WST 350-2011 血清葡萄糖测定参考方法.pdf

ICs 11.020C50中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准Ws/T 350-2011血清葡萄糖测定参考方法Re f e r e n c e p r o c e d u r e o f t h e m e a s u r e m e n t o f g l u c o s e i n s e r u m_ 2012-04-01 实 施211L09-30发布中华人民共和国卫生部 发 布Ws/T 350-2011前言 1 范围 12 规范性引用文仵 13 术语和缩略语 14 测定原理 35 测定样品 36 测定试剂 36.1 警示与安全注意事项 36.2 试剂原料 36.3 试剂性能要求46.4 试剂制备 46.5 标准液的制备 67 测定条件 77.1 仪器 77.2 最终反应混合液的浓度107.3 血清葡萄糖测定条件107.4 校准的扩展不确定度118 测定118.1 无蛋 白滤液的制备118.2 试剂准备l l8.3 标准曲线制作118.4 测定方法128.5 测定范围128.6 误差的来源128.7 测定样品要求139 结果计算139.1 标准曲线的制作139.2 样品测定结果的计算139.3 单位换算13附录A(规范性附录)ATP原液浓度测定 14附录B(规范性附录)阡NAD+原液浓度测定 16附录C(规范性附录)己糖激酶原液催化活性测定 18附录D(规范性附录)6-磷酸葡萄糖脱氢酶原液催化活性测定 21次目Ws/T350-2011目 刂 舀本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准制定修改采用 由国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)批准的CDC人血清葡萄糖 己糖激酶参考方法(分光光度法),并参考ISO15193:09体外诊断器具 生物源样品中量的测定 参考测定程序的表述 适 当增加 内容。本标准的附录A、附录B、附录C、附录D为规范性附录。本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。本标准起草单位:北京航天总医院。本标准主要起草人:陈宝荣、邵燕、陈琦、孙慧颖、杨振华。Ws/T350-2011血清葡萄糖测定参考方法1 范 围本标 准规定 了在临床 医学应用 中,测定血清葡萄糖浓 度的参考方 法。本标 准 主要 适用 于参考实验室,作为血清葡 萄糖测定 的溯源,也可作 为与血清葡萄糖检验有关 的仪器 和试剂生产企业 的溯源,可供有关认可单位及质量管理部 门应用。2 规范性 引用文件下列文件对 于本文件 的应用是必不可少 的。凡是注 日期 的引用文 件,仅所 注 日期 的版本 适 用 于本文件。凡是不注 日期 的引用文件,其最新 版本(包括所有 的修 改单)适用 于本 文件。IS015193:09 体外诊 断器 具 生物源样本 中量 的测定 参考测定程序 的表述3 术语和缩 略语3,1 术语 和定义下列术语 和定义适用于本 文件。3.1.1原始样本 p r i m a r y s a m p e最初从一个 系统 中取 出的一个 或几个部分 的集合 物,旨在提供该 系统 的信 息或作 为对该 系统做 出决 定 的基础。注:在 某些情况下,所提供的信息可以适用于一个较大的系统或一组系统,此时取样系统是这些系统的组成部分。3.1.2实验 室样本 l a b o r a t o r y s a m p l e准备送 到实验室或实验室接 收 的用 于测定 的原始样本 或原始样本 的分样本。3.1.3分析样本 a n a l y t i c a l s a m p Ie自实验 室样本制备 的、可从 中取 出分析部分 的样本。注:在 取出分析部分之前,分析样本可经过各种处理。3.1.4哆 卜 溺 厅 砉 阝 分 a n a l y t i c a l p o r t i o n从分析样本 中取 出的用于实际测 定 和观察 的物质部分。