DB22T 1830-2013 饮料中4-甲基咪唑的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.050 X 04 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 18302013 饮料中 4-甲基咪唑的测定 高效液相色谱法 Determination of 4-methylimidazole in drinks-HPLC-performance liquid chromatography 2013-05-15 发布 2013-09-01 实施吉林省质量技术监督局 发 布 DB22/T 18302013 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林大学提出。本标准由吉林省卫生厅归口。本标准起草单位：吉林大学。本标准主要起草人：郭娜、孙春燕、时晓磊、张妍、王菲、赵星辰、李文莉。DB22/T 18302013 1 饮料中 4-甲基咪唑的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饮料中4-甲基咪唑的高效液相色谱测定方法。本标准适用于碳酸饮料、果蔬汁饮料、功能饮料、茶类饮料和乳饮料中4-甲基咪唑的高效液相色谱测定方法。本方法检出限为0.3 mg/kg。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。3 原理 饮料中4-甲基咪唑经碳酸钠溶液净化，三氯甲烷-无水乙醇溶液提取，反相C18柱分离，高效液相色谱仪测定，保留时间定性，外标法定量。4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。4.1 碳酸钠。（Na2CO3，497-19-8）4.2 庚烷磺酸钠。（C7H16NaO3S，22767-50-6）4.3 磷酸二氢钾。（KH2PO4，7778-77-0）4.4 无水硫酸钠：使用前 650灼烧 4h 4.5 甲醇：色谱纯。4.6 三氯甲烷：色谱纯。4.7 无水乙醇。4.8 磷酸。4.9 三氯甲烷-无水乙醇溶液（80v：20v)：移取 80 mL 的三氯甲烷及 20 mL 的无水乙醇混合均匀备用。碳酸钠溶液（100 g/L)：准确称取碳酸钠 100 g（精确到 0.1 g）于锥形瓶中，溶解后转移到 1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。DB22/T 18302013 2 4.10 0.05 mol/L 磷酸二氢钾缓冲液：准确称取磷酸二氢钾 6.8 g、庚烷磺酸钠 1 g 于 1000 mL 容量瓶中，加水 900 mL，用磷酸调节 pH 至 3.5，用水定容至 1000 mL。4.11 4-甲基咪唑标准品：纯度99%4.12 4-甲基咪唑标准储备溶液：准确称取 1.0 g 4-甲基咪唑于 1000 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度。4-甲基咪唑含量 1000 mg/L，作为储备溶液。4条件下保存（有效期半年）。4.13-甲基咪唑标准工作溶液：准确吸取 4-甲基咪唑储备溶液 1.00 mL、2.00 mL、10.00 mL 于 100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，浓度分别为 10 mg/L、20 mg/L、100 mg/L。4条件下保存（有效期半年）。4.14 无水硫酸钠柱：直径 2 cm，长 15 cm，底部用脱脂棉塞住，上部放入 10 cm 高的无水硫酸钠。4.15 滤膜：0.22 m，水系。5 仪器 5.1 高效液相色谱仪，带紫外检测器。5.2 旋转蒸发器。5.3 涡旋混合器。5.4 电子天平：感量为 0.1 mg 和 0.1 g。5.5 超声波仪。6 分析步骤 6.1 样品处理 碳酸饮料需超声脱气 30 min。移取 5 mL 样品于 125 mL 分液漏斗中，加 100 g/L 碳酸钠溶液（4.9）5 mL 和三氯甲烷-无水乙醇（4.8）溶液 20 mL，剧烈振摇 5 min。静置分层后，将下层有机相移入另一分液漏斗中，重复上述操作二次，合并有机相，每次用 100 g/L 碳酸钠溶液（4.9）10 mL 洗涤有机相，共 3 次。然后将有机相通过无水硫酸钠柱（4.15）滤入旋转蒸发瓶中，50 浓缩至近干，以流动相溶解残渣并定容至 5 mL，经0.22 m 微孔膜过滤后供 HPLC 分析。6.2 空白试验 除不移取试样外，均按 6.1 进行。6.3 测定 6.3.1 色谱参考条件 色谱参考条件如下：a)色谱柱：C18 柱（4.6 mm250 mm，3.5 m）或其它等效色谱柱。DB22/T 18302013 3 b)流动相：甲醇（4.4）:0.05 mol/L 磷酸二氢钾缓冲液（5v:95v）。c)波长：210 nm。d)流速：1.0 mL/min。e)进样量：20 uL 6.3.2 定性分析 保留时间定性。标准溶液的色谱图见附录A。6.3.3 定量分析 根据标准曲线得回归方程，通过该方程计算得到样品含量。在上述色谱条件下，4-甲基咪唑的参考保留时间为25 min，外标法定量。7 结果计算与表达 按式（1）计算试样中 4-甲基咪唑的含量：10001000=mVcX.(1)式中：X试样中4-甲基咪唑的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c由标准曲线上查得进样液中4-甲基咪唑的量，单位为微克每毫升（g/mL）；V试样稀释液总体积，单位为毫升（mL）；m试样质量，单位为克（g）；注：计算结果应扣除空白值。8 精密度 8.1 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。8.2 在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15%。DB22/T 18302013 4 A A 附 录 A（资料性附录）-甲基咪唑标准品色谱图 A.1-甲基咪唑标准品色谱图 图A.1 4-甲基咪唑标准品色谱图（50 mg/kg）_