DB21T 2827.7-2017 畜禽疫病防治与净化技术规范 第7部分：鹅血清HA-HI抗体检测技术规范.pdf

DB21/T2827.7-2017前言标准畜禽疫病防治与净化技术规范按照GB/T1.1-2009给出的规则起草，分为七个部分：猪繁殖与呼吸综合征美洲经典株与变异株病毒TPCR鉴别检测方法动物炭疽防治技术规范猪伪狂犬病防治技术规范规模猪场蓝耳病免疫净化技术规范鸡白痢平板凝集试验操作技术规范种禽场鸡白痢净化技术规范鹅血清HA-H抗体检测技术规范本部分为标准畜禽疫病防治与净化技术规芯的第了部分本部分由辽宁省动物疫病顶防控制中心提出地淮奔薛树山，张雅为，于泳转峰崔基贤，王竹，何欣，李晓楠，王志国邓文超，关森DB21IIDB21/T2827.7-20173.2.2.2在微量反应板的15孔加入0.025 mlPBS,换吸头。3.2.2.3吸取0.025mL4HUA抗原，加入第一孔，反复抽吸58次，混匀。3.2.2.4从第一孔吸取0.025mL抗原加入第二孔，混匀后吸取0.025mL加入第三孔，如此进行对倍稀释至第4孔，从第四孔吸取0.025mL弃去，换吸头。3.2.2.5每孔再加入0.025 mL PBS。3.2.2.6每孔均加入0.025ml体积分数为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。3.2.2.7震荡混匀，在室温(2025)下静置40min后观察结果，对照孔（第五孔）红细胞将成明显的纽扣状沉到孔底。3.2.2.8结果判定：将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。第一孔和第二孔完全血凝（不流淌），第三孔半流淌，第四孔流淌为回滴结果正确。3.2.3鹅血清的处理3.2.3.1加0.15mL胰酶（配制见附录）溶液于0.3mL血清中，56灭活30min后冷却至室温。3.2.3.2加入0.9mlL0.01mol/L高碘酸钾溶液，混合，室温孵育15min。3.2.3.3加入0.9mL1%丙三醇溶液，混合，室m孵育5mn3.2.3.4加入0.75mL生理盐水，混合4保存名用3.2.4血凝抑制试验3.2.4.1根括HA省地方标准全文公人验结果配制4HUA抗原。3.2.4.2微反板的21山孔加入0025 mL PBS3.2.4.3吸取05处理的鹅血清加入第0.02mL于第二孔，无分准匀后吸0.025mL于第三次稀释至第1L,从第11孔3.2.4.411礼均加入含A混习的抗原液.025mL,3温20一25)静置至少20min。3.2.4.5每孔加入(025mL1%(V/W)的鸡红细胞悬液，轻轻混匀，室温(2025静置至少20min。对照红细胞将呈明显纽扣状沉于孔底。3.3结果判定以完全抑制4个HUA抗原的血清最高稀释倍数作为效价。因为待检鹅血清经过胰酶-高碘酸钾处理后已作10倍稀释，如果血凝抑制有一个孔发生抑制，此时血清的效价即为1：10，判为阳性。4无害化处理将试验产生的废弃物12130min高压处理.2