DB44T 2284-2021 互叶白千层组培育苗技术规程.pdf

ICS 65.020.40 CCS B 61 44 广东省地方标准 DB44/T 22842021 互叶白千层组培育苗技术规程 Code of practice on Melaleuca alternifolia propagation via tissue culture 2021-03-06 发布 2021-06-06 实施 广东省市场监督管理局 发 布 DB44/T 22842021 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由广东省林业局提出、归口并组织实施。本文件起草单位：广东省林业科学研究院、广东尚善环境建设有限公司、广东森霖造绿有限公司。本文件主要起草人：张谦、周丽华、汪迎利、何波祥、连辉明、蔡燕灵、白青松、谢佩吾、梁东成、侯晨、尧俊、陈春如、林什全、邱文霞、陈一群、蓝燕群。DB44/T 22842021 1 互叶白千层组培育苗技术规程 1 范围 本文件规定了互叶白千层（Melaleuca alternifolia(Maiden&Betche)Cheel）组织培养育苗技术的外植体、接种、瓶苗移植、苗木管理、苗木出圃和档案管理等技术要求。本文件适用于互叶白千层组织培养育苗。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6001 育苗技术规程 GB/T 26514 互叶白千层（精）油，松油烯-4-醇型茶树（精）油 LY/T 1000 容器育苗技术 LY/T 1770 桉树无性系组培快繁技术规程 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 DB44/T 1142 互叶白千层栽培技术规程 DB44/T 1914 枫香组培育苗技术规程 3 术语和定义 LY/T 1770和LY/T 1882界定的术语和定义适用于本文件。4 外植体 材料采集 选取符合GB/T 26514给定的精油质量标准的无性系中健壮、无病虫害的单株。在连续3 d晴好天气后，采集嫩枝作为外植体材料。消毒 采用超声波清洗仪，用0.2%灭菌净处理外植体10 min15 min，并用无菌水清洗6次；再在无菌条件下，用每100 ml添加1滴（0.05 ml）吐温-80的70%酒精溶液浸没外植体材料，轻微摇动3 min5 min后，用无菌水冲洗6次。5 瓶苗培育 培养基 DB44/T 22842021 2 采用改良DCR和MS为基本培养基，添加不同的激素，分别配置初代培养基、增殖培养基和生根培养基，培养基用HCl调整pH值为5.8。培养基配方参照附录A执行。培养条件 培养温度25 C30 C，相对湿度65%70%，光照强度1500 lx3000 lx，每天光照时间12 h16 h。及时清除污染材料。初代培养 在无菌环境下，将消毒好的外植体切成2.0 cm2.5 cm长的带芽茎段，接种在初代培养基中，每瓶接种1段；培养6 d15 d，诱导出芽。增殖培养 在无菌环境下，切割初代或继代培养诱导的幼芽或丛生芽，切割成每丛3个4个小芽丛，按250 ml培养瓶接种6丛8丛芽的方式转接至增殖培养基中，培养15 d25 d；外殖体培养时间超过3 a，或继代培养36代40代后，更新培养材料。生根培养 切割长1.5 cm2.0 cm的继代培养芽，转移至生根培养基中培养7 d10 d，诱导生根。6 瓶苗移植 炼苗 在培养室生根培养7 d10 d后，转移至遮光度为70%的大棚内炼苗25 d35 d。移植 6.2.1 芽苗出瓶 炼苗室芽苗平均高达3 cm以上时，将瓶苗和培养基同时倒出，用清水洗净培养基，保持幼根完整，不受损伤。选择根系发达、植株挺立、生长健壮的芽苗备用。6.2.2 容器与基质 以4 cm 10 cm的营养袋作容器时，黄心土为基质；以28孔（4 cm 10 cm）育苗穴盘作容器时，泥炭土、珍珠岩、椰糠和枯枝落叶腐熟质按60：25：10：5比例混合均匀作基质。基质填充入育苗容器中备用。芽苗定植前2 d，用0.5 g/L的多菌灵溶液淋透育苗基质，消毒完全。6.2.3 芽苗移植 将备用的芽苗移植到准备好的容器中，保持根系舒展。7 苗木管理 湿度与光照 移植后3 w4 w内，保持基质持水率在60%80%，遮光度在70%80%；之后揭去遮荫设施，保持基质持水率。DB44/T 22842021 3 施肥 待小苗长出新叶后，用含1浓度氮磷钾的复合肥水溶液喷施，每2 w喷1次；移植4 w后，用3浓度氮磷钾的复合肥水溶液喷施，每2 w喷1次。病菌控制 用多菌灵1000倍液、甲基托布津1000倍液和百菌清800倍液交替喷洒苗木，移苗当天1次，以后每2 w喷1次，共施2次3次。8 苗木出圃 检疫 检疫宜在苗圃进行，由植物检疫部门完成，并签发检疫合格证后方可出圃。检验 采取随机抽样方法检验，1000株以下按10%比例抽样检验；1000株以上的，先完成1000株10%抽样检验，再对超出1000株部分按2%比例抽样检验。苗木质量 出圃前应进行苗木调查和分级，生长正常、无病虫害、无机械损伤、主干粗壮的为合格苗；苗木高35 cm以上、地径0.45 cm以上的为级苗；苗木高25 cm35 cm、地径0.35 cm0.45 cm的为级苗。出圃 选择级苗以上苗木，出圃造林。9 档案管理 按照GB/T 6001和LY/T 1770的要求执行。DB44/T 22842021 4 A A 附录A （资料性）互叶白千层组织培养的培养基配方 表A.1给出了互叶白千层组织培养中培养基的配方。表A.1 互叶白千层组织培养的培养基配方 培养基成份 初代/增殖培养基（mg/L）生根培养基（mg/L）KNO3 510 950 NH4NO3 600 825 KH2PO4 255 85 Ca(NO3)2 4H2O 834 CaCl2 2H2O 128 220 MgSO4 7H2O 555 185 FeSO4 7H2O 27.8 27.8 Na2-EDTA 37.3 37.3 MnSO4 4H2O 22.3 22.3 ZnSO4 7H2O 8.6 8.6 H3BO3 6.2 6.2 KI 0.83 0.83 Na2MoO4 2H2O 0.25 0.25 CuSO4 5H2O 0.025 0.025 CoCl2 6H2O 0.025 0.025 甘氨酸 2.0 2.0 VB1 0.1 0.1 VB6 0.5 0.5 VB3 0.5 0.5 肌醇 100 100 VC 2 2 L-半胱氨酸 5 5 PVPK30 500 500 蔗糖 30,000 15,000 6-BA 0.52.5 KT 0.52.5 IBA 1.02.0 NAA 0.050.1 0.050.5