TJAASS 50-2022 金蝉花.pdf

ICS11.120.10CCS C 23团体标准T/JAASS 50-2022金蝉花Cordyceps cicadae20220513 发布20220513 实施江苏省农学会江苏省农学会发布全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台T/JAASS 50-2022I目次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语和定义.14 质量要求.15 检验方法.26 标签、包装、运输及贮藏.37 保质期.3附录 A（资料性附录）金蝉花外观形态图.4附录 B（资料性附录）金蝉花显微特征图.5附录 C（资料性附录）金蝉花中麦角甾醇薄层色谱图.6附录 D（规范性附录）金蝉花中 6 种核苷类成分含量的测定.7附录 E（规范性附录）金蝉花中麦角甾醇含量的测定.11附录 F（规范性附录）金蝉花中甘露醇含量的测定.14参考文献.16全国团体标准信息平台T/JAASS 50-2022II前言本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则给出的规则编写。本文件由江苏大学提出。本文件由江苏省农学会归口。本文件起草单位：江苏大学、南京市产品质量监督检验院。本文件主要起草人：欧阳臻、万晶琼、周兆永、何小翠、葛琦、魏渊、王飞轩、朱南。全国团体标准信息平台T/JAASS 50-20221金蝉花1范围本文件规定了金蝉花的术语和定义、质量要求、检验方法、标签、包装、运输、贮藏、保质期。本文件适用于金蝉花的质量鉴别和检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其中最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法（NEQ ISO 3696:1987）SB/T 11039中药材追溯通用标识规范SB/T 11182中药材包装技术规范中国药典2020年版四部3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1金蝉花cordyceps cicadae麦角菌科真菌大蝉草（Cordyceps cicadae Shing）寄生在蝉科昆虫山蝉（Cicadae flammata Dist）若虫上的子座及若虫尸体的复合体。在每年68月间从土中挖出，除去泥沙，晾干。4质量要求4.1性状金蝉花应由虫体与从虫头部长出的真菌孢梗束或子座相连而成。虫体形似蝉蜕，长椭圆形，微弯曲，长 34 cm，直径 11.5 cm。表面灰褐色或棕黄色，大部分被有灰白色菌丝。断面白色或黄白色，质松软。头部有数枚树枝状子座体，子座呈细长圆柱形，分枝或不分枝，长 26 cm，直径 0.10.4 cm。具有多数细小点状突起，顶端稍膨大，灰褐色或灰白色，质脆易断。气微，味淡。其外观形态见附录 A。4.2鉴别4.2.1显微鉴别全国团体标准信息平台T/JAASS 50-20222金蝉花粉末为黄棕色或黄白色。菌丝管状，分隔，壁光滑，无色透明，直径2.03.0 m，多弯曲成团，少数平行成束密集排列；气管壁组织呈不规则碎块状，白色，可见整齐条状增厚壁，排列成栅栏状；刚毛黄棕色或黄白色，呈细刺状，多已断裂；体壁碎片黄色或黄棕色，其上着生短粗刚毛，先端锐尖或钝圆，常可见刚毛脱落后形成的圆形毛窝；少数散落的油滴，无色。其显微特征见附录B。4.2.2薄层鉴别取金蝉花粉末 0.5 g，加甲醇 10 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液浓缩至 1 mL，作为供试品溶液。另取麦角甾醇对照品适量，加甲醇制成 4 mg/mL 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2020 年版中国药典四部通则 0502 试验，吸取上述两种溶液各 5 L，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油醚（6090）-乙酸乙酯-甲酸（5：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105加热至斑点显色清晰，分别在日光和紫外光灯（365 nm）下检视。