细菌室日常工作.ppt

细菌室 东台市人民医院检验科 赵建春 细菌室日常工作 一、接收，接种细菌室标本 二、培养，分析，鉴定病原菌（致病菌）三、抗酸杆菌工作（略）四、培养基制备 五、医院感染，质量控制 接收，接种标本 细菌室常见标本：痰标本、尿标本、血培养标本、粪便、咽拭子、胸腹水标本、纤支刷片（抗酸）、脑脊液、分泌物、支原体药敏 注意事项 标本拒收的原则标本拒收的原则 错误标签 标本泄露，标本明显被污染 拭子上的标签干掉或者标本量不够 标本不适合所要求的试验 运送标本的时间过长或所用运送培养基不合适 目前细菌室标本质量问题 中段尿，痰污染问题 标本放置时间过长问题（血培养）无价值的粪便、痰标本 标本污染（尿液）尽量避免或减少尿道口正常菌群干扰。清洁中段尿、导尿导管尿、经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液，送检标本以晨起第一次尿液为佳 尿量不宜太多，试管塞子与尿液不应直接接触 留取导尿管尿要排空导尿管内陈旧尿液，倘留置尿管超过三天应避免采用。标本采集后立即送检，不能立即送检者，可暂存4冰箱，但保存不超过8h 血培养瓶放置时间过长的影响 全自动血液细菌培养仪检测原理：全自动连续检测培养瓶内微生物代谢引起的CO2浓度变化，而CO2浓度的改变可直接激活培养瓶底部包埋的对CO2浓度变化高度敏感的荧光物质，在二极管的激发下荧光物质释放荧光，荧光强度变化可直接反应培养瓶内CO2浓度变化。以判定是否有微生物生长繁殖，仪器每十分钟自动进行质控校正，由电脑分析判断细菌培养阴阳性，阳性者发出警报。培养瓶有标准及含树脂（有吸附抗生素作用）的需氧、厌氧瓶、儿童瓶。简单点来说就是培养瓶底部的荧光传感器受细菌产生的代谢物质激发产生荧光，荧光强度随着细菌数量的增加而不断增强。系统根据荧光变化趋势判断有无微生物生长。血培养瓶放置时间过长的影响 细菌生长曲线（Bacterial growth curve）是专指单细胞微生物的。它是将少量的单细胞微生物接种纯种到一定容积的液体培养基后，在适宜的条件下培养，定时取样测定细胞数量。以细胞增长数目的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，绘制一条如图所示的曲线，我们称这条曲线为细菌的生长曲线 血培养瓶放置时间过长的影响 如图，细菌在稳定期和衰亡期细菌的数目增长减慢趋于平缓甚至在衰亡期时反而会降低，此时培养瓶放入培养仪会出现假阴性！无价值的粪便、痰标本 应在发病早期并且尽量在用抗生素治疗前采集，稀便不少于1ml，固体便不少于1克，无便患者可用直肠拭子采集标本。要挑取含脓、黏液、血等病理改变或水样粪便送检。直肠拭子采样量要足够，拭子上肉眼应可见粪便。注意事项：（1）虽然粪便标本本身含很多细菌但也要用无菌容器。（2）注意挑取脓血便或粘液便做培养（3）要进行分区划线。外观为脓痰、粘液、血，涂片镜检25个WBC/LP 为合格标本。常用的培养基种类和用途 血平板普通细菌用 巧克力平板含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、脑膜炎球菌和淋球菌用 麦康凯平板G-杆菌用 沙保罗平板真菌培养用 SS平板沙门氏菌和志贺氏菌用 M-H平板细菌药敏用 TCBS平板弧菌科细菌用 真菌显色平板真菌培养用 罗氏培养基分枝杆菌用 标本接种以及相应平板 标本类型 培养基 痰 血平板、麦康凯平板、沙保罗平板 中段尿 血平板、麦康凯平板 脑脊液 血平板、巧克力平板、麦康凯平板 穿刺液 血平板、麦康凯平板、巧克力平板 咽拭子 血平板、巧克力平板、麦康凯平板 血培养阳性 血平板、麦康凯平板 粪便标本 SS平板、血平板 病灶分泌物 血平板、巧克力平板、麦康凯平 板 注意事项 接种环使用前后均应灭菌，以免造成环境污染及交叉污染。生理盐水和棉签均应灭菌处理防止污染标本。接种标本时应待接种环冷却后进行，以免将细菌烫死从而造成假阴性结果。四区划线时应轻柔，不破坏平板；线条应疏密合适，从而更好分离出单个菌落。基本原则：无菌操作和尽量减少中间环节。、细菌鉴定的基本步骤 1.标本的分离培养（这关系到整个结果的可靠性）2.培养结果的观察（致病菌的选择）3.细菌的分纯、鉴定（MicroScan自动微生物鉴定及药敏分析系统）细菌鉴定的基本步骤 观察培养基中生长的菌落特点：菌落的大小，是否光滑，菌落边缘是否整齐，菌落的颜色如无色似水滴状、白色、灰色、黄色、以及色泽的深浅，是否透光及透光的强弱，菌落产生光泽，等等；菌落产生的溶血环的情况溶血、溶血、水溶性溶血、脂溶性溶血和其他的溶血特点；细菌产生的气味如铜绿假单胞菌的“生姜”味，酵母菌的酵母味，芳香黄杆菌的水果糖芳香味等等。细菌鉴定的基本步骤 培养结果的观察（致病菌的选择）观察培养基上是否有细菌生长 观察生长情况（是单一种细菌还是多种细菌）观察生长的细菌是否具有某些典型特征 排除污染细菌 对于无菌部位所采集的标本（CSF、胸水、腹水、关节液、血液、骨髓、各器官穿刺液等等），只要培养出细菌（排除污染）一律都视为致病菌。对于有菌部位或易被正常菌群污染的标本，培养出细菌后，要根据标本的不同，排除正常菌群后，再挑选致病菌 细菌鉴定的基本步骤 涂片染色(革兰染色）革兰染色：革兰染色可以反映微生物种类和类别，方便描述物种的形态或结构。用此染色法可将绝大部分细菌分为两大类,这样可将致病菌的范围缩小,然后再进一步鉴定。如:金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等 属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等 属革兰氏阴性。细菌鉴定及药敏报告注意事项 要根据细菌基本情况来判断仪器所报结果 要根据细菌耐药机制来报告药敏结果不能全然相信仪器如：天然耐药；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；“D”试验阳性等 培养基制作的一般流程 称量溶化、融化灭菌倒平板保存