TSBZYC 01-2021 地理标志产品 施秉太子参 组织培养与脱毒种苗扩繁技术规程.pdf

ICS 65.020.20CCS B 05T/SBZYC团体标准T/SBZYC01-2021地理标志产品 施秉太子参组织培养与脱毒种苗扩繁技术规程20211108 发布20211201 实施施秉县牛大场镇中药材协会发 布全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/SBZYC01-2021I目次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语和定义.14 组织培养.15 驯化.36 扩繁.4全国团体标准信息平台T/SBZYC01-2021II前言本文件按照 GB/T1.1-2020文件化工作导则 第 1 部分 文件的结构和编写给出的规则起草；请注意：本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由施秉县牛大场镇中药材协会提出归口；本文件由本文件由黔东南州农业科学院、施秉县农业农村局、施秉县中药材产业发展中心、贵州三泓药业股份有限公司、贵州省黔康生态科技农业发展有限责任公司、贵州徽贵药业有限公司起草；本文件主要起草人：陈建祥、左群、陈秀德、舒礼华、蒋永英、蒋祥勇、王燕。全国团体标准信息平台T/SBZYC01-20211地理标志产品 施秉太子参组织培养与脱毒种苗扩繁技术规程1范围本规程规定了地理标志产品 施秉太子参 组织培养技术术语和定义，组织培养、驯化、扩繁。本规程适用于地理标志产品 施秉太子参 脱毒组培苗生产、扩繁。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB437 硫酸铜（农用）。GB5749 生活饮用水卫生标准。GB19489 实验室生物安全通用要求。GB/T317 白砂糖GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备。GB/T628 化学试剂硼酸。GB/T647 化学试剂硝酸钾。GB/T659 化学试剂硝酸铵。GB/T664 化学试剂七水合硫酸亚铁（硫酸亚铁）。GB/T666 化学试剂七水合硫酸锌（硫酸锌）。GB/T671 化学试剂硫酸镁。GB/T1272 化学试剂碘化钾。GB/T1274 化学试剂磷酸二氢钾。GB/T1401 化学试剂乙二胺四乙酸二钠。GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法。GB/T15899 化学试剂一水合硫酸锰（硫酸锰）。GB/T 22278 良好实验室规范原则。T/SBZYC 02 地理标志产品 施秉太子参种植技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1脱毒组培苗选用优良太子参植株茎尖、茎段作为外植体，采用植物组织培养技术，培养再生出来的脱毒试管苗。4组织培养全国团体标准信息平台T/SBZYC01-202124.1组培室要求符合 GB19489 和 GB/T 22278 规定。4.2培养基选择以 MS 为基础培养基，所用药品符合 GB437、GB/T628、GB/T647、GB/T659、GB/T664、GB/T666、GB/T671、GB/T1272、GB/T1274、GB/T1401、GB/T15899 的规定。4.3培养基制备4.3.1母液配制和保存将培养基配方扩大若干倍，一般为 10 倍100 倍的浓缩液体。药品配制严格按照 GB/T603 规定方法配制，用水应符合 GB/T6682 规定要求。称取药品的药匙必须专药专用。将配制好的母液分别贴上标签，注明母液名称、配制倍数和日期，贮存在 24的冰箱中，贮藏时间控制在 90d 内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配置。4.3.2植物生长调节剂母液配制和保存将各种植物生长调节剂单独配成浓度为 50mg/100mL100mg/100mL。多数植物生长调节剂难溶于水，其溶解方法：NAA、IBA、IAA 等常用少量 95%的乙醇溶解，然后加热溶解，再加蒸馏水定容。6-BA、KT等先用少量 1mol/L 盐酸溶解，再加蒸馏水定容。所用水要符合 GB/T 6682 的要求。配制好植物生长调节剂分别贴上标签，标签写上名称、配制浓度和日期，贮存在 24的冰箱中，贮藏时间控制在 90d 内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配置。