ICS11.220CCSB41T/CVMA87—2021非洲猪瘟病毒与猪圆环病毒2型双重荧光PCR检测方法DuplexFluorescencePCRmethodforthedetectionofAfricanSwineFeverVirusandPorcineCircovirus22021-12-23发布2021-12-23实施中国兽医协会发布团体标准中国兽医协会CVMA中国兽医协会CVMAT/CVMA87—2021I前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国兽医协会提出并归口。本文件起草单位：湖南冠牧生物科技有限公司、上海市动物疫病预防控制中心、辽宁省动物疫病预防控制中心、丰城市农业农村局、榆林市农业宣传信息中心、中国动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：杨忠苹、赵和平、杨德全、兰德松、杨洺扬、张健、周光斌、白艳艳、刘林青、廖娟红。中国兽医协会CVMA中国兽医协会CVMAT/CVMA87—20211非洲猪瘟病毒与猪圆环病毒2型双重荧光PCR检测方法1范围本文件规定了非洲猪瘟病毒与猪圆环病毒2型双重荧光PCR检测方法的试剂材料、仪器设备、样品的采集与处理、操作方法和结果判定等。本文件适用于猪口鼻拭子、血清、全血、组织和环境等样品中非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的核酸检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18648—2020非洲猪瘟诊断技术GB19489实验室生物安全通用要求3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4缩略语下列缩略语适用于本文件。PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）ASFV：非洲猪瘟病毒（africanswinefevervirus）BHQ：无荧光淬灭基团（blackholequencher）Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环数（cyclethreshold）DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）FAM：6-羧基荧光素（6-carboxyfluorescein）PCV2：猪圆环病毒2型（porcinecircovirus2）ROX：羧基-X-罗丹明（carboxy-X-rhodamine）5试剂和材料5.1试剂5.1.1除非另有说明，所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682的要求。5.1.2TEBuffer(pH8.0)配制方法按附录A中A.1。5.1.3阳性对照、阴性对照见附录A中A.2和A.3，其中阳性对照质粒序列见附录B。5.1.4PCRAssayKit（包含2×PCR...
