ICS65.020.01B16DB12天津市地方标准DB12/T1007—2020茄果类蔬菜种苗番茄黄化曲叶病毒检测技术规程Technicalregulationofdetectionfortomatoyellowleafcurlviruscarriedbyseedsandseedlingsofsolanumfruitvegetables2020-12-17发布2021-01-16实施天津市市场监督管理委员会发布DB12/T1007—2020I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。本标准起草单位：天津市植物保护研究所。本标准主要起草人：王勇、高苇、张春祥、杨利娟、刘晓琳、霍建飞、姚玉荣。DB12/T1007—20201茄果类蔬菜种苗番茄黄化曲叶病毒检测技术规程1范围本标准规定了茄果类蔬菜种苗番茄黄化曲叶病毒检测的仪器和试剂、检测程序、结果判定、样品和菌株保存。本标准适用于农业生产中，茄果类蔬菜种苗番茄黄化曲叶病毒的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订版）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1番茄黄化曲叶病毒tomatoyeLLowleafcurlvirus（TYLCV）番茄黄化曲叶病毒属于双生病毒科菜豆金色花叶病毒属病毒，因该属病毒在自然条件下只能由烟粉虱以持久方式传播，又被称为粉虱传双生病毒，是一类具有孪生颗粒形态的植物DNA病毒，广泛分布于热带和亚热带地区，在烟草、番茄、南瓜、木薯、棉花等重要经济作物上造成毁灭性危害。番茄黄化曲叶病毒病基本信息参见附录A。3.2种苗传播病害seedling-bornedisease种苗携带病原菌进行传播的一类植物病害。4仪器和试剂4.1仪器高速离心机、灭菌锅、PCR仪、凝胶成像系统、电泳仪、旋涡振荡器、分析天平（感量1/10000g）。4.2试剂4.2.1总体要求除另有规定外，所有试剂均为分析纯试剂，实验用水符合GB/T6682。4.2.2PBS缓冲液NaCL8.10g、NaH2PO40.18g、Na2HPO41.97g、蒸馏水1000mL，pH7.4。DB12/T1007—202024.2.3商用植物DNA提取试剂盒或DNA提取试剂DNA提取试剂主要有Lysis缓冲液和乙酸钾缓冲液。4.2.4裂解缓冲液100mMTris-HCLpH8.0；50mMEDTA，pH8.0；1%SDS；10μg/mLRNaseA。4.2.5乙酸钾缓冲液乙酸钾缓冲液3.0M，pH5.5。4.2.6凝胶电泳试剂琼脂糖，TAEBuffer，核酸染料GoLdenview。4.2.7PCR试剂MasterMix。5测试程序5.1检测样品应以种子来源、育苗时间和育苗地点等相同的同一品种的种苗为一个种苗批次...
