SNT 1059.1-2002 进出口食品中沙门氏菌 滤膜筛选法.pdf

SN/T1059.1-2002前言本标准是按照GB/T1.1一1993标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定进行编写的。本标准中沙门氏菌滤膜筛选法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化学家协会(AOAC)公定分析方法(1995年第16版17.9.09)样品制备，采用SN0170一1992出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法，并在实验的基础上编写而成。本标准的附录A是标准的附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。本标准首次发布。SN/T1059.1-20024.3培养基和试剂4.3.1蛋白胨-吐温80(PT)稀释液（见附录AA1)。4.3.2四硫磺酸盐肉汤（加碘和煌绿）（见附录AA2)。4.3.3EF-18琼脂（见附录AA3)。4.4样品制备及增菌培养4.4.1如为冷冻产品，应在45C以下不超过15min,或在2C5C不超过18h解冻。若不能及时检验，应置于一15左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于4冰箱保存。4.4,2以无菌操作，称取25g(mL)样品，置于灭菌均质杯内，加入25mLPT稀释液，以800010000r/min均质1min,放人装有200mLPT稀释液的500mL灭菌广口瓶，混合均匀，如pH低于6.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液，调pH至6.8士0.2，放入37水浴培养4h(以增菌液达到37C时算起)，进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐肉汤（加碘和煌绿）的250mL灭菌广口瓶内，摇匀，42C士1C培养20h士2h,进行选释性增菌。4.5过滤和培养将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤腹旅在抽滤底座上，用不锈钢夹子固定。以无菌操作加10mL20L无菌蒸馏水于滤器中，用灭菌吸管取选择性增菌液1mL放人滤器中，打开真空泵抽吸液体。再加入10ml15L无蒸馏水抽取液体，抽干后关闭真空泵，打开底座夹，以无菌镊子取出滤膜，将滤膜移至预先干操好E-18踪脂平板表面上，滤膜与琼脂表面之间应无气泡，在42C士1培养1824h,无菌落生长则为阴性。46典型或可疑菌落的鉴定典型沙门氏菌菌落既不是水滴样叉不是粘液状。一般垒绿色、翡聚绿色或蓝绿色，有时呈蓝色（赖氨酸阳性菌和蔗糖阴性菌)和黄色（赖氨酸阴性菌和蔗糖阳性菌）。从平板上挑选3个典型或可疑菌落，按照SN0170一1992中第4章进行生化和血清学鉴定。5报告结果5.1报告阳性结果：“沙门氏菌检出/25g”。5.2报告阴性结果：“沙门氏菌未检出/25g”。2