SNT 4485-2016 进出口口腔清洁类产品中洋葱伯克霍尔德菌检验方法.pdf

SN/T4485-20164.7无菌液体石蜡。4.8赖氨酸脱羧酶试验培养基：见A.6。4.9精氨酸双水解酶培养基：见A.7。4.10碳源利用培养基：见A.8。4.11西蒙氏柠檬酸盐培养基：见A.9。4.12半固体琼脂培养基：见A.10。4.13非发酵菌生化鉴定试剂盒。5检验程序洋葱伯克霍尔德菌检验程序见图1。固体样品（牙育、牙粉）液体样品（激口水、口气清新喷雾）10g+90mL稀释液10mL+90mL稀释液0.45um滤膜过滤10mL稀释液加入90mL改良LETHEEN氏肉汤滤膜投入50mL改良LETHEEN氏肉汤5C1，48h2h洋葱伯克霍尔德菌琼脂35C1C,48h2h染色镜检，过氧化氢酶阳性氧化分解葡萄糖，赖氨酸脱我酶阳性生化鉴定报告图1洋葱伯克霍尔德菌的检验程序6操作步骤6.1样品制备6.1.1固体样品牙膏或牙粉等固体样品，称取10g,加到装有玻璃珠及90mL的SCDLP液体培养基的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15min,作为1：10的稀释液。2SN/T4485-20166.1.2液体样品漱口水或口气清新喷雾等液体样品，吸取10mL,加到含90mL的SCDLP液体培养基的三角瓶中，充分混匀作为1：10的稀释液：用灭菌无齿镊子夹取孔径为0.454m的无菌滤膜边缘，贴放在已灭菌的滤器上，固定，将稀释液倒人滤杯，打开抽滤阀门，负压抽滤；稀释液抽滤完后，关上抽滤阀门，将20 mL SCDLP液体培养基倒入滤杯，再次抽滤作为漂洗，重复操作2次。6.2增菌培养用无菌吸管移取固体样品110样品稀释液10mL,加到90mL改良LETHEEN氏肉汤中，35士1培养48h士2h。用灭菌无齿镊子夹取液体样品抽滤漂洗后的滤膜边缘，放入50mL改良LETHEEN氏肉汤中，35士1（培养48h+2h。6.3分离用3mm接种环挑取培养物，划线接种在洋葱伯克霍尔德菌琼脂，351培养48h士2h,观察菌落形态，洋葱伯克霍尔德菌落呈光滑圆形，鼠尾草绿色，周围培养基呈亮粉色。若菌落较小可再培养24h+1h后进行观察。6.4筛选试验6.4.1,纯化：自洋葱伯克霍尔德菌琼脂挑取？个以上典型或可疑菌落，接种到营养琼脂斜面上，351培养24h士1h。6.4.2染色镜检：洋葱伯克霍尔德菌为革兰氏阴性杆菌，直或微弯。大小为0.5m1.0m1.5um5.0um。6.4.3过氧化氢酶试验：用接种环挑取纯培养物在洁净载玻片上，滴加1滴2滴3%过氧化氢溶液，立即观察，在半分钟内出现小气泡则为过氧化氢酶阳性6.4.4葡萄糖氧化/发酵(0/F)试验：用1mm接种环挑取少量纯培养物，同时穿刺接种于2支O/F试验管中，其中1支滴加无菌液体石蜡覆盖培养基表面0.3mm一0.5mm以隔绝空气，作为封闭管，另取1支空白的O/P试验管，滴加无菌液体石蜡作为对照管，35士1培养48h士2h,观察。仅开放管变黄产酸的为氧化反应，开放管和封闭管均变黄产酸的为发酵反应，对照管应为阴性。6.4.5赖氨酸脱羧酶试验：挑取少量纯培养物，接种到赖氨酸脱羧酶试验培养基中，351培养48h士2h,观察。黄色为阴性，紫色为阳性。6.5鉴定试验6.5.1生化试验：对符合革兰氏阴性杆菌、过氧化氢酶阳性、O/F试验仅为氧化反应、赖氨酸脱羧酶阳性的纯培养物继续进行鉴定。洋葱伯克霍尔德菌及同属主要细菌的生化特性见表1。表1洋葱伯克霍尔德菌的生化特征与其他主要伯克霍尔德菌的区别洋葱伯克霍鼻疽伯克霍类鼻疽伯克石竹伯克霍唐莒蒲伯克皮氏伯克霍生化反应越南伯克霍尔德菌尔德菌霍尔德菌尔德菌霍尔德菌尔德菌尔德菌精氨酸双水+解酶鼠李糖3