ICS65.020.20B38团体标准T/SAIA005—2021绵羊痘和山羊痘荧光PCR检测方法Real-timePCRmethodfordetectionofsheeppoxandgoatpox2021-12-20发布2021-12-20实施山东省农业产业化促进会发布全国团体标准信息平台T/SAIA005—2021前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则起草。本文件由山东省农业产业化标准委员会提出并归口。本文件起草单位：山东省滨州畜牧兽医研究院、山东绿都生物科技有限公司、滨州市农业技术推广中心、日照市东港区动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：王金良、沈志强、唐娜、孟卫芹、高青华、魏凤、刘通、许崇友、董林、于新友、陈金龙、姚春阳、陈士运、李振伟。全国团体标准信息平台T/SAIA005—2021绵羊痘和山羊痘荧光PCR检测方法1范围本文件规定了绵羊痘和山羊痘荧光PCR检测的操作方法。本文件适用于绵羊痘和山羊痘核酸检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3术语和定义下列缩略语适用于本文件。Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环数（CycleThreshold）PBS：磷酸盐缓冲溶液（PhosphateBufferSolution）荧光PCR：荧光聚合酶链式反应（Real-timePolymeraseChainReaction）DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）4仪器设备4.1二级生物安全柜。4.2荧光PCR检测仪。4.3高速冷冻离心机：可控温至4℃，离心速度可达13000×g以上。4.4普通冰箱：冷藏2℃～8℃、冷冻－20℃。4.5超低温冰箱：可控温至-70℃以下。4.6变速组织研磨器。4.7单通道微量移液器：量程分别为0.5μL～10μL、20μL～200μL、100μL～1000μL。4.8电子天平：精度为0.01g。4.9涡旋振荡器。1全国团体标准信息平台T/SAIA005—20214.10高压蒸汽灭菌器。5试剂5.1除非另有说明外，本标准所用检测试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682三级水的标准。5.2无水乙醇：室温放置。5.375%乙醇：配制见附录A.1，室温放置。5.4PBS：配制见附录A.2。5.5引物和TaqMan探针：引物名称和序列见附录B。5.6阳性对照：市售山羊痘活疫苗株。5.7阴性对照：无山羊痘病毒感染的组织。6样品的采集、运输及处理6.1采样注意事项采样及样品...
