DB14T 2332-2021 绵羊腹腔镜输精技术规程.pdf

ICS65.020.30CCS B 4314山西省地方标准DB 14/T 23322021绵羊腹腔镜输精技术规程Technical operation code for sheep laparoscopic insemination2021-11-22 发布2022-01-22 实施山西省市场监督管理局发 布DB 14/T 23322021I目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14输精场所及人员要求.15输精准备.26输精.27输精档案.3附录 A（资料性）腹腔镜输精常用器械（以 100 只母羊标准）.4附录 B（规范性）输精器械、用具的洗涤与消毒.5附录 C（规范性）稀释液的配置.6DB 14/T 23322021II前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由山西省农村农业厅提出并监督实施。本文件由山西省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：山西农业大学本文件主要起草人：石磊、乔利英、刘巧霞、张婷、侯东来、任有蛇、张春香、姚继广、杨子森、张建新、刘建华、郭建文、王军伟、焦忠欣、张记芳，王海瑞。DB 14/T 233220211绵羊腹腔镜输精技术规程1范围本文件规定了绵羊腹腔镜输精技术的术语和定义、输精场所及人员要求、输精准备、输精、输精档案的具体方法和操作程序。本文件适用于绵羊种羊场、繁殖场和规模养羊户的配种员对绵羊进行腹腔镜输精的技术操作。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 20557 山羊冷冻精液YY 0627.1内镜器械NY/T 3186 羊冷冻精液生产技术规程3术语和定义GB 20557和NY/T 3186界定的以及下列术语和定义适用于本文件。腹腔镜输精 laparoscopic insemination借助腹腔镜和专用输精枪将精液直接输入到发情的母羊子宫角使其妊娠的一种人工授精技术。4输精场所及人员要求场所选择应选择与配母羊数量多且相对集中的地方建设人工授精站（点），输精改良范围以距人工授精站（点）半径距离不超过20km为宜。场所应具备的条件4.2.1精液处理室面积8m210m2，要求屋顶、墙壁、地面平整，并安装紫外线灯，室温应保持在20左右。4.2.2输精室地面用0.1%的新洁尔灭溶液或3%5%煤酚皂溶液喷洒消毒，打开紫外线灯消毒30min60min。4.2.3待配母羊棚（圈）面积30m240m2，与输精室相连通。人员要求DB 14/T 233220212输精员为体检合格并能熟练操作腹腔镜的技术人员。输精前手臂清洁、消毒，更换消毒后的工作服并佩戴口罩和无菌乳胶手套。5输精准备5.1.1精液种类新鲜精液、低温保存精液和冷冻精液。5.1.2输精器械输精器械参见附录A，应符合YY 0627.1标准的相关规定。输精器械、用具的洗涤和消毒参见附录B。5.1.3精液准备符合要求的新鲜精液稀释后可直接输精，稀释液配方参见附录C，低温保存的精液需复温至37，细管冷冻精液浸入3840的水浴中解冻15s20s后立即取出，将精液置于10mL的小试管中混匀。5.1.4精液检测新鲜精液的精子活率0.7，低温保存精液精子活率0.5，冷冻精液精子活率0.3。保持有效精子数在5000万个/mL以上。5.1.5发情鉴定用试情法进行发情鉴定。每天早晨和傍晚各进行一次，每次30 min。按试情公羊与母羊的比例以1:20为宜。试情公羊进入母羊群后，发现主动接近公羊并接受公羊爬跨的母羊，鉴定为发情母羊并标记。5.1.6输精母羊的准备母羊在输精前24 h断水断料。手术前将待输精母羊保定于手术架上，使用兽用麻醉药静松灵或鹿眠宝等按推荐剂量注射进行麻醉，然后将母羊乳房前的被毛剃光，用5%的碘伏消毒后用一次性的消毒纸巾擦拭干净；推进输精室并将保定架抬起至45-60。6输精输精时间鉴定发情的母羊在12h24h输精。