金蝉花供试品色谱中，在与麦角甾醇对照品色谱相应的位置上，日光下和紫外光下（365nm）显相同颜色的荧光斑点。其薄层色谱特征见附录 C。4.3理化指标金蝉花的理化指标应符合表1的要求。表 1 理化指标项目指标水分/%9.00总灰分/%10.00酸不溶性灰分/%5.00水溶性浸出物/%30.004.4含量要求按干燥品计算，金蝉花的核苷类总量、麦角甾醇及甘露醇含量应符合表2的要求。表 2 含量要求项目指标核苷类总量a/%0.20麦角甾醇（C28H44O）/%0.02甘露醇（C6H14O6）/%5.00a：核苷类包括腺嘌呤（C5H5N5）、尿苷（C9H12N2O6）、肌苷（C10H12N4O5）、鸟苷（C10H13N5O5）、腺苷（C10H13N5O4）、N6-(2-羟乙基)腺苷（C12H17N5O5）。5检验方法5.1薄层鉴别按2020年版中国药典四部通则0502薄层色谱法的规定进行。5.2水分按2020年版中国药典四部通则0832水分测定法第二法（烘干法）的规定进行。全国团体标准信息平台T/JAASS 50-202235.3总灰分按2020年版中国药典四部通则2302灰分测定法中总灰分测定法的规定进行。5.4酸不溶性灰分按2020年版中国药典四部通则2302灰分测定法中酸不溶性灰分测定法的规定进行。5.5水溶性浸出物按2020年版 中国药典 四部通则2201浸出物测定法中水溶性浸出物测定法项下热浸法的规定进行。5.6核苷类成分按2020年版中国药典四部通则0512高效液相色谱法测定，具体方法参照附录D。5.7麦角甾醇按2020年版中国药典四部通则0512高效液相色谱法测定，具体方法参照附录E。5.8甘露醇按2020年版中国药典四部通则0401紫外-可见分光光度法测定，具体方法参照附录F。6标签、包装、运输、贮藏6.1标签销售的产品应具有质量合格证并注明厂名、厂址、产品名称、批号、净含量、生产日期、产品保质期、执行标准编号和必要的使用说明及注意事项。储运图示的标准应符合GB/T 191的有关规定。6.2包装6.2.1 包装按SB/T 11182要求执行。6.2.2 追溯通用标识按SB/T 11039要求执行。6.3运输运输时，车厢或其它运输工具应保持清洁、干燥，无外来气味和污染物。6.4贮藏产品应贮存在阴凉通风干燥处，不得与有毒有害、有异味的物品混贮。仓库要保持干燥、通风、防潮湿、防霉烂、防鼠虫害、防变质，避免阳光直射。对仓库要定期进行检查，如发现有虫害或霉变现象，应及时处理。7保质期符合上述运输、贮藏条件下，本产品保质期为24个月。全国团体标准信息平台T/JAASS 50-20224附 录 A（资料性附录）金蝉花外观形态图图 A 金蝉花外观形态图全国团体标准信息平台T/JAASS 50-20225附录 B（资料性附录）金蝉花显微特征图357124681.菌丝团；2.菌丝；3.气管壁组织；4.刚毛；5.体壁碎片；6.短刚毛；7.毛窝；8.油滴图 B.1 金蝉花粉末显微特征图（1040）1.短刚毛；2.刺状毛图 B.2 金蝉花表面显微特征图（1040）全国团体标准信息平台T/JAASS 50-20226附录 C（资料性附录）金蝉花中麦角甾醇薄层色谱图1、17.麦角甾醇对照品；216.样品图 C.1 日光下的金蝉花麦角甾醇薄层色谱图1、17.麦角甾醇对照品；216.样品图 C.2 紫外光下的金蝉花麦角甾醇薄层色谱图全国团体标准信息平台T/JAASS 50-20227附录 D（规范性附录）金蝉花中 6 种核苷类成分含量的测定D.1方法概述试样经预处理后进行高效液相色谱测定，以保留时间进行定性，外标法定量。D.2仪器D.2.1 高效液相色谱仪。D.2.2 分析天平：感量0.1 mg。D.2.3 超声波清洗机：300W，40kHz。D.2.4 容量瓶：10 mL。D.3试剂材料与溶液除非另有规定，所有试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682中规定的二级水要求，色谱用水符合GB/T 6682中规定的一级水要求。D.3.1 甲醇：色谱纯。D.3.2 腺嘌呤（C5H5N5，CAS：73-24-5）：纯度98%。