SNT 4029-2014 化妆品皮肤过敏试验 局部淋巴结法.pdf

SN/T4029-20144.2.2三氯乙酸(TCA):7.5gTCA溶解于150mL蒸馏水中，4保存。4.2.33H-甲基胸腺嘧啶脱氧核苷(3HTdR):制备活性为7.4e+10Bq/mMol(浓度为1.0mCi/mL即3.7e+7Bq/mL),4保存。4.2.4小鼠溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)检测试剂盒。4.2.5RPM1640培养液。4.3仪器设备4.3.1倒置显微镜。4.3.2全自动酶标仪。4.3.3液闪计数仪。4.4实验动物和饲养环境4.4.1动物种属选择未生育过和未怀孕的成年雌性小鼠(CBA/Ca或CBA/J品系)。试验开始时鼠龄为8周12周（体重约18g22g),体重变异应小于平均体重的20%。选择其他种属或雄性动物时应有充足的证据表明在该试验中，不存在种属和性别的差异。4.4.2动物饲养动物应单笼饲养，实验动物房温度应为22土3，相对湿度应30%70%，最好保持在50%60%之间。应采用人工照明，每天照明12h。采用常规小鼠饮食，不限制饮水。4.4.3动物数量每一剂量组至少应有4只动物，受试物至少设3个剂量组，一个使用溶剂的阴性对照组，还应酌情考虑设立阳性对照组。4.5剂量设计剂量可以从下列浓度系列中选择：100%、50%、25%、10%、5%、2.5%、1%、0.5%等。如果有资料，在选择3个连续剂量时应考虑现有的急性毒性和皮肤刺激性资料，最高剂量组应避免出现系统毒性和剧烈的局部皮肤刺激性。对照组动物除了不给予受试样品外，其余处理方法与试验组完全相同。5试验步骤5.1试验前准备5.1.1将随机选择分组的动物进行标记编号（但不要在耳朵上标记），试验前5d置于饲养笼内饲养以适应实验室环境，并于试验前检查，确保动物无可见的皮肤损伤。5.1.2阳性对照：阳性对照的设立可以验证试验过程完成的合理性，以及实验室成功实施试验的能力。阳性对照应该产生阳性的试验结果，所以在某个剂量水平的染毒后，与阴性对照相比，其刺激指数(SI)的增加应在3倍以上。阳性对照剂量的选择应是能够产生明显但又不过度的致敏诱导作用。首选的阳性物为己基苯乙烯乙醛(CAS号101-86-0)和巯基苯并噻唑(CAS号149-30-4)。根据具体情况，也可以使用符合上述标准的其他阳性对照物。一般每次实验都需要设阳性对照组，但如果同一实验室以往的阳性对照资料显示，在6个月或更长时间内的阳性反应具有良好的一致性，则可最长每6个月进行一次阳性物对照试验。虽然阳性对照物溶解在特定的溶剂（如：丙酮、橄榄油）中产生的实验结果易于一致，2