MycobacteriophagetbovinetsfordetectionDB12ICS11.220B41天津市地方标准DB12/T521—2014牛结核病噬菌体检测技术规范Theechnicaltandardofuberculosisby2014-04-22发布2014-07-20实施天津市质量技术监督局发布DB12/T521—2014I前言本标准的编写符合GB/T1.1-2009的要求。本标准由天津市畜牧兽医局提出。本标准由天津市动物卫生监督所起草。本标准主要起草人：刘子芝、赵勇、李志荣、刘纪艳、尹望中、杨建华、周永燚、王颖、赵晶。本标准于2014年4月发布。DB12/T521—20141牛结核病噬菌体检测技术规范1范围本标准规定了噬菌体生物扩增技术检测牛结核病的定义、设备和仪器、培养基和试剂、检测、结果判定、注意事项。本标准适用于牛结核病的疫病普查、监测和诊断。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T541动物疫病实验室检验采样方法3定义3.1噬菌体Bacteriophage,简称phage噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。3.2噬菌斑plaque在人工培养基上，细菌在噬菌体的作用下裂解形成的圆形斑，称为噬菌斑。4设备和仪器a生物安全柜b离心机（4000r/min）c振荡器d水浴锅（55℃）e恒温培养箱f有盖离心管（50mL）g无菌试管（10mL）h移液管（10mL）i三角瓶（100mL，500mL）j平皿（90mm）k移液器及配套吸头（100μL，1000μL）5培养基和试剂培养基和试剂配制方法见附录A6检测6.1样本的采集2按照NY/T541进行样本采集。6.2样本的处理6.2.1牛乳取牛乳5mL于50mL有盖离心管中，加10mL的3%NaoH溶液；振荡混匀，室温孵育15min；加灭菌完全培养基至30mL，4000r/min离心15min，弃去上清液；再加灭菌完全培养基至30mL，4000r/min离心15min后弃去上清液；加1mL灭菌完全培养基重悬沉淀物，无菌条件下转移至10mL无菌试管中。6.2.2口鼻分泌物取2mL牛口鼻分泌物（或2mL保存液中的牛口鼻分泌物棉拭子样品）于50mL有盖离心管中，处理方法同6.2.1。6.3检测6.3.1阴性对照：吸取1mL灭菌完全培养基于10mL无菌试管中，为“阴性对照”。6.3.2阳性对照：取50μL指示细胞溶液用灭菌完全培养基稀释至1.0×106cfu/mL，取1mL稀释后的溶液于10mL无菌试管中，为“阳性对照”。6.3.3灭菌双蒸水空白对照：灭菌双蒸水处理方法同6.2.1。6.3.4在阳性对照、阴性对照、空白对照及样本...