D.3.3 尿苷（C9H12N2O6，CAS：58-96-8）：纯度98%。D.3.4 肌苷（C10H12N4O5，CAS：58-63-9）：纯度98%。D.3.5 鸟苷（C10H13N5O5，CAS：118-00-3）：纯度98%。D.3.6 腺苷（C10H13N5O4，CAS：58-61-7）：纯度98%。D.3.7N6-(2-羟乙基)腺苷（C12H17N5O5，CAS：4338-48-1）：纯度98%。D.3.8 有机滤膜：0.45 m。D.3.9 混合标准品溶液：腺嘌呤0.12 mg/mL、尿苷1.57 mg/mL、肌苷0.43 mg/mL、鸟苷0.81 mg/mL、腺苷0.92 mg/mL和N6-（2-羟乙基）腺苷0.69 mg/mL。分别称取腺嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和N6-（2-羟乙基）腺苷标准品1.21 mg、15.7 mg、4.3 mg、8.1 mg、9.2 mg、6.9 mg，置于10 mL容量瓶中，加超纯水定容至刻度，溶解摇匀。得混合标准品溶液。D.4分析步骤D.4.1 供试品溶液的制备称取金蝉花药材粉末（过三号筛）约 0.5 g，置具塞锥形瓶中，加入超纯水 5 mL，密塞，摇匀，超声提取 30 min（20以下），过滤，残渣同法再次超声提取 1 次，合并上清液，摇匀，并定容至 10 mL，全国团体标准信息平台T/JAASS 50-20228过滤膜，取滤液供色谱测定。D.4.2 液相色谱参考条件a)色谱柱：反相色谱柱 C18（250 mm4.6 mm，5 m），ODS3 预柱（10 mm4.6 mm，5 m）或相当者；b)流动相：甲醇（A）-水（B）；c)流动相洗脱梯度：04 min,100%B;415 min,5%A,95%B;1520 min,10%A,90%B;2030 min,15%A,85%B;3035 min,20%A,80%B;3540 min,20%A,80%B；d)柱温：25；e)流速：1.0 mL/min；f)进样量：10 L；g)紫外检测波长：260 nm。D.4.3标准曲线与线性关系分别精密吸取以上方法制备的混合标准品溶液 0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL，置于 1mL量瓶中，加超纯水稀释至刻度，按 D.4.2 条件进样。记录 5 份溶液中 6 种核苷类成分色谱峰的峰面积。以待测成分质量浓度为横坐标，其峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。注：R0.999D.4.4样品测定按 D.4.1 要求制备金蝉花样品溶液，以制备标准曲线同样条件进样，根据色谱峰保留时间进行定性，以外标峰面积法进行定量。供试品溶液中各核苷类成分的响应值在标准曲线范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。D.4.5结果计算根据待测样品色谱峰面积，由标准曲线回归方程式，按干燥品计算样品中单个核苷类成分的含量。金蝉花中 6 种核苷类成分的含量分别按式（D.4.5.1）计算，6 种核苷类成分的总量按式（D.4.5.2）计算：全国团体标准信息平台T/JAASS 50-20229=cVm（D.4.5.1）=1+2+3+4+5+6 106 100%（D.4.5.2）式中：Xi金蝉花中单个核苷类成分的含量，单位为微克每克（g/g）；c进样液中腺嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷或 N6-（2-羟乙基）腺苷的浓度（g/mL）；m金蝉花样品的取样量，单位为克（g）；V样品的定容体积，单位为毫升（mL）；X1,X2,X3,X4,X5,X6金蝉花中腺嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷或 N6-（2-羟乙基）腺苷的含量，单位为微克每克（g/g）；X金蝉花中 6 种核苷类成分的总量，单位为%。D.4.6精密度D.4.6.1 重复性：在重复条件下获得的两次独立测定结果的相对平均偏差应不超过 3%。D.4.6.2 再现性：在再现性条件下获得的两次独立测定结果的相对平均偏差应不超过 6%。全国