DB44T 1411-2014 J亚群禽白血病病毒LAMP检测规程.pdf

分类号案卷号件号1CS07.080G4A1122B41备案号：44781-2015DB44广东省地方标准DB44/T1411-2014J亚群禽白血病病毒LAMP检测规程The LAMP detection of subgroup J avian leukosis virus地方标准信息服务平台2014-08-18发布2014-11-18实施广东省质量技术监督局发布1DB44/T1411-2014前言本标准按GB/T1.1-2009的规则进行编写。本标准的附录A为资料性附录。本标准由广东省农业厅提出并归口。本标准起草单位：华南农业大学兽医学院。本标准主要起草人：曹伟胜、罗开健、樊惠英、徐成刚、廖明。本标准首次发布。地方标准信息服务平台12DB44/T1411-2014J亚群禽白血病病毒LAMP检测规程1范围本标准规定了J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的环介导等温扩增试验(LAMP)检测规程，适用于J亚群禽白血病病毒的快速检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的用文件其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。GB/T26436-2010腐白血病诊断技术。3术语和定义GB/T264362010确定的以及下列术语和定义适用于本标准。3.1环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是指一种新型的核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在链置换D八A聚合酶(Bst DNA polymerase)的作用下，60C一65恒温扩增，经15min60mdn即可实现1010倍的靶核酸扩增具有操作简单、特异性强、产物易检测等特点。3.2特异性引物(pr imer是指针对特定模板D基因片段设计的一小段与DNA片段互补的人工合成寡核苷酸。4J亚群禽白血病病毒的LAMP检以下所有试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂：水为符会GB/T6682规定的一级水。4.1仪器、材料及试剂4.1,1仪器设备：PCR仪、凝胶电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像管理系统高速台式离心机（离心速度12000r/min以上)、台式离心机或手掌式离心机（离心速度3000r/mi)移液器(0.1L2L,1L10L,10L1004L,100L1000L)、水浴箱、旋涡振荡器。4.1.2材料：0.5mL和1.5mL离心管。4.1.3pH7.40.01mo1/L磷酸盐缓冲溶液(PBS)：称取磷酸氢二钠1.096g、磷酸二氢钠0.316g和氯化钠8.5g,溶解于950mL蒸馏水中，完全溶解后用氢氧化钠或盐酸调pH至7.4，定容至1000mL,灭菌后使用。4.1.4组织裂解液：10mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)；1mmol/L EDTA:0.5%SDS。4.1.5蛋白酶K(10mg/mL):将蛋白酶K1g溶解于灭菌水50mL中，轻轻摇动，直至完全溶解，加灭菌3