输精流程6.2.1切口用手术刀尖在母羊腹中线两侧乳房基部的2cm5cm处纵切两个0.5cm左右的切口，切口部位位于母羊乳头前方8cm10cm，刺破皮肤即可，注意避开可见血管。6.2.2穿刺用食指和拇指握住穿刺针与套管针的前段，露出针尖约2cm左右，从切口处分别从两侧斜向刺入穿刺针与套管针。DB 14/T 2332202136.2.3观察子宫和卵巢取出穿刺针，将输精枪和内窥镜分别插入套管，向腹腔内充气5s8s，使腹腔壁与内脏分离。打开光源，利用内窥镜观察母羊子宫，如果观察不到子宫，可借助输精管拨动羊腹腔内的器官和脂肪，保证子宫能够在光源范围内暴露。找到子宫后先观察子宫角及卵巢上的排卵点，有新鲜排卵点的母羊立即输精。6.2.4注入精液将装好精液的输精枪针头以点式快速刺入的手法刺入子宫角上1/3处，慢慢输入精液0.1mL0.15mL，随后拔出针头，找到另一侧子宫角，以同样的方法输入精液，每只母羊输入精液0.2mL0.3mL，如果发情母羊没有排卵点则放弃输精。术后护理输精完成后将母羊放平，按照3万4万单位/kg体重肌注长效青霉素后，在手术部位喷伤口愈合喷剂，用固定卡固定伤口；输精后即可归群，24h内不可采食过多。未输精的母羊也需要进行术后护理。7输精档案输精的羊群要建立输精档案，内容包括母羊编号、发情状况、精液信息、输精时间、妊娠情况和输精员信息等内容，保存时间3年以上。DB 14/T 233220214AA附录A（资料性）腹腔镜输精常用器械（以 100 只母羊标准）名称数量名称数量6-7 mm 穿刺套管1 套10 mL 注射器30 支5-6 mm 内窥镜1 套医用手术推车10 台腹腔镜专用输精枪1 套电冰箱1 台带压力阀小型气泵1 台开膣器5 个6000 K 以上冷光源1 台载玻片2 盒电动剪毛剪2 把盖玻片2 盒带恒温台显微镜1 台中性洗涤剂2 瓶显微镜专用擦镜纸1 本工作服10 套医用凡士林1 瓶记号笔3 支100温度计2 支试情布5 条50 mL 量筒3 个软毛刷1 把100 mL 量筒3 个毛巾5 条75%酒精2 瓶肥皂2 块95%酒精2 瓶玻璃棒2 根无菌口罩3 包恒温箱1 台无菌手套3 包干燥箱1 台消毒纸巾2 包搪瓷盘2 个鞋套2 包镊子2 把羊用保定架10 台水浴锅1 台长效青霉素3 盒电暖气2 台碘伏2 瓶记录本2 本兽用麻醉剂3 盒电子天平1 台生理盐水5 瓶5 mL 移液器2 支22-23 号手术刀片5 包灭菌纱布1 包10 mL 试管3 包蒸馏水2 瓶2 mL 离心管2 包保温瓶1 个DB 14/T 233220215BB附录B（规范性）输精器械、用具的洗涤与消毒B.1器具洗涤B.1.1玻璃器皿玻璃器皿使用前先用自来水清洗，然后在洗涤剂水中用毛刷刷洗或在超声波清洗仪中用洗涤剂水洗涤30min以上。B.2金属器械金属器械在洗涤剂水中刷洗干净。所用器械在每次使用后，将采精、输精及与精液接触的所有器械都要求用洗涤剂彻底清洗干净，再用清水冲洗23次，最后用蒸馏水冲洗一次，并保持清洁、干燥，存放于清洁的柜内。B.3器具消毒B.3.1玻璃器皿的消毒玻璃器皿可包装好后放入高压灭菌器内100灭菌1520min。B.3.2腹腔镜的消毒腹腔镜输精枪和穿刺套管经高压蒸汽消毒，要求消毒温度达到115，维持30min。当连续为数只母羊输精时，每使用完一次，输精器的前端插入到碘伏溶液中浸泡，取出后可直接为另一只母羊输精。使用后的开膣器需洗涤干净消毒后，再用灭菌生理盐水棉球冲洗两次。DB 14/T 233220216CC附录C（规范性）稀释液的配置C.1奶类稀释液将健康母牛或母羊的新鲜乳汁用多层纱布过滤，将过滤后的乳汁经水浴（9095）加热10 min15 min，冷却至至室温，除去奶皮，也可直接购买脱脂纯牛奶，加入青霉素10万20万国际单位/100 mL，充分摇匀后即可应用，暂时不用可放置4保存待用，。C.2柠檬酸钠葡萄糖卵黄稀释液取葡萄糖3g、柠檬酸钠1.4g，EDTA 0.1g加蒸馏水充分溶解后定容至100mL，高温（100）高压（0.1Mpa）灭菌15min20min后，冷却至室温，再加入取上液80mL，加新鲜卵黄20mL，青霉素10万国际单位，漩涡混匀30min以上，4保存备用。C.3生理盐水稀释液0.9%医用生理盐水可以作为稀释液使用