DB65T 3810-2015 乳用马分子标记辅助选育技术规程.pdf

DB65/T38102015溶液配制方法参考分子克隆实验指南。5引物序列PRLR 1:5-TTTCATGCGTTATCCAAGCA-3PRLR 2:5-GAAGGGCTTAGTTACGGGAAA-36操作技术规程6.1基因组提取基因组DNA提取等技术均参照分子克隆试验指南。6.2PCR扩增利用PCR仪进行PCR扩增，PCR反应体系为20uL:DNA模板l.OuL,PCR Mixture10 uL,上、下游引物(10pmol/uL)各0.5uL,加双蒸水至20uL。反应条件：94预变性5min;94变性30s,退火温度退火30s,72延伸1min,进入35个循环；72延伸10min后4保存，产物用2%的琼脂糖凝胶电泳检测。取目的片段扩增条带清晰明亮且无杂带的PCR产物进行下一步的鉴定。6.3SSCP检测利用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PC产物，经银染后显色，用凝胶成像仪将凝胶成像。6.4基因判型对比基因型示意图，判定基因型。图1基因型示意图。AB、JAAABABAABBABAB三基因型为AA的为乳用马产奶性能基因(PRLR)纯合体，AB基因型为乳用马产奶性能基因(PRLR)杂合体，BB基因型为乳用马产奶性能基因(PRLR)突变纯合体。6.5标记辅助选择根据基因分型的结果，确定选留个体。周岁个体鉴定时根据家族产奶系谱资料确定选留，出现重大失格、损征不予留用。