L，pH6.57.0。B.2 蔗糖蛋白胨培养基 蔗糖750g，葡萄糖750g，蛋白胨250g，磷酸二氢钾200g，硫酸镁100g，维生素B1 0.1g，水100L，pH6.57.0。_ 全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台