注:如 果不需预处理,分析部分直接从原始样本或实验室样本中取出。某些情况下,需将分析部分溶解成分析溶液再上机测定。3.1.5分祠 亍 漯 鼻 攴 a n a y t i c a s o l u t i o n将分 析部分溶解在气体、液体或 固体 中而制备 的溶 液,溶解过程 中可 以有反应发生或无反应发生。Ws/T 350-20113.1,6(某一物质 系统 的)基质 m a t r i x(o f a m a t e r i a 1s y s t e m)一个 物质系统 中除被分析 物 之外 的所有成分。3.1.7参考方 法 r e f e r e n c e m e a s u r e m e n t p r o c e d u r e是在校准或表征标 准物质 时为提供测定结果所采用 的测 定方 法,它适 用 于评 定 由同类量 的其他测定方法获得 的被测定量值 的测 定正确度。3.1.8测定 系统的灵敏度 s e n s i t i v i t y o f a m e a s u r i n g w s t e m简称:灵敏度 敬n s i t Mt y测定 系统 的示值变化 除 以相应 的被测定值变化 所得 的商。注 1:测定系统的灵敏度可能与被测定的量值有关。注2:所考虑的被测定值的变化必须大于测定系统的分辨力。3.1,9分析特异性 a n a y t i Ca l s p e c 二c i t y测定方法 只测定可测定 的量 的能力。3.1.10分析 干扰 a n a l y t i c a l i n t e r Fe r e n c e由一个影 响量引起 的系统测定误 差,该影响量 自身在测定系统 中不产生信号,但它会 引起示值 的增高或 降低。3.1.11影日向垩 i n u e c e q u a 11t i t y被测 定 以外 的可影 响测定结果 的量。3.1.12被测工 m e a s u r a n d拟测定 的量。注1:对被测定的说明要求了解量的种类,以及含有该量的现象、物体或物质状态的描述,包括有关成分及所涉及的化学实体。注2:在M第二版和IEC6005 300:2001中,被测定定义为受到测定的量。注3:测定包括测定系统和实施测定的条件,它可能会改变研究中的现象、物体或物质,使被测定的量可能不同于定义的被测定。在这种情况下,适当的修正是必要的。3.1.13检 出 限 d e t e c t i o n m i t,m i t o f d e t e c t i o n由给定测定方法获得的测得值,其声称的物质成分不存在 的误判概率为,声称物质成分存在的误判概率为。注1:国际理论和应用化学联合会(IUPAC)推荐和卩的默认值为0.05。注2:有 时使用缩写词LOD。注3:不要用术语“灵敏度”表示“检出限”。3.1.14校 准品 c a Ii b r a t o r用 于校准 的测定标 准。3.2 缩略语下 列缩 略语适用 于本 文件。2Ws/T 3502011NAD:氧化型u 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(n i t i n a m i d e a d e n i n e d i n u c l e o t i d e,o x i d 讫 e f o r m)HK:己糖激 酶(h e x b n a s e)ATP:还原 型 阡烟酰胺腺 嘌呤二核苷 酸(n i t i n a m i d e a d e n i n e d i n u c l e o t i d e,r e d u c e d f o r m)G6PDH:葡萄糖-6-磷酸脱氢 酶(g l u s e 6p h o s p h a t e d e h y d r o g e n a s e)IFCC:国际 临 床 化 学 与 检 验 医 学 联 合 会(i n t e r n a t i o n a l f e d e r a t i o n o f d i n i c a l c h e m i s t r y a n dl a b o r a t o r y m e d i c i n e)SOP:标准操作 方法(s t a n 曲r d o p e r a t i o n p r o c e d u r e)4 测 定原理在 己糖激酶催化下,葡萄糖 和ATP发生磷 酸 化 反 应,生成葡 萄糖-6-磷酸与ADP。