4.3.3培养基配制培养基由 MS 基础培养基、蔗糖、琼脂、水组成，蔗糖和水分别符合 GB 317 和 GB 5749 规定。所需蔗糖浓度 3g/L，琼脂粉浓度 4g/L。培养基配制流程，见图 1。水 分母 液生长调节剂蔗 糖琼 脂混 合加热溶解定 容调节 pH分装培养容器洗 涤干 燥播 种凝 固冷 却高压灭菌封 口图 1太子参培养基的配制流程图4.3.3.1诱导培养基为:MS+6-BA01.0+NAA00.1，按照培养基配制程序配制。4.3.3.2继代增殖培养基为:MS+6-BA0.51.5+NAA0.010.1，按照培养基配制程序配制。4.3.3.3壮苗及生根培养基为:MS+6-BA0+NAA0，按照培养基配制程序配制。4.3.4pH 值调节太子参培养基最佳 pH 值控制在 5.65.8，一般用 pH 计或 pH 试纸测试，常用（1mol/L）NaOH 或HCl 进行调整。4.3.5培养基分装和灭菌全国团体标准信息平台T/SBZYC01-20213将配制好的培养基趁热分装，分装量以占培养容器的 1/41/3 为宜。操作时，尽量避免将培养基粘到容器口和容器壁上，否则容易引起污染。将已分装好培养基封口并注明配制日期和培养基种类后即进行灭菌，灭菌锅内压力为 0.105MPa、温度达 121状态下保持 15min20 min 进行灭菌。4.4环境灭菌对环境进行定期灭菌。方法是用 75%乙醇或 0.1%新吉尔灭进行喷洒。对无菌操作室（接种室）、培养室和准备室采用紫外灯灭菌方法。接种所用的超净工作台在空气过滤灭菌的基础上再配合使用紫外灯照射灭菌 20min30 min，再用 75%乙醇对超净工作台表面进行擦拭。4.5接种工具灭菌接种用的工具、无菌水等必须在灭菌锅内压力为 0.105MPa、温度达 121状态下保持 1520 min进行灭菌。4.6外植体选择与处理4.6.1选择生长健壮、无病虫害的优良太子参植株为外植体材料。将太子参的茎尖、茎段用 5%10%洗衣粉漂洗 2min3min，洗去茎尖、茎段上的蜡质层及泥土、粉尘，用自来水冲洗 30min 后拿到接种室，用 75%酒精表面消毒 20s，无菌水冲洗 2 次；再用 0.1%Hg 消毒 3min8min，无菌水冲洗 8 次10 次，以除去残留消毒液。4.7外植体诱导培养将处理好的太子参外植体，在无菌条件下，用解剖刀和解剖针在显微镜下剥离 0.5mm1mm 的茎尖，切取茎段（每段留一个节），分别接种于诱导培养基。茎尖、茎段应插入培养基，芽不能陷入培养基中。接种后做好标记。经 7d10d 培养，芽开始萌动生长，30d 后芽长到 1cm2cm，同时有少量丛芽分化。4.8继代增殖培养将诱导出的不定芽转接于继代增殖培养基中，经 30d 培养，形成丛生芽，并有少量根系分化。4.9脱毒检验获得的丛生芽须经有资质的检验单位检测，确认无毒后，进入壮苗及生根培养。4.10壮苗及生根培养将丛生芽转接到壮苗及生根培养基中，经 30d 左右，形成完整的试管苗，并有根系的分化。4.11培养条件培养温度为 252，光照时间 12h/d，光照强度 2000LX3000LX。太子参组织培养技术流程见图 2。5驯化5.1大棚与基质消毒移栽前，用 0.02%0.04%高锰酸钾和 0.1%0.5%甲醛对大棚进行熏蒸消毒。用 0.04%高锰酸钾溶液对基质消毒灭菌。5.2炼苗全国团体标准信息平台T/SBZYC01-20214试管苗移栽前，将生长健壮、根 5 条6 条，长 0.cm51.0cm，带 3 叶4 叶的试管苗连同培养瓶放置移栽大棚 2d3d，然后打开瓶口再放置 2d3d，使试管苗逐渐适应外界环境。5.3脱毒苗移栽将驯化后的脱毒苗用镊子小心取出，洗去根部培养基，用 500 倍多菌灵或甲基托布津浸泡 30min，用自来水冲洗干净后，定植于已灭菌的基质（珍珠岩:腐殖土=1:2）中。移栽后用遮阳率 75%90%的遮阳网搭小拱棚遮阳，待苗生长 5d7d 后拆除。优良单株块根芽头或种子微茎尖未脱毒苗淘汰病毒检测脱毒苗增殖培养生根培养炼苗栽培商品种2-3 代繁殖原原种图 2太子参组织培养技术流程5.4脱毒苗管理及种参收获5.4.1脱毒苗移栽后要注意保湿，基质内含水量保持在 50%60%。移栽一周后，每周喷施 1/2MS 营养液 1 次2 次，定期用 500 倍多菌灵或甲基拖布津喷洒杀菌剂，预防病虫害发生，在整个生长期要及时除草。5.4.2脱毒苗生长 180d210d 后，即可收获太子参原原种。5.5脱毒检验获得的原原种须经有资质的检验单位，按照植物病毒检测方法检测，确认无毒后，进入加代扩繁。6扩繁检验无毒的原原种按照 T/SBZYC 02 加代扩繁，经过 2 代3 代繁殖成为原种，原种经加代繁殖即成为生产用脱毒良种。全国团体标准信息平台