农业部2224号公告-4-2015 饲料中苯丙酸诺龙的测定 高效液相色谱法.pdf

农业部2224号公告一4一20155.8微孔有机滤膜：孔径0.45um。6试样制备按照GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样，按照GB/T20195制备样品，粉碎后过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装人磨口瓶中，备用。7测定步骤7.1提取称取一定量的试样（配合饲料、浓缩饲料和精料补充料5g,预混合饲料2g,精确至0.001g),置于50mL离心管中，加入叔丁基甲醚20mL,加塞，涡旋震荡1min;再超声提取20min,其间充分摇动2次。取出，离心(3500r/min)10min。收集上清液于100mL梨形瓶中。残渣再加人叔丁基甲醚10mL,重复提取1次。合并2次提取液，于45旋转蒸干，准确加人甲醇3.00mL,超声溶解。于一20冰箱中放置60min,离心(10000r/min)5min,上清液过0.45m微孔有机滤膜，上机测定。7.2测定7.2.1液相色谱参考条件色谱柱：C18柱，柱长250mm,内径4.6mm,粒径5m;或性能相当者。柱温：35。流速：l.0mL/min.检测波长：241nm进样量：20L。流动相：A:乙腈，B:水，梯度洗脱条件见表1。表1梯度洗脱程序时间，minA(乙腈)，%B(水)，%07525580201085152085157.2.2测定取适量试样制备液和苯丙酸诺龙标准工作液，做单点或多点校准，以保留时间定性，色谱峰面积定量，外标法计算结果。苯丙酸诺龙标准溶液色谱图参见图A.1。阳性样品需进一步确证。8结果计算与表示8.1结果计算8.1.1单点校准试样中苯丙酸诺龙的含量X,以质量分数表示，单位为毫克每千克(g/kg),按式(1)计算X=AXCXV(1）A,Xm式中：A试样溶液峰面积；A.-标准溶液中苯丙酸诺龙的峰面积；C.标准溶液中苯丙酸诺龙的浓度，单位为微克每毫升(g/L);溶解残渣用甲醇的体积，单位为毫升(mL);2