葡 萄糖-6-磷酸在葡 萄糖-6-磷酸脱氢酶催化 下脱 氢,生成6-磷酸葡 萄糖 酸,同时使NAD(P)还原 成NAD(P)H。反应式如下:D-葡萄糖+ATPMg 卫夂6 磷酸-葡萄糖+(ADPMg)+H6-磷酸-葡萄糖+NAD(P)2旦翌弱磷酸-葡萄糖内酯+NAD(P)H+H+在NAD(P)转化成NAD(P)H的同时,伴有340n m 处摩尔消光系数的上升,摩尔消光系数变化与葡萄糖含量成正比,通过检测339n m 处摩尔消光系数即可测定血清中葡萄糖含量。5 测定样品标准物质、校准品、质控品、血清。6 测定试剂6.1 警示与安全注意事项6.1.1 氢氧化钡:高毒类物质,吸入及接触可引起 中毒,表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻、脉缓、进行性肌麻痹、心律紊乱、血钾明显降低等。接触高温本品溶液可造成皮肤灼伤同时吸收中毒。称量及配制试剂时应进行有效防护,带防护眼镜、橡胶手套,穿隔离服。6.1.2 硫酸锌:对眼睛有 中度刺激性,对皮肤无刺激性,误服可引起急性 胃肠炎,严重可引起休克至死亡,称量及配制试剂时应进行有效防护,带防护眼镜、橡胶手套,穿隔离服。6.1.3 乙酸镁:吸人、摄入或经皮肤吸收后对身体有害。对眼睛、皮肤和黏膜有刺激作用。吸入可致咳嗽、咯痰。误服可引起 胃痛、呕吐、呼吸困难、紫绀、肾脏受累等,称量及配制试剂时应进行有效 防护,带防护眼镜、橡胶手套,穿隔离服。6.1.4 安息香酸:对皮肤有轻度刺激性,蒸汽对呼吸道、眼和皮肤产生剌激,但一般情况下接触无明显危害性,称量及配制试剂时应进行有效防护,带橡胶手套。6.2 试剂原料本方法使用下列试剂。6.2.1 3,3-双(4-羟基苯基)1(3H)-异苯并呋喃酮(酚酞,C2H】404),相对分子质量=318.33。6.2.2 硫酸锌(Zn s o 47H20),相对分子质量=287.56。6.2.3 氢氧化钡EBa(OH)28H2O,相对分子质量=315,46。6.2.4 安息香酸(C6H5Co OH),相对分子质量=122.12。3Ws/T35020116.2.5 2-氨基-2-羟基-1,丙二醇(Tr i s-HCl NH2C(CH20H)3HCl),相对分子质量=157.60。6.2.6 三羟甲基氨基甲烷(Ts-Ba s e)NH2C(CH20H)3,相对分子质量=121.14。6.2.7 醋酸镁E(CH3Co O)2Mg 4H20,相对分子质量=214.45。6.2.8 牛血清 白蛋 白,五级,相对分子质量=68000。6.2.9 5三磷酸腺嘌呤(ATP)EC1H14N5Na 2OI3P33H2O,相对分子质量=551.14。6.2.10 氧化型 阡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(-NADt C21H27N?014P2),相对分子质量=663,43。6.2.11 己糖激酶(h e x k i n a s e,HK),来源于酵母,要求高纯度。6.2.12“磷酸葡萄糖脱氢酶(g l u c o s e 6-p h o s p h a t e d e h 州r o g e n a s e,G6PDH),应来源于肠膜明串珠菌,可以悬浮于硫酸铵溶液或为冻干粉,要求高纯度。6.3 试剂性能要求6.3.1 宜使用最高纯度 的试剂。6.3.2 阡NAD+:阡NAD+原液浓度应0。005m m o l L1,若0。005m m l L1,贝刂 该 来 源 的p-NAD+不能用于测定血清葡萄糖。6.3.3 ATP:ATP原液浓度应)0。005m m o l L1,若(0.005m m o l L1,贝刂 该来源的ATP不能用于测定血清葡萄糖。6.3.4 250m L己糖激酶原液酶总活性至少为1250U。6.3.5 250m L6-磷酸葡萄糖脱氢酶