DB65T 4074-2017 绵羊体内胚胎生产技术操作规程.pdf

DB65/T40742017b)制定合理的日粮配方；c)满足清洁卫生的饮水需要；d)超排前2个月加强饲养管理，并适量补充维生素A、维生素D、维生素E。5超数排卵及腹腔镜子宫角输精5.1药品所用药品见附录A。5.2超排方法放入海绵栓或CIDR(含孕激素阴道栓)之日，作为发情周期的第0天，在第9天开始注射FSH,每天早、晚各注射1次，中间间隔约12h,连续3d,递减注射。注射第5次FSH时，取出海绵栓或CIDR,并注射0.1mgPG,剂量见附录B。5.3供体绵羊发情鉴定在第6次注射F$H之后，把系好试情布的试情公羊放入供体母羊群，观察供体绵羊发情情况，早晚各试情1次，每次不少于0.5h。以母羊站立接受试情公羊爬跨作为发情标准，做好发情记录，发情母羊肌肉注射LH200IU。5.4重复超数排卵重复超排处理间隔时间为30d60d,方法见第5.2、5.3节。5.5腹腔镜深部输精5.5.1对种公羊的要求系谱清楚，检疫合格，遗传性能稳定，生产性能优良，精液品质好。采集的精液，根据精子密度和活力，按照131：5进行稀释。5.5.2腹腔镜子宫角输精所需器材腹腔镜子宫角输精器材见附录A。5.5.3输精前供体母羊的准备地万标发情时即禁饮禁食，发情14h18h,按下列要求进行腹腔镜子宫角输精：a)麻醉及保定：根据绵羊体重，肌肉注射静松灵0.3mL0.5mL,使其在手术架上仰卧，四肢用绳索保定；b)使用肥皂水湿润手术部位的羊毛，刮毛刀刮去羊毛，并用水清洗干净；c)用2%4%碘酊消毒手术部位，并停留2min5min;d)用75%酒精对手术部位脱碘、晾干；、服务平e)在距离乳房前端2cm、腹中线大约6cm的左侧或右侧位置，分别用手术刀片切开5mm左右的小口，左侧用腹腔镜穿刺器插入腹腔，抽出内芯，插入腹腔镜镜头；右侧腹腔镜穿刺器穿透腹腔内膜厚，取出穿刺器，手术钳从孔内插入，与左侧腹腔镜镜头配合，当观察到子宫角后，换输精枪进入，在子宫角大弯处扎针，确保针尖进入子宫腔内，每侧输入有效精子数不少于1x10个。2DB65/T4074-20176绵羊手术冲胚及胚胎质量鉴定6.1手术冲胚步骤6.1.1术前准备手术冲胚所需器材和药品见附录A。按附录C做好采胚记录。6.1.2供体羊手术手术部位在距离乳房前端2cm、腹中线大约6cm的左侧或右侧位置，尽量避开血管。a)距手术24h,禁饮禁食；b)前期手术准备见5.5.3；c)避开可见血管，用灭菌的手术刀将手术部位纵向切开3cm5cm的刀口，将皮下结缔组织分离，暴露肌膜。若毛细血管出血，用止血钳夹住止血，若大血管出血，需用缝合线将血管结扎处理；)用手术刀将腹部肌膜轻轻切开小口，暴露肌肉层，再用刀柄后端将肌肉层和腹膜钝性分离：)食指和中指从刀口进入，在骨盆腔，耻骨前沿触摸子宫角，并将子宫角、卵巢引出刀口外，记录两侧卵巢黄体数和大卵泡数。6.1.3输卵管冲胚法在超排绵羊发情后60h72h从输卵管采集28细胞期胚胎。将去掉头皮针头的塑料细管前端从输卵管伞部插入2cm3cm,用拇指与食指扭住，另一端放入60mm培养皿中。用事先抽取8mL冲胚液的10L注射器与带针的头皮针相连，从子宫角端向输卵管方向把冲胚液缓缓推出，每侧使用冲胚液4mL。6.1.4子宫角冲胚法在超排母羊发情后6d7d,从子宫角采集胚胎，一般发育期为桑椹胚至扩张囊胚阶段。用18针头在子宫体基部扎1小孔，然后将冲胚管从此孔导入子宫角大弯处，使用塑料注射器给冲胚管气囊充气（充气量2mL5mL),冲胚管的另一头放入集卵杯中。在宫管连接部用头皮针向子宫体方向扎入，用50mL注射器与头皮针细端相连，把冲胚液注入子宫腔，每侧子宫角约40L,最后打入空气，尽量使冲胚液全部回收至集卵杯内。另一侧子宫角冲胚方法同上。推注冲胚液时，应根据子宫体的紧张程度和出液情况，随时调整推液速度。6.1.5手术缝合冲胚完毕后，用30生理盐水冲洗子宫和卵巢上的血迹，并用油剂肯霉素涂抹，将其复位。按常规手术方法，采用两层缝合法进行缝合。即腹膜与肌肉进行缝合，皮肤进行结节缝合，针脚间距1cm。在肌肉和皮肤间撒适量磺胺结晶粉，缝合后在伤口周围喷涂1层碘酊，以防伤口感染。6.2捡胚与质量鉴定6.2.1捡胚服务平将集卵杯置于带有恒温加热台的体式显微镜上，使用吸卵管在35左右的温度下捡出胚胎，移入装有胚胎保存液的四孔板中，再盖上盖板，用记号笔标记品种、供体号、胚胎数量等级等。6.2.2胚胎鉴定3